用作诱发抗原特异性T细胞反应的免疫原性增强剂的融合蛋白制造技术

本申请公开一种用作增强抗原特异性T细胞反应的免疫原增强剂的融合蛋白。所述融合蛋白包含：(a)抗原呈递细胞(APC)结合域或CD91受体结合域；(b)蛋白转导域；及(c)病原体的抗原，其中，所述APC结合域或CD91受体结合域位于所述融合蛋白的N端，且所述病原体的抗原位于所述蛋白转导域的C端。所述蛋白转导域选自：(i)融合多肽，其包含T细胞致敏信号转导肽、连接子及转位肽；(it)T细胞致敏信号转导肽；及(iii)长度为34-112个氨基酸残基的转位肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用作诱发抗原特异性T细胞反应的免疫原性增强剂的融合蛋白
本专利技术主要涉及融合蛋白，并且更具体地涉及增强T细胞介导的免疫反应的融合蛋白。
技术介绍
分子生物学已使亚单位疫苗的生产成为可能，其中，免疫原为母蛋白或母复合物的片段或亚单位。所需要的是可诱发T细胞致敏反应又能足够灵活的并入来自许多感染源的毒株的序列的稳定疫苗的开发。
技术实现思路
一方面，本专利技术涉及一种融合蛋白，其包含：(a)抗原呈递细胞(APC)结合域或CD91受体结合域，其位于所述融合蛋白的N端；(b)蛋白转导域，其位于所述APC结合域或CD91受体结合域的C端，所述蛋白转导域选自：(i)融合多肽，其包含T细胞致敏信号转导肽、连接子及转位肽，其中：(1)所述T细胞致敏信号转导肽位于所述融合多肽的N端；(2)所述连接子包含SEQIDNO:15，其连接所述T细胞致敏信号转导胜肽与所述转位肽；且(3)所述转位肽的长度为34-112个氨基酸残基，且包含与SEQIDNO:3、SEQIDNO:20或SEQIDNO:4至少90％相同的氨基酸序列；(ii)T细胞致敏信号转导肽；及(iii)长度为34-112个氨基酸残基的转位肽，其包含与SEQIDNO:3、SEQIDNO:20或SEQIDNO:4至少90％相同的氨基酸序列；及(c)病原体的抗原，其位于所述蛋白转导域的C端；其中：所述T细胞致敏信号转导肽的长度为28-53个氨基酸残基，且包含与SEQIDNO:31至少90％相同的氨基酸序列，其中Xaa8为I或L；Xaa10为V、F或A；Xaa11为M或L；Xaa17为L或I；且若所述蛋白转导域为所述转位肽(biii)，则所述APC结合域或CD91受体结合域无假单胞菌外毒素A(PE)结合域I的氨基酸序列。在本专利技术的一个实施方式中，所述APC结合域或所述CD91受体结合域为包含与选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7及SEQIDNO:8的序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。或者，所述APC结合域选自受体相关蛋白-1(RAP1)区域III、α-2-巨球蛋白受体相关蛋白(A2M)、HIV-Tat、热休克蛋白(HSP)及假单胞菌外毒素A(PE)结合域I。在本专利技术的另一个实施方式中，所述融合蛋白无假单胞菌外毒素A(PE)结合域I的氨基酸序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述融合蛋白进一步包含位于所述融合蛋白C端的内质网(ER)滞留序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述内质网滞留序列包含氨基酸序列Lys-Asp-Glu-Leu(SEQIDNO:14)。所述ER滞留序列可包含选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:16至SEQIDNO:19的序列。或者，所述ER滞留序列可由选自SEQIDNO:16至SEQIDNO:19的序列组成。在本专利技术的另一个实施方式中，若所述抗原含有10个或更多抗原决定簇，则所述融合蛋白的C端无内质网滞留序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述蛋白转导域为融合多肽(bi)。在本专利技术的另一个实施方式中，所述蛋白转导域为T细胞致敏信号转导肽(bii)。在本专利技术的另一个实施方式中，所述融合蛋白在所述蛋白转导域与所述抗原之间进一步包含另一连接子，所述另一连接子包含SEQIDNO:15。在本专利技术的另一个实施方式中，所述蛋白转导域为转位肽(biii)。在本专利技术的另一个实施例方式中，所述融合蛋白在所述APC结合域或所述CD91受体结合域与所述转位肽之间进一步包含另一连接子，所述另一连接子包含SEQIDNO:15。