包含微生物蛋白酶变体的组合物和方法技术

本发明专利技术提供枯草杆菌蛋白酶变体和包含至少一种此处陈列的枯草杆菌蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。在一些实施方案中，本发明专利技术提供适于衣物清洁用途的枯草杆菌蛋白酶变体。

【技术实现步骤摘要】
本申请为2009年6月3日提交的、专利技术名称为“包含微生物蛋白酶变体的组合物和方法”的PCT申请PCT/US2009/046066的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2010年12月3日，申请号为200980120922.3。专利
本专利技术提供枯草杆菌蛋白酶变体和包含至少一种此处陈列的枯草杆菌蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。具体的，本发明提供适于衣物清洁用途的蛋白酶变体。专利技术背景丝氨酸蛋白酶是包含多种酶类别的羰基水解酶亚组，具有多种特异性和生物学功能。对枯草杆菌蛋白酶已经进行了大量研究，主要是出于其在清洁和饲料应用中的用途。其他工作则着眼于在各种应用中可以负面影响这些酶的功能的不良环境条件(例如，暴露于氧化剂、螯合剂、极端的温度和/或pH)。尽管如此，本领域仍然需要这样的酶系统，所述酶系统能够抵抗这些不良条件，并且与本领域目前已知的酶系统相比，保留了活性或具有提高的活性。专利技术概述本专利技术提供枯草杆菌蛋白酶变体和包含至少一种此处陈列的枯草杆菌蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。在一些实施方案中，本专利技术提供适于衣物清洁用途的蛋白酶变体。本专利技术提供分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至少一组：G97A-G128A-Y217Q、G97A-L126A-G128A、G97A-L126A-G128A-Y217Q、G97A-L126A-Y217Q、G97A-M124V-G128A、G97A-M124V-G128A-Y217Q、G97A-M124V-L126A、G97A-M124V-L126A-G128A、G97A-M124V-L126A-Y217Q、G97A-M124V-Y217Q、G97A-N123G-G128A、G97A-N123G-G128A-Y217Q、G97A-N123G-L126A、G97A-N123G-L126A-G128A、G97A-N123G-L126A-Y217Q、G97A-N123G-M124V、G97A-N123G-M124V-G128A、G97A-N123G-M124V-L126A、G97A-N123G-M124V-Y217Q、G97A-N123G-Y217Q、L126A-G128A-Y217Q、L96T-G128A-Y217Q、L96T-G97A-G128A、L96T-G97A-G128A-Y217Q、L96T-G97A-L126A、L96T-G97A-L126A-G128A、L96T-G97A-L126A-Y217Q、L96T-G97A-M124V、L96T-G97A-M124V-G128A、L96T-G97A-M124V-L126A、L96T-G97A-M124V-Y217Q、L96T-G97A-N123G、L96T-G97A-N123G-G128A、L96T-G97A-N123G-L126A、L96T-G97A-N123G-M124V、L96T-G97A-N123G-Y217Q、L96T-G97A-Y217Q、L96T-L126A-G128A、L96T-L126A-G128A-Y217Q、L96T-L126A-Y217Q、L96T-M124V-G128A、L96T-M124V-G128A-Y217Q、L96T-M124V-L126A、L96T-M124V-L126A-G128A、L96T-M124V-L126A-Y217Q、L96T-M124V-Y217Q、L96T-N123G-G128A、L96T-N123G-G128A-Y217Q、L96T-N123G-L126A、L96T-N123G-L126A-G128A、L96T-N123G-L126A-Y217Q、L96T-N123G-M124V、L96T-N123G-M124V-G128A、L96T-N123G-M124V-L126A、L96T-N123G-M124V-Y217Q、L96T-N123G-Y217Q、M124V-G128A-Y217Q、M124V-L126A-G128A、M124V-L126A-G128A-Y217Q、M124V-L126A-Y217Q、N123G-G128A-Y217Q、N123G-L126A-G128A、N123G-L126A-G128A-Y217Q、N123G-L126A-Y217Q、N123G-M124V-G128A、N123G-M124V-G128A-Y217Q、N123G-M124V-L126A、N123G-M124V-L126A-G128A、N123G-M124V-L126