一种提纯透明质酸钠的方法技术

本发明专利技术公开了一种提纯透明质酸钠的方法，包括以下步骤：称取适量的SH粗品，将其溶于质量百分比浓度为0.05％～0.80％的NaOH溶液中，SH粗品的浓度为0.01～0.05g/mL，于30℃～90℃下搅拌10min～90min，之后用分子量截留值不高于10×103的超滤膜超滤n次，n不小于4，每次体积压缩比为1/4～1/6，最后一次超滤所得溶胶在乙醇溶液或在丙酮中沉出，过滤，将固体置于真空干燥箱中抽真空后，得到SH纯品。该方法提纯SH产品质量高，工艺相对简单，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医用材料
，尤其是。
技术介绍
透明质酸钠(SH)是一种天然的高分子直链多糖，由N-乙酰胺基葡萄糖和D-葡萄糖醛酸钠交替连接而成的线性多糖，普遍存在于动物和人体结缔组织及细胞外基质中，被认为是一种填充组织空间、稳定结构、涂层细胞和保护细胞的多糖。SH水溶性好，具有无细胞毒性、无免疫原性、无皮肤刺激性、无遗传毒性和生物可吸收性的生物材料。在过去20年，SH及其衍生物已成为医学美容等领域重要的治疗手段之一，广泛用作防黏连手术植入物、骨关节病治疗首选生物医学材料、药物缓释基质、软组织增大替代物和美容整形材料等。2011年我国的SH年产量在20，000kg左右，且主要以微生物发酵提取为主，相关产品的质量和产量不高。高纯度SH主要从国外大量进口，而国外市场价格昂贵，因此在化妆品和医药领域的推广应用受到一定影响。高纯度和高分子量的医用级SH提纯方法至关重要，成为我国SH产业化面临的重要课题。国内外化妆品卫生级SH的初步提纯，基本采用复杂的有机溶剂沉淀步骤，循环次数过多、试剂用量较大、成本较高，同时也对环境造成严重污染。而对于医用级SH的提纯，需要将残余病毒、蛋白质和核酸等物质去除，目前主要有以下方法:—是采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)络合SH。如专利N0.4784990所描述的提纯方法是通过向链球菌培养液中加入乙醇溶解SH，再加入CTAB沉淀出SH。但是该方法对于残余蛋白的除去效果一般，而且还要除去难以回收利用的CTAB。二是采用离子交换方法分离提纯SH。如用DEAE-纤维素、DEAE-S印ha、dexA-25和D315等阴离子交换树脂吸附SH，日本专利N0.63-012293通过使用大网形状阴离子交换树脂从SH溶液中吸附分子量小于或者等于100万的SH和其他热源物质。另外也可用阳离子交换柱，通过吸附SH溶液中带正电荷的杂蛋白，最终达到去除杂质的效果。专利N0.19970074859则通过耦合大网络形状阴离子交换树脂和凝胶型阳离子交换树脂除去杂质。大多数离子交换柱为一次性使用，成本颇高不利于规模化生产，而且离子交换方法很难除去SH中的病毒类热源物质。三是采用吸附过滤方法分离提纯SH。色素、重金属、氨基酸、核酸等低分子杂质和一些杀菌剂、表面活性剂都可吸附除去。如Cifoneli在专利N0.20020048915中使用活性炭和纤维素粉末混合制成吸附柱分离提纯SH，发酵液经活性炭处理，芳族吸附树脂处理，超滤以及乙醇沉淀得到高纯度SH。但大分子物质会与杂质介质颗粒缠结而堵塞柱子造成流通不平稳，对柱效有较严重的影响。吸附柱选择性不好，经常需要叠加其他装置组合使用，成本也高。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于克服现有技术的不足，提供，该方法提纯透明质酸钠产品质量高，工艺相对简单，成本低。