在本专利技术的另一个实施方式中，所述蛋白转导域包含SEQIDNO:30。在本专利技术的另一个实施方式中，所述APC结合域包含与选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7及SEQIDNO:8的序列至少95％相同的氨基酸序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述APC结合域或所述CD91受体结合域为包含选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7及SEQIDNO:8的氨基酸序列的多肽。在本专利技术的另一个实施方式中，所述T细胞致敏信号转导肽包含与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少90％相同的氨基酸序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述T细胞致敏信号转导肽包含选自SEQIDNO:1及SEQIDNO:2的氨基酸序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述转位肽包含选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:20及SEQIDNO:4的氨基酸序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述转位肽的长度为34-61个氨基酸残基。在本专利技术的另一个实施方式中，前述融合蛋白的蛋白转导域具有以下特征：(i)所述T细胞致敏信号转导肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列；且(ii)所述转位肽包含与SEQIDNO:3至少95％相同的氨基酸序列。所述T细胞致敏信号转导肽显示出诱发识别并结合于T细胞上CD28受体的K1(X)2E3(X)4(X)5Y6P7P8P9Y10氨基酸序列(SEQIDNO:32)的抗体的特征，其中，(X)2为I或L；(X)4为V、F或A；且(X)5为M或L。另一方面，本专利技术涉及一种融合蛋白，其由下列各项所组成：(a)抗原呈递细胞(APC)结合域或CD91受体结合域，其位于所述融合蛋白的N端；(b)蛋白转导域，其位于所述APC结合域或CD91受体结合域的C端，所述蛋白转导域选自：(i)融合多肽，其包含T细胞致敏信号转导肽、连接子及转位肽，其中：(1)所述T细胞致敏信号转导肽位于所述融合多肽的N端；(2)所述连接子包含SEQIDNO:15，其连接所述T细胞致敏信号转导肽与所述转位肽；且(3)所述转位肽的长度为34-112个氨基酸残基，其包含与SEQIDNO:3、SEQIDNO:20或SEQIDNO:4至少90％相同的氨基酸序列；(ii)T细胞致敏信号转导肽；及(iii)34-112个氨基酸残基长度的转位肽，，其包含与SEQIDNO:3、20或4号至少90％相同的氨基酸序列；及(c)病原体的抗原，其位于所述蛋白转导域的C端；其中：所述T细胞致敏信号转导肽的长度为28-53个氨基酸残基，且包含与SEQIDNO:31至少90％相同的氨基酸序列，其中，Xaa8为I或L；Xaa10为V、F或A；Xaa11为M或L；Xaa17为L或I；且若所述蛋白转导域为所述转位肽(biii)，则所述APC结合域或所述CD91受体结合域无假单胞菌外毒素A(PE)结合域I的氨基酸序列。所述抗原呈递细胞(APC)可以选自树突细胞、巨噬细胞、B细胞及单核细胞。在本专利技术的一个实施方式中，所述APC的细胞膜包含CD91受体。另一方面，本专利技术涉及一种疫苗组合物，其包含：(a)治疗有效量的前述融合蛋白；及(b)佐剂。所述佐剂为抗原传送剂或免疫增效剂。在本专利技术的一个实施方式中，所述疫苗组合物包含抗原传送剂而无免疫增效剂。此外，在另一方面，本专利技术涉及一种诱导增强的病原体抗原特异性T细胞反应的方法，其包括：对有此需要的受试者施用包含治疗有效量的前述融合蛋白的疫苗组合物；以及由此诱导增强的病原体抗原特异性T细胞反应。