A-Y217Q、N123G-M124V-Y217Q、N62Q-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-G128A、N62Q-G97A-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-L126A、N62Q-G97A-L126A-G128A、N62Q-G97A-L126A-Y217Q、N62Q-G97A-M124V、N62Q-G97A-M124V-G128A、N62Q-G97A-M124V-L126A、N62Q-G97A-M124V-Y217Q、N62Q-G97A-N123G、N62Q-G97A-N123G-G128A、N62Q-G97A-N123G-L126A、N62Q-G97A-N123G-M124V、N62Q-G97A-N123G-Y217Q、N62Q-G97A-Y217Q、N62Q-L126A-G128A、N62Q-L126A-G128A-Y217Q、N62Q-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-G128A、N62Q-L96T-G128A-Y217Q、N62Q-L96T-G97A、N62Q-L96T-G97A-G128A、N62Q-L96T-G97A-L126A、N62Q-L96T-G97A-M124V、N62Q-L96T-G97A-N123G、N62Q-L96T-G97A-Y217Q、N62Q-L96T-L126A、N62Q-L96T-L126A-G128A、N62Q-L96T-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-M124V、N62Q-L96T-M124V-G128A、N62Q-L96T-M124V-L126A、N62Q-L96T-M124V-Y217Q、N62Q-L96T-N123G、N62Q-L96T-N123G-G128A、N62Q-L96T-N123G-L126A、N62Q-L96T-N123G-M124V、N62Q-L96T-N123G-Y217Q、N62Q-L96T-Y217Q、N62Q-M124V-G128A、N62Q-M124V-G1本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至少一组：G97A‑G128A‑Y217Q、G97A‑L126A‑G128A、G97A‑L126A‑G128A‑Y217Q、G97A‑L126A‑Y217Q、G97A‑M124V‑G128A、G97A‑M124V‑G128A‑Y217Q、G97A‑M124V‑L126A、G97A‑M124V‑L126A‑G128A、G97A‑M124V‑L126A‑Y217Q、G97A‑M124V‑Y217Q、G97A‑N123G‑G128A、G97A‑N123G‑G128A‑Y217Q、G97A‑N123G‑L126A、G97A‑N123G‑L126A‑G128A、G97A‑N123G‑L126A‑Y217Q、G97A‑N123G‑M124V、G97A‑N123G‑M124V‑G128A、G97A‑N123G‑M124V‑L126A、G97A‑N123G‑M124V‑Y217Q、G97A‑N123G‑Y217Q、L126A‑G128A‑Y217Q、L96T‑G128A‑Y217Q、L96T‑G97A‑G128A、L96T‑G97A‑G128A‑Y217Q、L96T‑G97A‑L126A、L96T‑G97A‑L126A‑G128A、L96T‑G97A‑L126A‑Y217Q、L96T‑G97A‑M124V、L96T‑G97A‑M124V‑G128A、L96T‑G97A‑M124V‑L126A、L96T‑G97A‑M124V‑Y217Q、L96T‑G97A‑N123G、L96T‑G97A‑N123G‑G128A、L96T‑G97A‑N123G‑L126A、L96T‑G97A‑N123G‑M124V、L96T‑G97A‑N123G‑Y217Q、L96T‑G97A‑Y217Q、L96T‑L126A‑G128A、L96T‑L126A‑G128A‑Y217Q、L96T‑L126A‑Y217Q、L96T‑M124V‑G128A、L96T‑M124V‑G128A‑Y217Q、L96T‑M124V‑L126A、L96T‑M124V‑L126A‑G128A、L96T‑M124V‑L126A‑Y217Q、L96T‑M124V‑Y217Q、L96T‑N123G‑G128A、L96T‑N123G‑G128A‑Y217Q、L96T‑N123G‑L126A、L96T‑N123G‑L126A‑G128A、L96T‑N123G‑L126A‑Y217Q、L96T‑N123G‑M124V、L96T‑N123G‑M124V‑G128A、L96T‑N123G‑M124V‑L126A、L96T‑N123G‑M124V‑Y217Q、L96T‑N123G‑Y217Q、M124V‑G128A‑Y217Q、M124V‑L126A‑G128A