本发明专利技术公开了基于与结直肠癌相关的基因PCDHB3而开发得到的一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒，该试剂盒包括以下试剂中的至少一种：用于检测PCDHB3基因表达水平的引物对、用于检测PCDHB3基因甲基化水平的引物对、用于检测PCDHB3蛋白含量的试剂。本发明专利技术通过对结直肠癌进行差异表达基因筛选，发现了位于人类染色体5q31的PCDHB3是一个与结直肠癌密切相关的基因。PCDHB3的mRNA和蛋白表达水平在结直肠癌病人的肿瘤组织中显著下调，而该下调与基因启动子区域CpG碱基高度甲基化密切相关。同时，在TNM III-IV期结直肠癌病人中的预后分析发现，PCDHB3在肿瘤细胞高水平表达或肿瘤细胞核膜表达指示良好预后。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子诊断领域，具体涉及基于与结直肠癌相关的基因 PCDHB3而开发 得到的一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒。
技术介绍
目前，结直肠癌是世界范围内最常见的肿瘤之一，每年的新发病例数超过百万，死 亡人数超过60万。在中国，结直肠癌死亡率为7. 25/10万，仅次于肺癌、肝癌、胃癌和食管 癌。近年来，随着我国人民生活水平的提高，膳食结构改变、缺乏运动、吸烟等因素，结直肠 癌发病率呈上升趋势，特别是在沿海经济发达的大中城市，结直肠癌发病率已达到甚至超 过西方发达国家的平均水平，成为恶性肿瘤死亡的重要原因，严重危害我国人民健康。 nCC/AJCC将结直肠癌??Μ分期分为I-IV四期。其中I期癌肿未穿出深肌层，没 有发生淋巴结转移；II期癌肿侵犯浆膜层，亦可侵入浆膜外或肠外周围组织，但尚能整块 切除，无淋巴结转移；III期癌肿侵犯肠壁全层或未侵犯全层，但伴有淋巴结转移；IV期癌 肿伴有远处器官转移、局部广泛浸润或淋巴结广泛转移，不能根治性切除。 在临床治疗中，结直肠癌m、iv期患者由于发生了淋巴结或远处转移，往往预后较 差；并且即使同是处于结直肠癌I-II期的病人，其临床预后也不一样，表现为手术及辅助 治疗后患者转移复发或生存的时间不同，导致预后差异明显。然而，结直肠癌的发生、发展 是一个涉及多步骤、多基因的复杂过程。由于肿瘤异质性的存在，临床工作中常常遇到病理 分期相同而预后差异明显的情况。因此，寻找新的辅助诊断和/或判断预后的分子指标，作 为对结直肠癌1'匪病理分期系统的有益补充已成为研宄重点。 PCDHB3 基因（protocadherin^ 3，Gene ID :56132)作为 PCDH 家族中 β 亚家族的 一份子，其编码的蛋白质由6个胞外cadherin结构域和一次跨膜结构组成。对P⑶H家族 的研宄表明，该类蛋白主要涉及胚胎时期胎儿形态发生发育和成人大脑中的选择性神经连 接的维持。一些肿瘤研宄曾报道PCDH家族分子在癌症中的功能，如在Wilm' s肿瘤中发现 所有PCDH基因存在启动子高度甲基化；PCDHlO在多种肿瘤中由于被高度甲基化而表达沉 默，被认为是一个潜在的抑癌基因；PCDH24在结直肠癌HCTl 16细胞系中可以导致细胞接触 抑制，从而在体外实验中完全阻滞肿瘤形成，而这种作用可能是通过负调控fct通路而达 到的，但目前尚无 PCDHB3的有关报道。因此，明确PCDHB3与结直肠癌诊断和/或预后之间 的关系，可能对结直肠癌个体化治疗具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： 一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒，所述试剂盒包括试剂A、试 剂B、试剂C或试剂D中的至少一种： 试剂A :用于检测K：DHB3基因表达水平的引物对，为以下引物中的任意一对： 引物I :其序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示； 引物 2 :其序列如 SEQ ID NO: 13 和 SEQ ID NO: 14 所示； 引物 3 :其序列如 SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16 所示； 引物 4:其序列如 SEQ ID NO: 17 和 SEQ ID NO: 18 所示； 引物 5 :其序列如 SEQ ID NO: 19 和 SEQ ID NO:20 所示； 引物 6 :其序列如 SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:22 所示； 引物 7 :其序列如 SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24 所示； 引物 8 :其序列如 SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26 所示； 引物 9 :其序列如 SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO:28 所示； 引物 10 :其序列如 SEQ ID NO:29 和 SEQ ID NO:30 所示； 引物 11 :其序列如 SEQ ID N0:31 和 SEQ ID N0:32 所示； 引物 12 :其序列如 SEQ ID NO:33 和 SEQ ID NO:34 所示； 引物 13 :其序列如 SEQ ID NO:35 和 SEQ ID NO:36 所示； 引物 14 :其序列如 SEQ ID NO:37 和 SEQ ID NO:38 所示； 引物 15 :其序列如 SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40 所示； 试剂B :用于检测K：DHB3基因甲基化水平的引物对，为以下引物中的任意一对： 引物 16 :其序列如 SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6 所示； 引物 17 :其序列如 SEQ ID NO:41 和 SEQ ID NO:42 所示； 试剂C :用于检测K：DHB3基因甲基化水平的两对引物，其序列分别如SEQ ID N0:9 和 SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11 和 SEQ ID NO: 12 所示； 试剂D :用于检测K：DHB3蛋白含量的试剂。 