此外，在另一方面，本专利技术涉及一种杀死通过疾病细胞的细胞膜上的第I类主要组织相容性复合体(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白，其包含：(a)抗原呈递细胞(APC)结合域或CD91受体结合域，其位于所述融合蛋白的N端；(b)蛋白转导域，其位于所述APC结合域或CD91受体结合域的C端，所述蛋白转导域选自：(i)融合多肽，其包含T细胞致敏信号转导肽、连接子及转位肽，其中：(1)所述T细胞致敏信号转导肽位于所述融合多肽的N端；(2)所述连接子包含SEQ ID NO:15，其连接所述T细胞致敏信号转导肽与所述转位肽；且(3)所述转位肽的长度为34‑112个氨基酸残基，且包含与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:4至少90％相同的氨基酸序列；(ii)T细胞致敏信号转导肽；及(iii)长度为34‑112个氨基酸残基的转位肽，其包含与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:4至少90％相同的氨基酸序列；及(c)病原体的抗原，其位于所述蛋白转导域的C端；其中：所述T细胞致敏信号转导肽的长度为28‑53个氨基酸残基，且包含与SEQ ID NO:31至少90％相同的氨基酸序列，其中，Xaa8为I或L；Xaa10为V、F或A；Xaa11为M或L；Xaa17为L或I；且若所述蛋白转导域为转位肽(biii)，则所述APC结合域或CD91受体结合域无假单胞菌外毒素A(PE)结合域I的氨基酸序列。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.12.05 US 61/733,8791.一种融合蛋白，其包含：(a)抗原呈递细胞(APC)结合域或CD91受体结合域，其位于所述融合蛋白的N端，所述APC结合域或CD91受体结合域选自受体相关蛋白-1(RAP1)区域III、α-2-巨球蛋白受体相关蛋白(A2M)、HIV-Tat、热休克蛋白(HSP)及假单胞菌外毒素A(PE)结合域I；(b)蛋白转导域，其位于所述APC结合域或CD91受体结合域的C端，所述蛋白转导域选自由下述(i)及(ii)所组成的群组：(i)融合多肽，其由T细胞致敏信号转导肽、连接子及PE转位肽所组成，其中：(1)所述T细胞致敏信号转导肽位于所述融合多肽的N端，其由SEQIDNO:31、SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列所组成，其中，所述SEQIDNO:31的Xaa8为I或L；Xaa10为V、F或A；Xaa11为M或L；Xaa17为L或I；(2)所述连接子由SEQIDNO:15的氨基酸序列所组成，其连接所述T细胞致敏信号转导肽与所述PE转位肽；且(3)所述PE转位肽的长度为34-112个氨基酸残基，且包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:20或SEQIDNO:4的氨基酸序列；及(ii)T细胞致敏信号转导肽，其由SEQIDNO:31、SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列所组成，其中，所述SEQIDNO:31的Xaa8为I或L；Xaa10为V、F或A；Xaa11为M或L；Xaa17为L或I；及(c)病原体的抗原，其位于所述蛋白转导域的C端。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述受体相关蛋白-1(RAP1)区域III、α-2-巨球蛋白受体相关蛋白(A2M)、HIV-Tat、热休克蛋白(HSP)及假单胞菌外毒素A(PE)结合域I分别为包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的多肽、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的多肽、包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的多肽、包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的多肽及包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的多肽。3.如权利要求1所述的融合蛋白，进一步包含位于所述融合蛋白的C端的内质网滞留序列。4.如权利要求3所述的融合蛋白，其中，所述内质网滞留序列选自由SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18及SEQIDNO:19所组成的群组的氨基酸序列。5.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，若...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴嘉茂，章修纲，
申请(专利权)人：生控基因疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71