水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用，所述生物碱为吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱；本发明专利技术所述的水杨酸糖脂化合物对长春花愈伤组织细胞中吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱具有累积作用，该化合物为新药的研发提供了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种水杨酸糖脂衍生物的应用，特别涉及水杨酸糖脂衍生物在积累长 春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用。 (二）
技术介绍
长春花原产于非洲东部，目前作为药用植物和观赏植物在我国的不少地区都有 种植。长春花的主要药用成分为吲哚生物碱。其中长春碱（vinblastine)和长春新碱 (vincfistine)是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物，可用于治疗何杰金氏病、恶性 淋巴肿瘤、急性白血病、绒毛上皮细胞癌等疾病，其硫酸盐已广泛应用于临床；另外，阿玛碱 (ajmalicine)可用于治疗高血压、心率不齐等疾病；蛇根碱（serpentine)可作为镇痛药； 而长春质碱（catharanthine)不仅具有抗菌止血、利尿和降血糖等作用，而且还是长春碱、 长春新碱等的合成前体。 长春花植物组织中吲哚生物碱的含量非常低。特别是具有抗肿瘤活性的长春碱和 长春新碱的含量更低。长期以来，人们试图通过采用组织和细胞 培养方法，并结合优化培养条件、前体饲喂或用各种调节因子进行处理等来提高吲哚生物 碱的含量，但效果都不甚理想。 现有技术中，水杨酸糖脂衍生物主要用于植物诱抗剂，本专利技术提供了一种水杨酸 糖脂衍生物的新应用，即在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱的应用。 (三）
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种水杨酸糖脂衍生物的新应用，即在积累长春花愈伤组织细 胞内生物碱中的应用。 本专利技术采用的技术方案是： 本专利技术提供一种式（I )所示水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生 物碱的应用， 式（I )中R为糖基，优选为下列之一：全乙酰基葡萄糖基、全乙酰基半乳糖基、全 乙酰基乳糖基或全乙酰基麦芽糖基。 进一步，所述的应用是指将式（I )所示水杨酸糖脂衍生物作为添加剂用于长春 花愈伤组织细胞的培养，从而富集长春花愈伤组织细胞内生物碱。 toon] 进一步，更优选所述式（I )所示水杨酸糖脂衍生物为下列之一： 进一步，所述生物碱为吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱。 本专利技术所述方 法为：将长春花愈伤组织细胞接种至含水杨酸糖脂衍生物和蔗糖的MS培养液中，于25°C、 80-lOOr · mirf1、摇床光照培养，获得富集生物碱的长春花愈伤组织细胞；所述MS培养液中 水杨酸糖脂衍生物终浓度I mg/L，蔗糖终浓度3wt%，pH 6. 0(灭菌前）。所述水杨酸糖脂 衍生物以Ippm-IOppm水溶液的形式加入。 本专利技术所述式（I )所示水杨酸糖脂衍生物的制备方法参照臧洪俊；李正名；倪 长春；沈宙；范志金；刘秀峰，水杨酸类糖酯化合物的合成及其生物活性，高等学校化学学 报，2006, 27, 1877-1880。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：本专利技术所述的水杨酸糖脂化合 物对长春花愈伤组织细胞中吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱具有累积作用，该化合物为新药 的研发提供了基础；水杨酸糖脂化合物对长春质碱和阿玛碱的积累有不同程度的促进作 用，特别是化合物（I -1)对阿玛碱积累的促进效果非常明显，最高可达正常细胞的19倍 多；对长春质碱的积累的促进作用也可以达到正常细胞的7. 7倍，化合物（I -4)对长春质 碱积累的促进作用也可以达到4. 4倍。 (四）【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于 此： 本专利技术实施例所述化合物（I -1)-化合物（I -4)的制备方法参照臧洪俊；李正 名；倪长春；沈宙；范志金；刘秀峰，水杨酸类糖酯化合物的合成及其生物活性，高等学校化 学学报，2006, 27, 1877-1880。 实施例1 将化合物（I -1)-化合物（I -4)分别溶于去离子水，制成Ippm和IOppm的水 溶液。 长春花愈伤组织细胞置于含有50mL培养液的250mL三角瓶中，接种量为1. 5~ 2g/瓶。培养液为含化合物（I -I)-化合物（I -4)各I mg/L(以水溶液的形式加入）， 3wt%蔗糖，pH 6.0(灭菌前）的MS培养液，于25°C、摇床（IOOr .rniiTl光照12h培养。培 养后的长春花愈伤组织细胞（即培养液过滤后的培养物）用体积浓度80%甲醇水溶液匀 浆，抽提过夜，减压蒸干甲醇，水相pH值调至3。再以石油醚萃取，调水相pH值至8. 5,以二 氯甲烷萃取，有机层于280_测OD值，减压蒸干二氯甲烷后可得长春花各类吲哚生物碱混 合物即为总碱，称重，以丙酮为对照（即表1中CK)。 将所得吲哚总碱用甲醇定容至I mL，过0. 22 μ ΠΓ滤膜，采用RP-HPLC法对其中的长 春质碱和阿玛碱进行色谱分析，以峰面积外标法定量。所有数据均为3次平行重复测定的 结果，标准偏差不超过10%。 C18硅胶柱（250mmX4. 6mm，7 μπι);测定波长280nm ;流动相是甲醇： 0· 005mol · T1NH4H2PO4= 7 :3 (V/V，pH 7. 0);柱温 28°C，流速 1.0 mL · mirT1。所有数据均为 3次平行重复的平均值。 表1化合物（I -1)-化合物（I -4)对长春花愈伤组织中吲哚总碱的积累（g) 与对照相比，化合物（I -1)和（I -3)均抑制了愈伤组织吲哚总碱的积累，但在 两种测试浓度下，它们抑制率的变化趋势不同，化合物（I -1)在高浓度时对吲哚总碱积累 的抑制程度也高（Ippm时抑制了 7 %，IOppm时抑制了 21 %，百分率均是与对照比较得出， 下同），而化合物（I -3)对吲哚总碱积累的抑制程度在这两种浓度下变化不大（Ippm时 抑制了 20%，IOppm时抑制了 17%);可以看出化合物（I -2)明显促进吲噪总喊的积累， 而且浓度增加，促进程度也明显增加（Ippm时促进了 15%，IOppm时促进了 107%);化合物 (I -4)在浓度为Ippm是可以促进吲哚总碱的积累，而浓度为IOppm时则表现为抑制作用。 表2化合物（I -1)-化合物（I -4)对长春花愈伤组织中长春质碱的积累（g) 注：A :大部分长春花已经变黄，无棕色；B : 1/3的长春花变成棕色 表3化合物（I -1)-化合物（I -4)对长春花愈伤组织中阿玛碱的积累（g) 注：A :大部分长春花已经变黄，无棕色；B :1/3的长春花变成棕色 由表可知，化合物（I -1)-( I -4)系列对长春质碱和阿玛碱的积累有不同程度 的促进作用，特别是化合物（I -1)对阿玛碱积累的促进效果非常明显，最高可达正常细胞 的19倍多；对长春质碱的积累的促进作用也可以达到正常细胞的7. 7倍。化合物（I -4) 对长春质碱积累的促进作用也可以达到4. 4倍。【主权项】1. 一种式（I)所示水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应 用，式（I)中R为糖基。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的应用是指将式（I)所示水杨酸糖脂 衍生物作为添加剂用于长春花愈伤组织细胞的培养，从而富集长春花愈伤组织细胞内生物 喊。3. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述式（I)所示水杨酸糖脂衍生物为下列 之一：4. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述生物碱为吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱。5. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式(Ⅰ)所示水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用，式(Ⅰ)中R为糖基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘幸海，杨明艳，杨二冰，臧洪俊，王勇，李正名，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33