UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用及UCA1基因在制备结直肠癌预后产品中的应用。本发明专利技术探讨UCA1基因在结直肠癌组织和血浆中的表达及临床意义。经荧光定量PCR检测80对结直肠癌及其癌旁组织UCA1的相对表达量，并检测30例健康人和20例结直肠癌患者术前和术后的血浆UCA1相对表达量，并分析UCA1表达量与临床病理因素和预后的关系。结果显示，UCA1在结直肠癌组织中的表达水平显著上调，证明UCA1组织表达水平与结直肠癌预后相关，并且血浆UCA1可用于结直肠癌早期诊断和病情监测的标记物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物学研究领域，具体涉及UCA1(urothelialcarcinomaassociated1)基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用。
技术介绍
结直肠癌(colorectalcancer，CRC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，2012年新增结直肠癌病例140万，死亡例数为69万[TorreLA,BrayF,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics,2012[j].CACancerJClin,2015]。随着诊疗技术的不断改进，结直肠癌的预后有了很大的改善，但晚期结直肠癌的预后仍不尽如人意。因此，鉴定能用于提示结直肠癌的发生发展、转移复发以及药物耐药等相关的新的生物标记物，有助于提高结直肠癌的预后。人类基因组中除了大量的编码蛋白质的信使RNA外，还存在众多的非编码转录本，包括微小RNA和长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)。lncRNA是一类转录本超过200nt的RNA，最初被认为是基因组转录的“噪音”。近年来研究显示，lncRNA在表观遗传学、转录和转录后水平上调控基因的表达，参与多种细胞生物学过程，其表达水平异常与肿瘤等多种疾病相关。如UCA1(urothelialcarcinomaassociated1)，最初是在膀胱癌中发现的lncRNA癌基因，参与调控胚胎发育、膀胱癌侵袭、进展和耐药[12-14]。最近研究显示，肿瘤相关lncRNA在循环中能被稳定检测到，循环lncRNA是潜在的无创肿瘤标志物。因此，本研究检测UCA1在结直肠癌组织和血浆中的表达水平，并分析其表达水平与结直肠癌临床因素和预后等相关性。在本专利技术之前，还没有出现涉及本专利技术UCA1基因用于结直肠癌诊断的公开报道。特别是目前尚未出现将UCA1基因血浆或血清样本用于结直肠癌诊断的公开报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用。本专利技术要解决的技术问题之二是提供UCA1基因在制备结直肠癌预后产品中的应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现：在本专利技术的一方面，提供了UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用。作为本专利技术优选的技术方案，所述诊断结直肠癌产品包括用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断结直肠癌的产品。作为本专利技术优选的技术方案，所述用实时定量PCR诊断结直肠癌的产品至少包括一对特异扩增UCA1基因的引物和探针。作为本专利技术优选的技术方案，所述特异扩增UCA1基因的引物序列如下：UCA1基因正向引物：CCGGTCATTTATAGCACACCAA，如SEQIDNO.1所示；UCA1基因反向引物：TGGAATGGTGAACCCAATGG，如SEQIDNO.2所示；所述特异扩增UCA1基因的探针序列如下：FAM-TGCCGTCCATCTGCAGGACCC-BHQ，如SEQIDNO.3所示。作为本专利技术优选的技术方案，所述UCA1基因为UCA1基因血浆或血清样本。在本专利技术的另一方面，提供了UCA1基因在制备结直肠癌预后产品中的应用。作为本专利技术优选的技术方案，所述UCA1基因为UCA1基因血浆或血清样本。在本专利技术的另一方面，提供了用于结直肠癌诊断的特异扩增UCA1基因的引物和探针，所述特异扩增UCA1基因的引物序列如下：UCA1基因正向引物如SEQIDNO.1所示；UCA1基因反向引物如SEQIDNO.2所示；所述特异扩增UCA1基因的探针序列，如SEQIDNO.3所示。本专利技术探讨UCA1(urothelialcarcinomaassociated1)在结直肠癌组织和血浆中的表达及临床意义。方法：用荧光定量PCR检测80对结直肠癌及其癌旁组织UCA1的相对表达量，并检测30例健康人和20例结直肠癌患者术前和术后的血浆UCA1相对表达量，并分析UCA1表达量与临床病理因素和预后的关系。结果显示，UCA1在结直肠癌组织中的表达水平显著上调，特别是分期较晚和淋巴结转移的结直肠癌(P均<0.05)。结直肠癌组织UCA1高表达与淋巴结转移、侵袭性和较晚的TNM分期密切相关(P均<0.05)。生存分析显示，结直肠癌组织UCA1高表达患者的生存期较低表达者显著降低(校正HR＝2.002，95％CI1.007-3.981，P＝0.048)。另外，结直肠癌患者血浆UCA1较健康人显著升高(P＝0.016)，并且术后血浆UCA1较术前显著降低(P＝0.042)。结论：UCA1组织表达水平与结直肠癌预后相关，并且血浆UCA1可能是结直肠癌早期诊断和病情监测的标记物。附图说明图1为本专利技术实施例1中实时定量PCR扩增曲线图(cel-miR-39为内参基因)。图2为本专利技术实施例1中实时定量PCR扩增曲线图(RNU6B为内参基因)。图3是本专利技术实施例2中UCA1表达水平在结直肠癌组织中显著上调的结果示意图。其中，图3A代表在结肠和相邻非癌组织中UCA1的表达；图3B代表在不同TNM阶段UCA1的表达；图3C代表在无LNM(lymphnodemetastasis，淋巴结转移)和LNM情况下UCA1的表达。图4是本专利技术实施例2中结直肠癌组织中UCA1表达的预后分析结果示意图。图5是本专利技术实施例2中血浆UCA1在结直肠癌患者中表达上调的结果示意图。其中，图5A代表在结直肠癌病人和对照组中UCA1的血浆水平，图5B代表手术切除肿瘤之前之后病人UCA1的血浆水平。具体实施方式以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1实时定量PCR(qPCR)检测UCA1基因表达1.1方法组织和血浆RNA分别用Trizol试剂盒(Invitrogen，美国)和mirVanaPARISKit(Ambion，美国)提取。同时在血浆RNA抽提过程中，将人工合成的秀丽隐杆线虫cel-miR-39(由生工生物工程(上海)股份有限公司合成)加入作为对照。cDNAPrimeScriptTMRTreagentKitwithgDNAEraser试剂盒(Takara，中国)用于合成cDNA，SYBRPremixExTaqIIkit用于实时PCR扩增(Takara，中国)。扩增反应由ABI7900荧光定量PCR仪完成，每个标本均做3个复孔，取其均值计算。组织和血浆样本分别以RNU6B和cel-miR-39为内参基因，UCA1相对表达水平用公式2-ΔΔCt计算。...

【技术保护点】
UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.UCA1基因在制备诊断结直肠癌产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断结直肠癌产品包括用RT-PCR、实
时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断结直肠癌的产品。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断结直肠癌的产品至
少包括一对特异扩增UCA1基因的引物和探针。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述特异扩增UCA1基因的引物序列如下：
UCA1基因正向引物如SEQIDNO.1所示；
UCA1基因反向引物如SEQIDNO.2所示；
所述特异扩增UCA1基因的探针序列，如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶琨，
申请(专利权)人：上海市同仁医院，
类型：发明
国别省市：上海;31