一种两性霉素B纳米复合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种两性霉素B纳米复合物，含有两性霉素B、胆固醇硫酸钠和胆固醇-PEG。本发明专利技术的两性霉素B纳米复合物，采用胆固醇-PEG对含有两性霉素B和胆固醇硫酸钠的纳米复合物进行修饰，不仅获得了令人满意的粒径、包封率等结果，更显示了良好的长循环性质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种两性霉素 B纳米复合物及其制备方法，属于药物制剂

技术介绍
两性霉素 B (Amphotericin B，AMB)是从链霉菌的培养液中分离而得的多烯类抗 真菌药。它的抗真菌机制是与真菌细胞膜上的固醇(主要为麦角固醇)结合，改变膜通透性， 细胞内容物流出，从而引起真菌细胞死亡。临床上用于治疗严重的深部真菌引起的内脏或 全身感染。 两性霉素 B水中不溶，为改善其溶解性，最先采用脱氧胆酸钠增溶，上市产品的商 品名为Fungizone?。但Fungizone?有较强的肾毒性，几乎所有患者均可出现不同程度的肾 功能损害，可出现蛋白尿、管型尿，血尿素氮及肌酐升高，肌酐清除率降低，也可引起肾小管 性酸中毒，不良反应多，如静滴过程中或静滴后数小时发生寒战、高热、严重头痛、恶心和呕 吐，有时并可出现血压下降、眩晕等。对血液系统、心血管系统、神经系统等都有毒性。 为改善不良反应，相继有两性霉素 B脂质体Ambisome?、Amphotec?、Amphocil?、 Abelcet?、Fungisome?产品上市。后继上市的制剂均可以明显改善两性霉素 B与正常细胞 的结合率，提高了药物的稳定性与抗真菌能力，降低了毒性，减少两性霉素 B所产生的副作 用，但采用的关键辅料比较昂贵，制备工艺复杂，制备成本高。 Three Rivers Pharmaceuticals 公司将两性霉素 B 开发成 Amphotec? ,虽然称为 "脂质体"，但其结构与一般的胶束或脂质体结构不同（Complexes of amphotericin B and cholesteryl sulfate· Journal of Liposome Research，1993:3(3) :473_490)，其实 际结构为两性霉素 B与胆固醇硫酸钠（CS)组成的不含有内水相的盘状纳米复合物（Novel antifungal drug delivery: stable amphotericin B-cholesteryl sulfate discs . International Journal of Pharmaceutics, 1991:75:45-54)。 上述的Amphotec ?等"脂质体"，本专利技术中称其为纳米复合物。静脉注射两性霉 素 B纳米复合物后半衰期较短，血药浓度降低很快，在一定程度上减弱了疗效。其原因是 两性霉素 B纳米复合物入血后快速被单核吞噬系统的库弗细胞(主要在肝脏部位）摄取， 摄取的复合物在吞噬体内逐渐解离，游离的两性霉素 B以较低的浓度再重新释放进入血 液，因此给药后血浆中两性霉素 B的浓度相对较低。纳米粒子在体内很容易被免疫识别系 统识别和吞噬，为解决这一问题，通常加入甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺 (mPEG2000-DSPE)以制成长循环纳米制剂。然而本专利技术的专利技术人在实践中发现，由于两性霉 素 B纳米复合物的特殊结构，用mPEG2000-DSPE进行修饰后无长循环特性。 由于有较多的方法可能应用于制备两性霉素 B纳米复合物，为了方便实验室样品 制备和更容易实现产业化，我们选择了经过改良的有机溶剂注入法进行样品制备。 专利技术人对有机溶剂注入法制备两性霉素 B纳米复合物的影响因素进行了试验，进 行了有机溶剂选择，对注入温度、搅拌速度、油水相比例进行了优化，同时增加了微射流整 粒工艺步骤。有机溶剂优选二甲基亚砜，注入温度为35°C -45°C，油水相比例为1:15-20。 按照优化的工艺参数能够制备出粒径均匀、包封率高、质量稳定的两性霉素 B纳米复合物。
技术实现思路