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案:—种提纯透明质酸钠的方法，其特征在于，包括以下步骤:称取适量的透明质酸钠粗品，将其溶于质量百分比浓度为0.05 %?0.80 %的NaOH溶液中，透明质酸钠粗品的浓度为0.01?0.05g/mL,于30°C?90°C下搅拌lOmin?90min，之后用分子量截留值不高于10X103的超滤膜超滤η次，η不小于4，每次体积压缩比为1/4?1/6，最后一次超滤所得溶胶在乙醇溶液或在丙酮中沉出，过滤，将固体置于真空干燥箱中抽真空后，得到透明质酸钠纯品。进一步地:所述透明质酸钠粗品的浓度为0.02g/mL，所述NaOH质量百分比浓度为0.05%?0.40%。所述超滤膜的分子量截留值为10X 103。η 为 5。所述超滤为常温去离子水超滤。所述乙醇溶液中乙醇的质量百分比浓度为95%。所述体积压缩比为1/5。将固体置于真空干燥箱中抽真空的过程为将固体置于60°C真空干燥箱中抽真空15h0所述搅拌采用磁力搅拌方式。本专利技术的有益效果:本专利技术方法工艺操作流程简单，解决了目前透明质酸钠提纯工艺复杂的问题；同时，按照本专利技术方法提纯的透明质酸钠产品纯度高，粘均分子量高，残余蛋白质及核酸含量极低，无病毒，具有医学领域应用前景。【具体实施方式】以下对本专利技术的实施方式作详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本专利技术的范围及其应用。在一种实施例中，一种提纯透明质酸钠(SH)的方法包括以下步骤:称取适量的SH粗品，将其溶于质量百分比浓度为0.05 %?0.80 %的NaOH溶液中，SH粗品的浓度为0.01?0.05g/mL,于30°C?90°C下搅拌lOmin?90min，之后用分子量截留值不高于10X103的超滤膜超滤η次，η不小于4，每次体积压缩比为1/4?1/6，最后一次超滤所得溶胶在乙醇溶液或在丙酮中沉出，过滤，将固体置于真空干燥箱中抽真空后，得到SH纯品。在较佳的实施例中，将浓度为0.02g/mL的SH粗品溶于质量百分比浓度为0.05%?0.40%的NaOH溶液中，于30°C?90°C下揽摔lOmin?90min。更佳地，之后用分子量截留值为?ο X 103的超滤膜超滤5次，每次体积压缩比为1/5。更佳地，最后一次超滤所得溶胶在95%的乙醇中沉出，过滤。更佳地，再将固体置于60°C真空干燥箱中抽真空15h，得到SH纯品。SH粗品可从市场上购买(例如潍坊力德生物工程有限公司的产品)。优选的，超滤方法采用常温去离子水超滤。优选的，采用质量百分比浓度为95%的乙醇溶液沉淀溶胶。搅拌可以采用磁力搅拌方式。测试手段采用紫外吸收光光度法测定葡萄糖醛酸含量。采用粘度法测定粘均分子量分布。采用考马斯亮蓝法测定残余蛋白质含量。采用“中华人民共和国医药行业标准【YY 0308-2004】”的紫外吸收方法测定核酸残余量。采用96孔细胞病变滴定病毒TCID5。方法检测纯品中是否含有病毒。根据本专利技术的配方和工艺条件当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提纯透明质酸钠的方法，其特征在于,包括以下步骤：称取适量的透明质酸钠粗品，将其溶于质量百分比浓度为0.05％～0.80％的NaOH溶液中，透明质酸钠粗品的浓度为0.01～0.05g/mL，于30℃～90℃下搅拌10min～90min，之后用分子量截留值不高于10×103的超滤膜超滤n次，n不小于4，每次体积压缩比为1/4～1/6，最后一次超滤所得溶胶在乙醇溶液或在丙酮中沉出，过滤，将固体置于真空干燥箱中抽真空后，得到透明质酸钠纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴奕光，林锐燕，江长兵，吴灿光，
申请(专利权)人：深圳市阳光之路生物材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44