、M124V‑L126A‑G128A‑Y217Q、M124V‑L126A‑Y217Q、N123G‑G128A‑Y217Q、N123G‑L126A‑G128A、N123G‑L126A‑G128A‑Y217Q、N123G‑L126A‑Y217Q、N123G‑M124V‑G128A、N123G‑M124V‑G128A‑Y217Q、N123G‑M124V‑L126A、N123G‑M124V‑L126A‑G128A、N123G‑M124V‑L126A‑Y217Q、N123G‑M124V‑Y217Q、N62Q‑G128A‑Y217Q、N62Q‑G97A‑G128A、N62Q‑G97A‑G128A‑Y217Q、N62Q‑G97A‑L126A、N62Q‑G97A‑L126A‑G128A、N62Q‑G97A‑L126A‑Y217Q、N62Q‑G97A‑M124V、N62Q‑G97A‑M124V‑G128A、N62Q‑G97A‑M124V‑L126A、N62Q‑G97A‑M124V‑Y217Q、N62Q‑G97A‑N123G、N62Q‑G97A‑N123G‑G128A、N62Q‑G97A‑N123G‑L126A、N62Q‑G97A‑N123G‑M124V、N62Q‑G97A‑N123G‑Y217Q、N62Q‑G97A‑Y217Q、N62Q‑L126A‑G128A、N62Q‑L126A‑G128A‑Y217Q、N62Q‑L126A‑Y217Q、N62Q‑L96T‑G128A、N62Q‑L96T‑G128A‑Y217Q、N62Q‑L96T‑G97A、N62Q‑L96T‑G97A‑G128A、N62Q‑L96T‑G97A‑L126A、N62Q‑L96T‑G97A‑M124V、N62Q‑L96T‑G97A‑N123G、N62Q‑L96T‑G97A‑Y217Q、N62Q‑L96T‑L126A、N62Q‑L96T‑L126A‑G128A、N62...

【技术特征摘要】
2008.06.06 US 61/059,6951.分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至少一组：
G97A-G128A-Y217Q、G97A-L126A-G128A、G97A-L126A-G128A-Y217Q、
G97A-L126A-Y217Q、G97A-M124V-G128A、G97A-M124V-G128A-Y217Q、
G97A-M124V-L126A、G97A-M124V-L126A-G128A、G97A-M124V-L126A-Y217Q、
G97A-M124V-Y217Q、G97A-N123G-G128A、G97A-N123G-G128A-Y217Q、
G97A-N123G-L126A、G97A-N123G-L126A-G128A、G97A-N123G-L126A-Y217Q、
G97A-N123G-M124V、G97A-N123G-M124V-G128A、G97A-N123G-M124V-L126A、
G97A-N123G-M124V-Y217Q、G97A-N123G-Y217Q、L126A-G128A-Y217Q、
L96T-G128A-Y217Q、L96T-G97A-G128A、L96T-G97A-G128A-Y217Q、
L96T-G97A-L126A、L96T-G97A-L126A-G128A、L96T-G97A-L126A-Y217Q、
L96T-G97A-M124V、L96T-G97A-M124V-G128A、L96T-G97A-M124V-L126A、
L96T-G97A-M124V-Y217Q、L96T-G97A-N123G、L96T-G97A-N123G-G128A、
L96T-G97A-N123G-L126A、L96T-G97A-N123G-M124V、
L96T-G97A-N123G-Y217Q、L96T-G97A-Y217Q、L96T-L126A-G128A、
L96T-L126A-G128A-Y217Q、L96T-L126A-Y217Q、L96T-M124V-G128A、
L96T-M124V-G128A-Y217Q、L96T-M124V-L126A、L96T-M124V-L126A-G128A、
L96T-M124V-L126A-Y217Q、L96T-M124V-Y217Q、L96T-N123G-G128A、
L96T-N123G-G128A-Y217Q、L96T-N123G-L126A、L96T-N123G-L126A-G128A、
L96T-N123G-L126A-Y217Q、L96T-N123G-M124V、L96T-N123G-M124V-G128A、
L96T-N123G-M124V-L126A、L96T-N123G-M124V-Y217Q、L96T-N123G-Y217Q、
M124V-G128A-Y217Q、M124V-L126A-G128A、M124V-L126A-G128A-Y217Q、
M124V-L126A-Y217Q、N123G-G128A-Y217Q、N123G-L126A-G128A、
