分离测定阿维A及其基因毒性杂质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，涉及一种分离测定阿维A及其基因毒性杂质的方法。用于固液分离测定阿维A及其基因毒性杂质的试剂组合物为：酸性水溶液体系和有机溶剂；采用上述试剂组合物阿维A及其基因毒性杂质的方法为：取供试样品溶于四氢呋喃，用稀释剂稀释得样品溶液；配制流动相；将所述样品溶液注入分离检测系统中，用所述流动相对所述样品溶液进行洗脱分离得洗脱液；所述洗脱液进入检测器测定。本发明专利技术能同时将阿维A及其基因毒性杂质完全分离，检测中溶剂峰不干扰阿维A及其基因毒性杂质的测定，分离度大于1.5；且本方法简单，灵敏度高，分析时间短，专属性强，重现性好，可以同时有效分离及高灵敏(达ppm级)测定阿维A原料药及制剂中基因毒性杂质含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定阿维A及其基因毒性杂质的方 法。
技术介绍
活性药物成分常包含有杂质，包括原料和合成工艺中所用的中间体的残留物和降 解物。由于它们本质上具有活性，一些原料、中间体或副产物可能是已知的或可疑诱变剂和 /或致癌物。此外，以前不可能进行的基因毒性杂质人类暴露和风险鉴定，随着分析技术的 进步现在也已经成为可能。假设人类暴露的最小化伴随着基因毒性杂质风险的最小化，那 么高敏感度分析法的有效性也伴以对可疑API残留的基因毒性杂质的测量和控制所增加 的关注。 基因毒性杂质（或遗传毒性杂质，Genotoxic Impurity，GTI)是指化合物本身直 接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。潜在基因毒性 的杂质（Potential Genotoxic Impurity，PGI)从结构上看类似基因毒性杂质，有警示性， 基因毒性物质特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可 能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，需在药品的生产中进 行严格控制。所以，实现分离测定阿维A及其基因毒性杂质在阿维A的质量控制、安全性保 证具有极其重要的意义。 阿维A是一种皮肤病用药，临床上用于治疗严重银肩病及角化不良症。其合成工 艺中用到低级醇，与阿维A形成潜在的基因毒性杂质阿维A甲酯和阿维A 丁酯，其结构式如 下： 阿维A甲酯结构式： 阿维A 丁酯结构式： 对于制备阿维A工艺中可能引入的阿维A甲酯和阿维A 丁酯，因其具有基因毒性， 需在阿维A中进行严格控制。到目前为止，还没有公开的方法报道可高灵敏快速分离测定 阿维A及其基因毒性杂质。因此开发一种高灵敏快速有效分离测定阿维A及其基因毒性杂 质的方法，对于实现对阿维A中阿维A甲酯和阿维A 丁酯的分离及ppm级检测和控制，在阿 维A的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种分离测定阿维A及其基因毒性杂质的试剂 组合物及方法，该方法可快速同时实现阿维A及其基因毒性杂质的方法的分离和检测，精 密度和灵敏度高，为阿维A原料药和制剂的质量标准的制定及提高有重要的意义。 为实现上述目的，本专利技术的技术方案为： 用于固液分离测定阿维A及其基因毒性杂质的试剂组合物，由以下试剂组成： 试剂A :酸性水溶液体系； 试剂B :有机溶剂； 所述酸性水溶液体系中冰乙酸的体积百分比为0. 5-1. 0% ; 所述酸性水溶液体系与有机溶剂的体积比为：4_8 % :92-98 %。 所述酸性水溶液体系中冰乙酸的体积百分比为0. 5-1. 0%，在此浓度范围内均能 很好地分离阿维A及其基因毒性杂质。 进一步，所述有机溶剂为甲醇、乙腈和乙醇中的一种或多种。 作为一种优选，所述有机溶剂为甲醇。 本专利技术的目的之二在于提供一种用所述试剂组合物分离测定阿维A及其基因毒 性杂质的方法，具体包括以下步骤： 1)配制供试样品溶液：取供试样品溶于四氢呋喃，再用有机溶剂稀释，得样品溶 液； 2)配制流动相： a配制所述试剂A得流动相A ; b所述试剂B做流动相B ; 3)将步骤1)所述样品溶液注入分离检测系统中，用步骤2)所述流动相对步骤1) 所述样品溶液进行洗脱分离得洗脱液； 4)步骤3)所述洗脱液进入检测器测定。 进一步，步骤1)所述供试样品与四氢呋喃的体积比为35-45% :5-15%。 进一步，步骤1)所述样品溶液中阿维A的浓度为0. 3mg/ml-0. 5mg/ml。 进样量和样品浓度会影响色谱柱分离效果和分析结果。