蛋白质生产促进剂制造技术

本发明专利技术涉及蛋白质生产促进剂，所述促进剂使得对含有血清或血清替代物的动物细胞培养基添加多糖并且极大地增加生产的期望的蛋白质的量成为可能。本发明专利技术进一步涉及使用含有该蛋白质生产促进剂的培养基生产蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞培养，特别地，涉及适合用于通过动物细胞(例如CH0细胞)高生产 蛋白质的蛋白质生产促进剂和含有所述促进剂的培养基。此外，本专利技术涉及使用所述蛋白 质培养促进剂和含有所述促进剂的培养基的蛋白质生产方法。 技术背景 近年来，在生命科学领域，通过大量培养生产有用蛋白质的动物细胞在工业水平 生产目标的有用蛋白质变得非常重要。当天然或重组蛋白质等通过培养所述动物细胞或导 入编码期望蛋白质的基因的动物细胞生产时，为了所述动物细胞的生长，在基本营养物(诸 如盐、糖类、氨基酸、维他命等）以外使用动物细胞生长因子。作为动物细胞生长因子，血清 组分诸如胎牛血清、小牛血清等是通常使用的。通常的，当使用胎牛血清或小牛血清时，其 需要以约5-20%体积添加至基础培养基。 然而，诸如胎牛血清、小牛血清等的血清受到供应限制并且通常非常昂贵。这导致 有用蛋白质的生产成本的增加。 此外，来自哺乳动物来源的生长因子和血清存在问题，因为它们涉及疯牛 病、牛绵状脑病、传染性海绵状脑病，和进一步的，朊病毒相关疾病诸如克雅氏病 (Creutzfeldt-Jakob disease)，并且来自哺乳动物的血清可以被病毒或支原体污染，因为 其不能在高压灭菌器等中灭菌。因此，从安全方面，已经发展出无血清培养方法，其中动物 细胞培养在不含血清的环境中。在无血清培养方法中，使用天然存在的纯化的蛋白质，诸如 胰岛素、转铁蛋白、生长因子等，重组蛋白质等作为血清(血清替代物)效果的替代品。然而， 这些蛋白质通常比胎牛血清或小牛血清更加昂贵，并且其供应受到限制。 如上文提及的，因为血清和血清代替物是昂贵的，并且其供应受到限制，因此期望 发展用于仍更高效地生产有用蛋白质的技术。 专利技术概述 通过本专利技术解决的问题 本专利技术的问题是提供蛋白质生产促进剂，用于通过使用动物细胞生产期望的蛋白质。 本专利技术的进一步的问题是提供通过使用含有所述蛋白质生产促进剂的培养基的蛋白质生 产方法。 解决问题的方法 本专利技术人已进行了深入研宄以试图解决上文提及的问题并且发现向用于动物细胞的 含有血清或血清替代物的培养基添加多糖显著地增加了期望的蛋白质生产的量，这导致了 本专利技术的完成。 因此，本专利技术涉及以下至。 用于动物细胞的培养基添加物，其包含多糖。 的添加物，所述添加物通过培养的动物细胞促进期望的蛋白质的生产。 的添加物，所述添加物促进上文所述动物细胞的每一个细胞的蛋白质生 产。 的添加物，其中上文所述多糖具有阴离子官能团。 的添加物，其中上文所述阴离子官能团选自羧基、磺酸基和磷酸基中至少 一种。 的添加物，其中上文所述多糖选自透明质酸、结冷胶、脱酰基结冷胶、黄原 胶、角叉菜胶、迪特胶、藻酸、岩藻依聚糖、果胶、果胶酸、果胶酯酸、硫酸乙酰肝素、肝素、硫 酸类肝素、硫酸角质、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸鼠李糖聚糖及其盐中至少一种。 的添加物，其中上文所述多糖是脱酰基结冷胶或其盐。 用于动物细胞的培养基，其包含根据至中任一项的所述添加物。 的培养基，所述培养基具有不低于1% (w/v)并且不高于15%(w/v)的血 清浓度。 的培养基，具有血清替代物的浓度不低于1% (w/v)并且不高于15%(w/ v)，其中所述血清替代物选自血浆蛋白质、激素、生长因子和盐。 至中任一项的培养基，所述培养基进一步包含选自氨基酸、维他 命、能源、渗透压调节剂、铁源和pH缓冲液中的至少一种。 通过使用动物细胞培养生产蛋白质的方法，所述方法包括在至中任 一项的添加物的存在下或在根据至中任一项的培养基中培养所述动物细胞。 的方法，其中所述动物细胞在至少（a)或（b)时期培养： (a) 当所述培养的动物细胞可以充分地生长的部分或全部时期， (b) 当所述动物细胞可以充分地生产期望的蛋白质的部分或全部时期。 促进在培养基中的细胞生产的蛋白质的量的方法，其包括在至中任 一项的添加物的存在下或在根据至中任一项的培养基中培养所述动物细胞。 的方法，所述方法促进所述动物细胞的每一个细胞的生产的蛋白质的 量。 本专利技术效果 本专利技术用于动物细胞的培养基添加物可以增加期望的蛋白质的生产量，当将所述添加 物添加至用于动物细胞的培养基时，能够生产蛋白质的动物细胞使用获得的培养基培养， 并且从培养基和/或动物细胞中收集生产的蛋白质。特别地，所述添加物可以增加每一个 细胞生产的蛋白质的量。 此外，因为本专利技术用于动物细胞的培养基添加物可以通过简单地添加至培养基促 进期望蛋白质的生产量，其在操作和处理方面是有优势的。 此外，因为所述添加物可以更高效地生产期望的蛋白质，所以其同样在生产成本 方面是有优势的，并且可以极大地有助于，例如，生物制药产品（诸如抗体药物等）的大量供 应等。 附图简述 图1显示当人骨髓瘤源细胞系SC-01MFP在脱酰基结冷胶（0. 015%)存在和其不存在(对 照）的情况下培养时，细胞数量的增加和A链生产量的比较。 图2显示在脱酰基结冷胶（0. 015%)存在下和如图1中对照存在下A链生产量在 图中面积的比较，其中A链生产量在图中的面积使用细胞数量增加在图中的面积进行修 正，通过梯形试样法计算当SC-01MFP培养于脱酰基结冷胶存在（0. 015%)和其不存在(对 照）情况下时，细胞数量增加（左图）和A链生产量(右图）的图中面积获得所述修正，在测 试中使用图1中描述的SC-01MFP (图中A链生产量面积/图中细胞数量增加面积)。 图3显示了当在存在脱酰基结冷胶（0. 025%)和其不存在(对照）的情况下培养通 过将人干扰素0 (IFN-0 )基因掺入CH0-K1中获得的中国仓鼠卵巢源细胞系（CH0-K1)时， 细胞数量增加和IFN-0产量的比较。 图4显示在脱酰基结冷胶（0. 025%)存在下和如图1中对照存在下IFN-0生产量 在图中面当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于动物细胞的培养基添加物，其包含多糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：户村美沙代，岩间武久，猿桥康一郎，西野泰斗，堀川雅人，川原浩治，
申请(专利权)人：日产化学工业株式会社，独立行政法人国立高等专门学校机构，
类型：发明
国别省市：日本;JP