一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液及其制备方法技术

一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。该辅助液中每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：维生素组合6～10g、氨基酸组合3～5g、复方中药多糖10～30g、亚硒酸钠0～10mg。本发明专利技术具有积极有益的效果：在接种家兔时能够将病毒送至易感器官，减少接种损失，提高接种成功率；可提高家兔感染的稳定性，减少了批次间差异，确保成品疫苗批次间稳定性，提高了疫苗质量；可特异性的提高猪瘟病毒在家兔体内的增殖密度，比现有技术相比提高了病毒滴度5～10倍；接种家兔后发现所收获的脾脏重量稍有增加，与现有技术相比，所获得的脾脏重量增加了15%～40%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液及 其制备方法。
技术介绍
猪瘟（CSF)是国际动物卫生组织（OIE)和中国的A类法定传染病，是我国强制性免 疫的重大动物疫病之一，是危害我国养猪业的"第一杀手"。猪瘟是由猪瘟病毒引起的，无法 用药物进行控制，疫苗免疫是最有效的办法。 目前国内外市售的猪瘟疫苗主要有猪瘟脾淋苗、猪瘟细胞苗以及猪瘟亚单位疫 苗，但市场上猪瘟疫苗的主流产品仍然是猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞苗。作为疫苗中的经 典-精制猪瘟脾淋源活疫苗仍具有不可替代的作用。 猪瘟脾淋源活疫苗选用中国猪瘟兔化弱毒株（C株)，该疫苗株能激发机体快速产 生免疫力、遗传稳定、毒力不返强，是国际上公认的目前世界上最为安全有效的弱毒疫苗 株。采用该毒株接种优良家兔，收获感染家兔的脾脏制成乳剂，与冻干保护剂混匀后经过冷 冻真空干燥制成猪瘟脾淋源活疫苗。 目前市场认为猪瘟脾淋源活疫苗免疫效果不理想，对猪瘟脾淋活疫苗的认识仍存 在误区，这主要和目前国内猪瘟脾淋源活疫苗使用方法不当、混合感染猪只免疫后应激过 大，以及质量参差不齐等情况有关。 氨基酸，是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的 基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。维生素又名维他命，通俗来讲，即 维持生命的物质，是维持机体生命活动必须的一类有机物质，也是保持机体健康的重要活 性物质。维生素是机体代谢中必不可少的有机化合物。机体犹如一座极为复杂的化工厂， 不断地进行着各种生化反应。其反应与酶的催化作用有密切关系。酶要产生活性，必须有 辅酶参加。已知许多维生素是酶的辅酶或者是辅酶的组成分子。因此，维生素是维持和调 节机体正常代谢的重要物质。在体内硒和维生素 E协同，能够保护细胞膜，防止不饱和脂肪 酸的氧化。 多糖是中药活性成分之一，大量研宄表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作 为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的 各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶 活性和抑制脂质过氧化的能力。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种接种家兔用猪瘟病毒 辅助液及其制备方法的技术方案。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于每1000 ml磷酸缓冲液中含 有以下重量配比的组分：维生素组合6~10g、氨基酸组合3~5g、复方中药多糖10~30g、 亚硒酸钠 O~IOmg ; 所述的氨基酸组合包括蛋氨酸、赖氨酸、色氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸； 所述的维生素组合包括维生素 A、维生素 D、维生素 E和维生素 K ; 所述的复方中药多糖由云芝、角叉藻、天麻、芍药、桃仁提取得到。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于该辅助液的PH为7. 2~7. 6。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的磷酸缓冲液由氯化 钠6~10g，氯化钾0. 05~0. 5g，磷酸氢二钠1~I. 2g，磷酸二氢钾0. 05~0. 5g，氯化钙 0. 05~0. 2g，含6个结晶水的氯化镁0. 05~0. 2g溶于1000 ml双蒸水中得到。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的每1000 ml磷酸缓冲 液中含有以下重量配比的组分：维生素组合7~9g、氨基酸组合3. 5~4. 5g、复方中药多糖 15~25g、亚硒酸钠2~8mg。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的氨基酸组合中含有： 蛋氨酸10~15%、赖氨酸20~30%、色氨酸5~20%、谷氨酸10~30%、甘氨酸5~30%和 丙氨酸5~30%。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的氨基酸组合中含有： 蛋氨酸12~14%、赖氨酸22~26%、色氨酸10~15%、谷氨酸15~25%、甘氨酸10~20% 和丙氛酸15~25%。