一种超轻水干细胞培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种以超轻水为溶剂配制的干细胞培养基，所述培养基特点在于是以超轻水为溶剂。本发明专利技术提供的培养基能够快速扩增干细胞，同时又不影响干细胞的潜能，使干细胞扩增速度是常规培养基的3倍以上。并适用于多种干细胞的培养。具有很高的研究应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞培养
，尤其涉及一种以超轻水为溶剂的干细胞培养基。
技术介绍
近年来，使用干细胞的技术被认为是治疗不可治愈疾病的新途径。干细胞是一种能够不断自我更新的细胞，并能增生、分裂、分化成其他各种成熟的细胞。干细胞可按不同的标准进行分类。按它们的来源可分为胚胎干细胞，骨髓干细胞和脐带血干细胞；按它们的增生和分化的能力可分为全潜能、多潜能和单潜能的干细胞；按它们的所能够分化成的细胞可分为神经干细胞、心肌干细胞、血液干细胞等；按它们的成熟的程度可分为胚胎干细胞和成熟组织干细胞。诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞是研究干细胞的作用机制及探索其在人类疾病治疗方法的重要技术。水(H2O)由2个氢原子和I个氧原子组成，氢原子有3个同位素:质量为I的氢(H)，也称氕，与氧原子结合生成轻水(H2O);质量为2的重氢(D)，也称氘，与氧原子结合生成重水(D2O);质量为3的超重氢(T)，也称氚，它含量极微，可忽略不计。普通水中，氘和氕的比率(D/Η)大约是1: 6600，即水中的体积分数为0.015% (150mg/L)。通常把氘体积分数低于0.015%的水称为低氖水(deuterium-depleted water，DDW)，又称超轻水。超轻水中的氘量低于天然水，是采用先进技术，把自然界水中的一部分氘去掉，降低了水中的氘含量。国际最新研究结果和科学试验表明:氘对生命体的生存和繁衍有害，进入生命体后很难代谢出去，高含量的氘对生命体的代谢、遗传、酶素等都有不良影响，是一种导致生物衰老、病变、癌变及至死亡的有害物质。而含氘量偏低的超轻水，进入生命体后具有吸收快、渗透力高、溶解力强的特点，能有效代谢生命体的物质，吸纳有益营养，排除有害物质。这些情况对动物如此，对植物如此，对人类也是如此。超轻水具有促进干细胞增殖的效果，延长干细胞细胞的传代次数，不影响其分化的潜能，具有很高的科研和医学应用价值。
技术实现思路
本专利技术提供一种以超轻水为溶剂的干细胞培养基。本专利技术采用的技术方案如下:—种超轻水干细胞培养基，包括基础培养基、培养基添加剂、超轻水，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。所述培养基添加剂为:人血白蛋白5_25g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白l-10g/L，α I 酸性糖蛋白 0.l_5g/L，a 2-HS-糖蛋白 0.l_5g/L，载脂蛋白 A I 0.05_5g/L，载脂蛋白A II 0.05-5g/L，血液结合素0.01_2g/L，腺苷脱氨酶0.05_5g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.03-2g/L，人转甲状腺素蛋白0.01-2g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品0.01-lg/Lo更进一步地，所述培养基添加剂为:人血白蛋白7-20g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白l_7g/L，α I酸性糖蛋白0.5_3g/L，a 2_HS_糖蛋白0.5_3g/L，载脂蛋白A I0.l_3g/L，载脂蛋白A II 0.l_3g/L，血液结合素0.02-1.5g/L，腺苷脱氨酶0.l_2g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.05-2g/L，人转甲状腺素蛋白0.01-1.5g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品 0.01-0.8g/L0更进一步地，所述培养基添加剂为:人血白蛋白15g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白2g/L，α I酸性糖蛋白0.7/L，a 2_HS_糖蛋白0.7g/L，载脂蛋白A I 0.3g/L，载脂蛋白A II 0.3g/L，血液结合素0.lg/L，腺苷脱氨酶0.15g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.lg/L，人转甲状腺素蛋白0.05g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品0.04g/Lo更进一步地，所用的超轻水含氘量为50ppm。更进一步地，所述的干细胞培养基，其中，所述干细胞培养基pH值为7.2。