纳米粒子在体内很容易被免疫识别系统识别和吞噬，为解决这一问题，通常 加入甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE )以制成长循环 纳米制剂。然而本专利技术的专利技术人在实践中发现，由于两性霉素 B纳米复合物的特殊 结构，用mPEG2000-DSPE进行修饰后无长循环特性。当采用含有两性霉素 B、胆固醇 硫酸钠和mPEG2000-DSPE的处方时，尝试在很大范围内调整mPEG2000-DSPE的使用量 (mPEG2000-DSPE的摩尔数在胆固醇硫酸钠和mPEG2000-DSPE总摩尔数中所占比例小于等 于40%，大于0。制备方法详见实施例3,虽然在粒径和包封率等方面可以满足要求，但其药 代动力学参数表明该处方的纳米复合物消除快，AUC小。可见，mPEG2000-DSPE并不能使任 意一种药物在制成纳米制剂后具有令人满意的长循环性质。药代动力学结果详见本专利技术的 实施例6。 本专利技术的专利技术人在实践中出乎意料地发现，采用胆固醇-PEG (CH-PEG)对含有两 性霉素 B和胆固醇硫酸钠的纳米复合物进行修饰，不仅获得了令人满意的粒径、包封率等 结果，更显示了良好的长循环性质。
技术介绍
中所述的注射用两性霉素 B脂质体Amphotec ? ,处方中含有两性霉素 B 和胆固醇硫酸钠，虽然胆固醇硫酸钠的硫酸钠部分也具有一定的亲水性，但是当使用胆固 醇硫酸钠制备纳米复合物时，该纳米复合物并不具有理想的延长体内循环的性质，仅仅是 可以增大两性霉素 B的溶解性。由本专利技术实施例6可以看到，虽然AMB: CS: CH-PEG=IO: 10:0 的处方所获得的体内半衰期与含有CH-PEG的处方相比没有明显差异，但其药时曲线下 面积（AUCchJP AUCchoo)比后者小得多，并且其血浆清除率Cl比后者大几十倍，因此含有 CH-PEG的处方在体内可以更好地发挥药效。 本专利技术提供了一种两性霉素 B纳米复合物，含有两性霉素 B、胆固醇硫酸钠和胆固 醇-PEG。 进一步地，两性霉素 B的摩尔数与胆固醇硫酸钠和胆固醇-PEG总摩尔数的比为 1:1。 进一步地，胆固醇-PEG的摩尔数在胆固醇硫酸钠和胆固醇-PEG总摩尔数中所占 比例为a，其中0 < a彡20%。 进一步地，两性霉素 B、胆固醇硫酸钠和胆固醇-PEG的摩尔比为10:9:1或 10:8:2。 本专利技术还提供了另一种制备所述两性霉素 B纳米复合物的方法，含有以下步骤： 两性霉素 B、胆固醇硫酸钠和胆固醇-PEG溶解于有机溶剂中作为油相，配制水相，将水相置 于容器中，搅拌，将油相注入水相中，继续搅拌，去除有机溶剂，整粒。 本专利技术提供一种药物组合物，含有上述两性霉素 B纳米复合物和药学上可接受的 赋形剂或载体。其中所述药学上可接受的赋形剂或载体选自冻干保护剂。其中所述冻干保 护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖或甘露醇。 本专利技术还提供了所述两性霉素 B纳米复合物在制备治疗抗真菌药物中的用途【具体实施方式】 通过以下的具体例子，可以更加具体的说明本专利技术，但本专利技术不局限于以下例子。 其中含量（％)是指重量百分比。AMB为两性霉素 B，CS为胆固醇硫酸钠，CH-PEG为 胆固醇-PEG，AMB-C为两性霉素 B纳米复合物，CH-PEG-AMB-C为胆固醇-PEG修饰的两性霉 素 B纳米复合物。mPEG-DSPE-AMB-C为mPEG-DSPE修饰的两性霉素 B纳米复合物。 实施例1 两性霉素 B纳米复合物的制备(有机溶剂注入法)。 精密称取摩尔比为10:10:0或10:9:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种两性霉素B纳米复合物，含有两性霉素B、胆固醇硫酸钠和胆固醇‑PEG。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李春雷，修宪，李永丰，王红叶，陈东健，赵曦，王彩霞，杜艳玲，梁敏，
申请(专利权)人：石药集团中奇制药技术石家庄有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13