进样量影响：进样量过大 会造成色谱柱超负荷，多组分色谱峰重叠，分离效果差；进样量过少，又会使含量低的组分 因检测器灵敏度不够而不出峰。最大允许的进样量应控制在峰高或峰面积与进样量呈线性 关系的范围内。 进一步，步骤3)所述流动相流速为0. 5-1. 5ml/min。进样速度也会影响色谱柱分 离效果和分析结果。进样速度的影响：进样速度慢则会使色谱峰形加宽，影响分离效果。 所述杂质包括阿维A甲酯和/或阿维A 丁酯，具体名称及结构为： 阿维A甲酯结构式： 阿维A 丁酯结构式： 上述方法能快速同时实现阿维A与其基因毒性杂质的分离和检测，精密度和灵敏 度高，可在20分钟实现分离和检测。提供了现有技术未能解决的阿维A与其基因毒性杂质 的高灵敏测定问题，从而确保了阿维A及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效。 本专利技术的目的还在于提供一种高效液相色谱法分离测定阿维A及其基因毒性杂 质的方法，具体包括以下步骤： 1)配制空白溶液：取四氢呋喃用有机溶剂稀释，得空白溶液； 2)配制供试样品溶液：取供试样品溶于四氢呋喃，再用有机溶剂稀释，得供试样 品溶液； 3)配制基因毒性杂质对照溶液：取阿维A基因毒性杂质对照品，用有机溶剂稀释 溶解制成各个阿维A基因毒性杂质溶液（ppm级），得对照溶液； 4)分别取步骤1)所述空白溶液、步骤2)所述供试样品和步骤3)所述对照溶液进 样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定阿维A及其基因毒性杂质的保留时间，按杂 质限度法计算供试样品中阿维A及其基因毒性杂质的含量。 检测中溶剂峰不干扰阿维A中阿维A甲酯和阿维A 丁酯的测定，且阿维A甲酯、阿 维A 丁酯和阿维A均能有效分离，分离度大于1. 5。 进一步，步骤4)所述高效液相色谱分析采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的 色谱柱，色谱柱柱箱温度为25_35°C ;以酸性水溶液体系和有机溶剂作为流动相。 十八烷基硅烷键合硅胶，完全球型、表面光滑的多孔硅胶，具有非常高的表面键合 覆盖率。一般用在高效液相色谱中的固定相。该硅胶整体柱键合效果良好，具有较好的反 相色谱性能，在pH 2-8之间稳定性好，柱压降、柱效受流速影响较小，可以达到快速、有效 的分离。 进一步，步骤4)所述检测器的检测波长为350-380nm。 进一步，所述色谱柱的规格为4. 6 X 150mm，5 μ m。 本专利技术的有益效果在于：本专利技术用酸性水溶液体系及有机溶剂为流动相采用高效 液相色谱法分离测定阿维A及其基因毒性杂质，该方法在20分钟内可同时将阿维A及其基 因毒性杂质完全分离并进行检测；检测中溶剂峰不干扰阿维A中阿维A甲酯和阿维A 丁酯 的测定，且阿维A甲酯、阿维A 丁酯和阿维A均能有效分离，分离度大于1. 5 ;本专利技术中方法 简便可行，灵敏度高（达ppm级），分析时间短，专属性强，重现性好，可以有效测定阿维A及 其基因毒性杂质含量，提供了现有技术未能解决的阿维A及其基因毒性杂质的分离测定问 题，从而确保了阿维A及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效。【附图说明】 图1空白溶剂的高效液相色谱图。 图2阿维A的高效液相色谱图。 图3阿维A及阿维A甲酯及阿维A 丁酯的混合溶液高效液相色谱图。 图4阿维A甲酯及阿维A 丁酯检测限测定的高效液相色谱图。 图5阿维A中加入检测限浓度的阿维A甲酯及阿维A 丁酯的高效液相色谱图。【具体实施方式】 以下将参照附图，对本专利技术的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具 体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本专利技术的内容进行说 明，但并不是本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于固液分离测定阿维A及其基因毒性杂质的试剂组合物，其特征在于，由以下试剂组成：试剂A：酸性水溶液体系；试剂B：有机溶剂；所述酸性水溶液体系中冰乙酸的体积百分比为0.5‑1.0％；所述酸性水溶液体系与有机溶剂的体积比为：4‑8％：92‑98％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈红梅，
申请(专利权)人：重庆华邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85