本发明专利技术提供了一种双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法，包括如下步骤：S1.湿法消解样品；S2.将S1步骤中所得消解物先进行一次浊点萃取后，再采用HCl和H2O2的混合溶液作为反萃取剂，进行二次萃取富集硒；S3.采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定样品中硒的含量。本发明专利技术首次实现双浊点萃取与HG-AFS的联用应用于食品中硒的检测，根据本发明专利技术提供的方法，检出限为0.16μg/L，RSD为4.04%，方法准确性和精密度高，检测限低，尤其适用于螺旋藻、海带和茶叶等食品中痕量硒的测定。
【技术实现步骤摘要】
双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法
本专利技术属于食品检测
，更具体地，特别涉及一种双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法。
技术介绍
硒(Selenium)是生命必需的微量元素之一，是第21位氨基酸硒代半胱氨酸、硒代甲硫氨酸和含硒酶的必需组分。硒在人体免疫系统、抗癌、抗氧化等方面发挥重要作用。但硒在体内的安全阈值很窄，每天硒摄取量低于50μg就会缺硒；大于200μg就可能出现中毒，需建立准确、灵敏的食品中硒含量分析方法。由于样品基质复杂，且硒含量较少时，还应结合一定预富集和分离技术。双浊点萃取(dualcloudpointextraction,dCPE)是以一次浊点萃取(CPE)技术为基础，通过加入反萃取剂，再次经过恒温和离心，将浊点萃取物中的待测成分由表面活性剂富集相转移到水相，并进行检测的方法。dCPE最早由尹学博提出，与毛细管电泳（CE）联用，成功用于形态汞的分离富集和检测。Zhao、Arainz等分别将dCPE与电感耦合等离子体发射光谱（ICP-OES）、火焰原子吸收法（FAAS）联用，测定Cd、Co、Ni、Pb、Zn、Cu、As等金属离子。在硒的检测方面，CPE与分光光度法、荧光分光光度法、ICP-MS和AAS建立联用，尚未有CPE、dCPE和氢化物发生-原子荧光法（HG-AFS）联用并应用于食品中硒的检测中的报道。CPE与HG-AFS联用遇到的难题在于一次浊点萃取后引入HG-AFS的表面活性剂，在HG过程会产生大量泡沫，使溶液进入原子化器，以致无法检测。加入消泡剂可消除表面活性剂的影响，但是萃取后硒络合物稳定性较高，与硼氢化钾不能完全反应生成H2Se，测定结果偏低。双浊点萃取中的反萃取剂可以破坏金属离子络合物，将金属离子反萃入亲水相中，可去除大部分表面活性剂，克服传统CPE缺点，实现与HG-AFS的联用。对于目前食品中硒的检测来说，由于基质复杂，选择何种反萃取剂对于检测结果的影响非常大，因此，本专利技术尝试解决的技术问题在于确定合适的反浊点萃取条件，并与HG-AFS进行联用，优化反萃取率的同时，提高检测结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于根据现有的食品中硒的检测方法的不足，提供了一种双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法。本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术提供了双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法，包括如下步骤：S1.湿法消解样品；S2.将S1步骤中所得消解物先进行一次浊点萃取后，再采用HCl和H2O2的混合溶液作为反萃取剂，进行二次萃取富集硒；S3.采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定样品中硒的含量。本专利技术通过研究发现，将HCl+H2O2采用一定浓度进行混合，该混合液作为反萃取剂，并应用于萃取富集硒，显著提高萃取率，在最优的条件下，萃取率达到100%，显著提高现有的食品中痕量硒的富集及相应的检测灵敏度。优选地，所述S2中为加入（8~24%）HCl和（5~25%）H2O2的混合溶液，混合体积比为1:1。更优选地，所述S2中为加入16%HCl和20%H2O2的混合溶液。二次浊点萃取过程加入反萃取剂是为了破坏金属鳌合物，将金属离子释放出来，从而萃取到水相。在实验中，选择盐酸作为反萃取剂，因其是氢化物发生过程的酸性介质。在第一次浊点萃取反转离心管弃去水相后，向富胶相加入8%~24%HCl溶液3mL，进行反萃取操作，研究发现16%（v/v）HCl反萃取效果最佳，但其萃取效率仅有50%。为了提高萃取率，在16%（v/v）HCl中加入5%~25%(v/v)的氧化剂H2O2，实验结果显示，加入20%H2O2萃取率可达100%，对于食品中痕量硒的富集和检测有着非常大的影响。优选地，所述S2包括如下步骤：S21.取S1步骤中所得消解样品溶液于离心管中，依次加入pH为1.0~5.0的HCl-NaAc缓冲溶液1~3ml、浓度为5g/L的吡咯啶二硫代氨基甲酸铵0.6~1.4ml和质量体积浓度为5%的TritonX-114溶液0.8~1.2ml，用水定容，摇匀，加热并趁热离心，再于冰水浴中冷却，弃去水相，得萃取物；S22.