N123G-L126A-G128A-Y217Q、N123G-L126A-Y217Q、N123G-M124V-G128A、
N123G-M124V-G128A-Y217Q、N123G-M124V-L126A、
N123G-M124V-L126A-G128A、N123G-M124V-L126A-Y217Q、
N123G-M124V-Y217Q、N62Q-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-G128A、

\tN62Q-G97A-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-L126A、N62Q-G97A-L126A-G128A、
N62Q-G97A-L126A-Y217Q、N62Q-G97A-M124V、N62Q-G97A-M124V-G128A、
N62Q-G97A-M124V-L126A、N62Q-G97A-M124V-Y217Q、N62Q-G97A-N123G、
N62Q-G97A-N123G-G128A、N62Q-G97A-N123G-L126A、
N62Q-G97A-N123G-M124V、N62Q-G97A-N123G-Y217Q、N62Q-G97A-Y217Q、
N62Q-L126A-G128A、N62Q-L126A-G128A-Y217Q、N62Q-L126A-Y217Q、
N62Q-L96T-G128A、N62Q-L96T-G128A-Y217Q、N62Q-L96T-G97A、
N62Q-L96T-G97A-G128A、N62Q-L96T-G97A-L126A、N62Q-L96T-G97A-M124V、
N62Q-L96T-G97A-N123G、N62Q-L96T-G97A-Y217Q、N62Q-L96T-L126A、
N62Q-L96T-L126A-G128A、N62Q-L96T-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-M124V、
N62Q-L96T-M124V-G128A、N62Q-L96T-M124V-L126A、
N62Q-L96T-M124V-Y217Q、N62Q-L96T-N123G、N62Q-L96T-N123G-G128A、
N62Q-L96T-N123G-L126A、N62Q-L96T-N123G-M124V、
N62Q-L96T-N123G-Y217Q、N62Q-L96T-Y217Q、N62Q-M124V-G128A、
N62Q-M124V-G128A-Y217Q、N62Q-M124V-L126A、N62Q-M124V-L126A-G128A、
N62Q-M124V-L126A-Y217Q、N62Q-M124V-Y217Q、N62Q-N123G-G128A、
N62Q-N123G-G128A-Y217Q、N62Q-N123G-L126A、N62Q-N123G-L126A-G128A、
N62Q-N123G-L126A-Y217Q、N62Q-N123G-M124V、N62Q-N123G-M124V-G128A、
N62Q-N123G-M124V-L126A、N62Q-N123G-M124V-Y217Q、和
N62Q-N123G-Y217Q，其中所述取代位于SEQ ID NO:1中陈列的BPN’枯草
杆菌蛋白酶位置的等同位置。
2.分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至少一组：
G97N-G128A-Y217M、G97G-G128S-Y217E、G97A-G128A-Y217Q、
G97M-G128S-Y217E、G97A-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q、
G97M-G128G-Y217M、G97G-G128S-Y217Q、G97S-G128S-Y217Q、
G97G-G128A-Y217Q、G97S-G128A-Y217E、G97A-G128S-Y217L、
G97A-G128A-Y217N、G97Q-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217M、
G97A-G128A-Y217S、G97D-G128A-Y217Q、G97M-G128S-Y217Q、

\tG97Q-G128G-Y217D-S87Y、G97S-G128A-Y217N、G97A-G128S-Y217T、
G97D-G128S-Y217E、G97D-G128A-Y217L、G97G-G128S-Y217E-S78P-A272T、
G97T-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217I、G97Q-G128S-Y217Q、
G97G-G128A-Y217D、G97Q-G128A-Y217N、G97S-G128A-Y217M、
G97S-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217M、G97E-G128S-Y217M、