所述用于检测K：DHB3基因表达水平的引物是指用于在PCR中合成K：DHB3基因 cDNA链的PCR引物。 所述用于检测K：DHB3基因甲基化水平的引物是指用于在MSP、BSP中合成K：DHB3 基因启动子甲基化岛DNA链的PCR引物。 所述用于检测K：DHB3蛋白含量的试剂包括抗K：DHB3蛋白的抗体。 通过实验发现：与正常肠上皮组织相比，PO)HB3 (protocadherin β 3，Gene ID : 56132)蛋白在肿瘤细胞中呈低水平表达，P⑶ΗΒ3启动子在肿瘤细胞中呈高度甲基化；因 此，对肠上皮组织中PCDHB3表达水平和其启动子甲基化水平的检测可用于结直肠癌的检 测； 所述的低水平表达是指肿瘤细胞内rcDHB3mRNA及蛋白表达水平低于正常对照； 所述的高度甲基化是指在肿瘤细胞内PCDHB3启动子CpG碱基甲基化程度高于正常对照；所 述的肿瘤细胞为TNM I-IV期结直肠癌病人肿瘤组织细胞。 通过实验也发现：P⑶HB3在肿瘤细胞高水平表达指示良好预后；P⑶HB3在肿瘤细 胞核膜表达指示良好预后。因此，对PCDHB3表达水平及PCDHB3是否在核膜中表达的检测 可用于结直肠癌的预后判断。 所述的高水平表达是指H-SCORE评分多1. 57 ;H-SC0RE指免疫组织化学染色强 度X阳性率；所述的核膜表达是指在肿瘤细胞核膜上有PCDHB3免疫组织化学染色；良好 预后具体为肿瘤细胞核膜表达POTHB3病人总生存期、无进展生存期比肿瘤细胞核膜不表 达TCDHB3病人长。所述肿瘤细胞为TNM III-IV期结直肠癌病人肿瘤组织细胞。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： 本专利技术通过对结直肠癌进行差异表达基因筛选，发现了位于人类染色体5q31的 P⑶HB3是一个与结直肠癌密切相关的基因。K：DHB3的mRNA和蛋白表达水平在结直肠癌病 人的肿瘤组织中显著下调，而该下调与基因启动子区域CpG碱基高度甲基化密切相关。同 时，在TNM III-IV期结直肠癌病人中的预后分析发现，PCDHB3在肿瘤细胞高水平表达或肿 瘤细胞核膜本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂A、试剂B、试剂C或试剂D中的至少一种：试剂A：用于检测PCDHB3基因表达水平的引物对，为以下引物中的任意一对：引物1：其序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；引物2：其序列如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；引物3：其序列如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示；引物4：其序列如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示；引物5：其序列如SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示；引物6：其序列如SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示；引物7：其序列如SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示；引物8：其序列如SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示；引物9：其序列如SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示；引物10：其序列如SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30所示；引物11：其序列如SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32所示；引物12：其序列如SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34所示；引物13：其序列如SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示；引物14：其序列如SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38所示；引物15：其序列如SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40所示；试剂B：用于检测PCDHB3基因甲基化水平的引物对，为以下引物中的任意一对：引物16：其序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；引物17：其序列如SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示；试剂C：用于检测PCDHB3基因甲基化水平的两对引物，其序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；试剂D：用于检测PCDHB3蛋白含量的试剂。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄文林，叶文，
申请(专利权)人：黄文林，
类型：发明
国别省市：广东;44
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