将S21中所得萃取物加入HCl+H2O2混合溶液，摇匀，加热，趁热离心后，再于冰水浴中冷却后取上层溶液，得反萃取物；所述S21中定容体积与样品质量比为100:1。本实验采用双浊点萃取技术分离富集样品，与HG-AFS联用测定食品中痕量的Se，用吡咯啶二硫代氨基甲酸铵（APDC）作鳌合剂，TritonX-114作萃取剂，HCL+H2O2混合液作反萃取剂，建立了食品中痕量硒含量的测定方法。优选地，所述S21中HCl-NaAc缓冲溶液的pH为4.0，浓度为1g/LAPDC1.2ml和质量体积浓度为5%TritonX-114溶液1.1ml。本专利技术通过研究发现，缓冲溶液pH对疏水性螯合物形成和稳定性的有很大的影响。当所述缓冲溶液的pH为1.0~5.0，用量为1~3ml时，其荧光响应值处于较高数值范围中，当pH值为4.0时，荧光值最大且稳定。螯合剂APDC的作用是与Se（Ⅳ）形成螯合物，使Se（Ⅳ）可萃取到胶束相。1g/L的APDC用量在0.6~1.4ml范围，对应的荧光值处于较大数值范围内。APDC用量过多时，表面活性剂的量一定时，富胶相中的APDC增加，螯合物溶解量减小，导致荧光值减小。表面活性剂TritonX-114的浊点温度稍高于室温，且密度较大，适宜于相分离。随着5%TritonX-114用量的增加，荧光值提高，但当萃取体系中TritonX-114的用量增加到1ml，继续增大由于体系粘度有较大的增加，影响分相过程从而导致荧光值下降，在0.8ml~1.2ml用量范围内荧光值处于较高范围。冰水浴可使表面活性剂相变成得粘滞而易于相分离。结果表明冰浴10min后，两相便很容易分离。优选地，所述S21和S22中加热温度为30~70℃。更优选地，所述S21和S22中加热温度为51℃。为了在尽可能低的平衡温度和最短时间内达到完全萃取的目的，实验考察了不同温度和时间对Se萃取率的影响。结果表明，温度在30℃~55℃之间荧光值呈上升趋势，当温度超过55℃时，因螯合物分解致使荧光值减小。平衡时间对于样品充分反应也起到一定作用，时间长短影响表面活性剂从水溶液中析出程度。实验表明平衡时间15min可达到最佳的萃取率。优选地，所述S21和S22中加热时间为15min，离心时间为10min，转速为3500r/min。当溶液加热到浊点的温度时，表面活性剂从水溶液中析出，形成富胶束相，通过静置或离心操作可加速分开富胶束相与水相，但如果离心时间过长，因体系温度的降低将导致表面活性剂相的重新溶解，导致相分离逆转，萃取率下降。而离心时间过短，相分离又不完全。而当转速为3500r/min，离心时间为10min时相分离最好，萃取率最高。优选地，所述S1包括如下步骤：S11.称取样品，加入混酸进行消解，当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至烧干；S12.将S11中所得消解物冷却后，加入浓盐酸继续消解，赶酸至1ml时，停止消解；S13.待S12中消解物冷却后，转移到离心管中，并加水进行稀释；所述S11中样品与混酸的固液比本文档来自技高网...
【技术保护点】
双浊点萃取‑氢化物发生‑原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1. 湿法消解样品；S2. 将S1步骤中所得消解物先进行一次浊点萃取后，再采用HCl和 H2O2的混合溶液作为反萃取剂，进行二次萃取富集硒；S3. 采用氢化物发生‑原子荧光光谱法测定样品中硒的含量。
【技术特征摘要】
1.双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.湿法消解样品；S2.将S1步骤中所得消解物先进行一次浊点萃取后，再采用HCl和H2O2的混合溶液作为反萃取剂，进行二次萃取富集硒；S3.采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定样品中硒的含量；所述S2中为加入16%HCl和20%H2O2的混合溶液，混合体积比为1:1；所述S2包括如下步骤：S21.取S1步骤中所得消解样品溶液于离心管中，依次加入pH为1.0~5.0的HCl-NaAc缓冲溶液1~3ml、浓度为1g/L的吡咯啶二硫代氨基甲酸铵0.6~1.4ml和质量体积浓度为5%的TritonX-114溶液0.8~1.2ml，用水定容，摇匀，加热并趁热离心，再于冰水浴中冷却，弃去水相，得萃取物；S22.将S21中所得萃取物加入HCl和H2O2的混合溶液，摇匀，加热，趁热离心后，再于冰水浴中冷却后取上层溶液，得反萃取物；所述S21中定容体积与样品质量比为100:1。2.根据权利要求1所述的双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法，其特征在于，所述S21中HCl-NaAc缓冲溶液的pH为4.0，浓度为1g/LAPDC1.2ml和质量体积浓度为5%TritonX-114溶液1.1ml。3.根据权利要求2所述的双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测...
【专利技术属性】
技术研发人员：王梅，杨冰仪，钟怡洲，王美霞，张泽华，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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