一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法，包括以下步骤：1)将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、蛋白酶K混匀加入内套管内，置金属浴上裂解；2)离心机中离心，加入吸附液再次离心；3)去除内套管加入吸附液、硅珠悬浊液静置吸附；4)离心去除上清；5)离心吸去残液；6)加入冰乙醇离心去除上清；7)离心吸去残液；8)烘干硅珠，加入洗脱液孵化；9)加入PCR扩增液内扩增；本发明专利技术方法检出率高，最终模板保有量达50-70％，特别适用于微量检材的检验，可检出模板含量在100pg以上的现场DNA检材。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取DNA的方法，具体是对现有硅珠法的改进，采用硅珠法结合离心套管提取DNA的方法。
技术介绍
硅珠法是在高浓度的硫氰酸胍存在的条件下，DNA能够被二氧化硅特异性地吸附；当条件消失后，DNA又可以从二氧化硅上解离出来。采用的细胞破碎条件比较激烈和充分硫氰酸胍是高性能的蛋白变性剂，可以使蛋白质与DNA充分分离，在硅珠吸附前，高速离心，可以将不溶性物质去除，吸附后漂洗将溶解性PCR抑制剂除去。概括地说，即利用二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中DNA分子的性能提取DNA的方法。如中华人民共和国公共安全行业标准GA/T383-2002，法庭科学DNA实验室检验规范中公开了硅珠法的提取步骤:a)在检材中加入TES缓冲液和十二烷基肌氨酸钠，煮沸5min以上，离心去载体；b)加入吸附液混合后加入娃珠悬液，混合后置于室温15min左右；c)离心去上清液，加入漂洗液，混合；d)离心去上清，加入冷70%乙醇，混合；e)离心去上清液，加入TES，56°C保温1min以上；f)离心后4°C冰箱内备用。以上这种方法在行业内广泛使用，其优点是提取后的DNA模板纯度高，基本无杂质残留，有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、蛋白酶K(10mg/ml)按体积比10:2～3:2～3混匀后，取160～200微升，加入离心套管的内套管内，置37～56℃金属浴上裂解20～30分钟，95～99℃裂解10～15分钟；(2)将离心套管放入离心机中13000～17000g离心0.5～1分钟，打开离心套管的管盖加入吸附液200～300微升，再次放入离心机13000～17000g离心2～5分钟；(3)打开离心套管管盖，去除内套管，加入吸附液700～1000微升，加入硅珠悬浊液10～16微升，静置吸附15...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：齐洁丽，
申请(专利权)人：上海惠文生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31