G97S-G128P-Y217Q、G97T-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q-A73T、
G97E-G128S-Y217N、G97G-G128A-Y217I、G97Q-G128A-Y217D、
G97Q-G128S-Y217M、G97R-G128T-Y217Q-S162P、G97S-G128S-Y217D、
G97T-G128P-Y217I、G97Q-G128G-Y217E、G97C-G128G-Y217N、
G97D-G128S-Y217H、G97M-G128S-Y217L、G97M-G128S-Y217N、
G97S-G128S-Y217E、G97M-G128S-Y217I、G97A-G128P-Y217A、
G97R-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217D、G97V-G128G-Y217D、
G97V-G128G-Y217E、G97A-G128G-Y217T、G97G-G128N-Y217L、
G97D-G128A-Y217T、G97M-G128A-Y217E、和G97M-G128A-Y217N，其中所述
取代位于SEQ ID NO:1中陈列的BPN’枯草杆菌蛋白酶位置的等同位置。
3.分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至少一组：
S24R-S87D-Q206E、P40E-A144K-K213L、N61E-P129E-S159K、
S87D-S162K-K265N、S87D-T242R-Q275E、N61E-Q103E-N240K、
S87D-T242R-K265N、N62R-K265N-Q275E、P129E-S145D-N240K、
P129E-P239R-K265N、Q103E-P129E-T242R、P40E-N61E-S87D-S162K-T242R、
S24R-N62R-S87D-S145D-K265N、P40E-N62R-S87D-Q103E-S162K、
S24R-P40E-S145D-S159K-K213L、S24R-S87D-A144K-K265N-Q275E、
N61E-P129E-S162K-K213L-N240K、N61E-S145D-S162K-K213L-T242R、
S87D-A144K-S145D-S159K-Q275E、S24R-P129E-Q206E-N240K-K265N、
N61E-Q103E-A144K-K213L-T242R、N62R-S159K-Q206E-K265N-Q275E、
S24R-Q103E-P129E-N240K-K265N、N61E-Q103E-P129E-P239R-N240K、
P129E-S145D-N240K-T242R-K265N、Q103E-S162K-Q206E-K213L-P239R、
P40E-N61E-N62R-S87D-S159K-S162K-K265N、

\tS24R-P40E-N61E-A144K-Q206E-K213L-T242R、
P40E-N61E-S87D-P129E-S159K-S162K-T242R、
P40E-N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-Q275E、
P40E-N62R-S87D-Q103E-A144K-S159K-Q275E、
P40E-N62R-S87D-S159K-S162K-K265N-Q275E、
P40E-N61E-P129E-A144K-S162K-K213L-N240K、
P40E-N61E-Q103E-A144K-S159K-S162K-Q275E、
P40E-N61E-Q103E-S159K-S162K-K213L-P239R、
P40E-N61E-Q103E-S159K-S162K-K213L-N240K、
N62R-S87D-P129E-S145D-S159K-S162K-Q275E、
S24R-N61E-Q103E-P129E-K213L-N240K-T242R、
P40E-N62R-S145D-S159K-S162K-Q206E-Q275E、
N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-K265N-Q275E、
N61E-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213L-T242R、
S24R-N61E-Q103E-P129E-Q206E-P239R-N240K、
S24R-N62R-P129E-S145D-P239R-K265N...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·R·巴斯勒，L·G·卡斯康佩雷拉，D·A·伊斯泰尔，J·T·凯利斯，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US