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的维生素组合中含有： 维生素 A 10~20%、维生素 D 15~30%和维生素 E 15~45%、维生素 K 25~60%。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的维生素组合中含有： 维生素 A 12~18%、维生素 D 20~25%和维生素 E 20~35%、维生素 K 30~40%。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于所述的复方中药多糖按以下 步骤制得： a、 按云芝20~40份、角叉藻10~30份、天麻10~30份、苟药5~20份和桃仁5~ 20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴 至90°C，并保持在90°C，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次； b、 弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经1000 Orpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上 清； c、 将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖； d、 用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42°C灭菌纯化水进行溶 解，溶解后，按通过活性炭柱进行内毒素吸附，收集滤出液； e、 将d中上滤出液通过sevag法除去蛋白； f、 将e中中药多糖进行真空冷冻干燥制得复方中药多糖。 所述的一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液的制备方法，其特征在于包括以下工艺步 骤： 1) 磷酸缓冲溶液的配制：称取氯化钠，氯化钾，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，氯化钙，含6 个结晶水的氯化镁溶于双蒸水中，无菌条件下通过0. 22 μ m滤膜，过滤除菌备用； 2) 复方中药多糖的制备 a、称取云芝份、角叉藻份、天麻份、芍药份和桃仁份，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再 加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次； b、 弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经1000 Orpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上 清； c、 将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖； d、 用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42°C灭菌纯化水进行溶 解，溶解后，按通过活性炭柱进行内毒素吸附，收集滤出液； e、 将d中上滤出液通过sevag法除去蛋白； f、 将e中中药多糖进行真空冷冻干燥制得复方中药多糖； 3)接种家兔用病毒辅助液配制：按比例称取氨基酸组合、维生素组合、复方中药多糖和 亚硒酸钠，溶解于步骤1)制得的磷酸缓冲溶液中，充分混匀，用酸或碱调节pH至7. 2~7. 6 之间，无菌条件下通过0. 22 μ m滤膜，过滤除菌后置4°C保存备用。 本专利技术具有积极有益的效果： (1)本专利技术所制备的辅助液，在接种家兔时能够将病毒送至易感器官，减少接种损失， 提尚接种成功率。 (2)本专利技术所制备的辅助液，接种家兔，可提高家兔感染的稳定性，减少了批次间 差异，确保成品疫苗批次间稳定性，提高了疫苗质量。 (3)本专利技术所制备的辅助液接种家兔后，可特异性的提高猪瘟病毒在家兔体内的 增殖密度，比现有技术相比提高了病毒滴度5~10倍。 (4)本专利技术所制备的辅助液，接种家兔后发现所收获的脾脏重量稍有增加，与现有 技术相比，所获得的脾脏重量增加了 15%~40%。【具体实施方式】 为了使本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种接种家兔用猪瘟病毒辅助液，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：维生素组合6～10g、氨基酸组合3～5g、复方中药多糖10～30g、亚硒酸钠0～10mg；所述的氨基酸组合包括蛋氨酸、赖氨酸、色氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸；所述的维生素组合包括维生素A、维生素D、维生素E和维生素K；所述的复方中药多糖由云芝、角叉藻、天麻、芍药、桃仁提取得到。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈建军，张秀文，李阳，
申请(专利权)人：浙江美保龙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33