本专利技术提供的培养基中除常规培养细胞所需培养基成分，特别加入超轻水，以超轻水为溶剂，溶解培养基中其他成分。通过查阅相关文献时发现，超轻水具有促进前成骨细胞MC3T3-E1增殖的效果，对正常前成骨细胞MC3T3-E1细胞克隆形成有促进作用，并且不影响正常细胞前成骨细胞MC3T3-E1细胞核增殖抗原PCNA蛋白的表达水平的效果。所以特别添加到干细胞培养基中，进行干细胞培养。本专利技术提供的一种干细胞培养基，与常规培养基相比，该培养基能大大加速干细胞的生长速度并延长干细胞细胞的传代次数，又不影响其分化的潜能。【附图说明】图1为本专利技术的培养基对人体骨髓间干细胞增殖的加速作用的实验结果。图2为本专利技术的培养基对人体脐带干细胞增殖的加速作用的实验结果。【具体实施方式】本专利技术提供的一种干细胞培养基，对其具体操作方法进行进一步阐述。实施例1，第一种超轻水配置培养基基础培养基的配制:将DMEM/F12培养基干粉溶解于800ml灭菌的超轻水中，加入3g NaHCO3,用pH计调节pH至7.2，定容至100ml0本专利技术所述培养基添加剂为:人血白蛋白15g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白2g/L，α?酸性糖蛋白0.7/L，a2-HS_糖蛋白0.7g/L，载脂蛋白A I 0.3g/L，载脂蛋白AII 0.3g/L，血液结合素0.lg/L，腺苷脱氨酶0.15g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.lg/L，人转甲状腺素蛋白0.05g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品0.04g/Lo用基础培养基溶解上述培养基添加剂，再用pH计调节pH至7.2，用0.22 μ m的滤膜过滤除菌，在4°C下避光保存。实施例2，第二种超轻水配置培养基基础培养基的配制:将DMEM/F12培养基干粉溶解于800ml灭菌的超轻水中，加入3g NaHCO3,用pH计调节pH至7.2，定容至100ml0本专利技术所述培养基添加剂为:人血白蛋白5g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白lg/L, α I酸性糖蛋白0.1/L, a 2_HS_糖蛋白0.lg/L，载脂蛋白A I 0.05g/L，载脂蛋白AII 0.05g/L，血液结合素0.01g/L，腺苷脱氨酶0.05g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.03g/L，人转甲状腺素蛋白0.01g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品0.01g/Lo用基础培养基溶解上述培养基添加剂，再用pH计调节pH至7.2，用0.22 μ m的滤膜过滤除菌，在4°C下避光保存。实施例3，第三种超轻水配置培养基基础培养基的配制:将DMEM/F12培养基干粉溶解于800ml灭菌的超轻水中，加入3g NaHCO3,用pH计调节pH至7.2，定容至100ml0本专利技术所述培养基添加剂为:人血白蛋白25g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白10g/L，α I酸性糖蛋白5/L，a 2_HS_糖蛋白5g/L，载脂蛋白A I 5g/L，载脂蛋白A II 5g/L，血液结合素2g/L，腺苷脱氨酶5g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白2g/L，人转甲状腺素蛋白2g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品lg/L。用基础培养基溶解上述培养基添加剂，再用pH计调节pH至7.2，用0.22 μ m的滤膜过滤除菌，在4°C下避光保存。实施例4，人体骨髓间干细胞培养测试培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以超轻水为溶剂的干细胞培养基，其特征在于，所述培养基组分包括基础培养基、培养基添加剂、超轻水；培养基添加剂为：人血白蛋白5‑25g/L，植物源性重组人血清转铁蛋白1‑10g/L，α1酸性糖蛋白0.1‑5g/L，α2‑HS‑糖蛋白0.1‑5g/L，载脂蛋白AⅠ 0.05‑5g/L，载脂蛋白AⅡ 0.05‑5g/L，血液结合素0.01‑2g/L，腺苷脱氨酶0.05‑5g/L，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.03‑2g/L，人转甲状腺素蛋白0.01‑2g/L，胰岛素或类胰岛素功能替代品0.01‑1g/L。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：柯香文，
申请(专利权)人：大连世纪新源技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21