一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法技术

一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法，包括以下步骤：(1)提取：称取经处理的石蒜粉末，以料液比1:10，单位比例为g/mL，加入pH为4.5的水中，加入石蒜粉末质量1.0％-3.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1，在50℃下酶解20-100min，然后超声波处理5-25min，5000r/min离心20min，取上清液即得加兰他敏提取液；(2)纯化：①溶剂萃取；②阳离子交换树脂吸附；③C18反相硅胶柱层析；④正相硅胶柱层析；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到加兰他敏粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得加兰他敏。本发明专利技术操作简单，提取时间短、提取率高、溶剂用量少、成本较低；纯化工艺环保，且纯度高，可达99.2％。

【技术实现步骤摘要】
一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法
本专利技术涉及一种加兰他敏的提取方法，尤其是涉及一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法。
技术介绍
石蒜中加兰他敏等生物碱的化学合成方法已经有报道，但从石蒜属植物中提取仍是该类物质的一大重要来源，现有技术中石蒜生物碱的提取方法主要有溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取等方法，这些方法一般都存在环境污染严重、生产成本高等缺点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种提取时间短、溶剂用量少、提取率高、成本低的从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是，一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法，包括以下步骤：(1)提取：称取经处理的石蒜粉末，以料液比1:10，单位比例为g/mL，加入pH为4.5的水中，加入石蒜粉末质量1.0％-3.0％(优选2.0％-2.8％，更优选2.5％)的纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1，在50℃下酶解20-100min(优选40-80min，更优选60min)，然后超声波处理5-25min(优选15min-20min，更优选15min)，5000r/min离心20min，取上清液即得加兰他敏提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的加兰他敏提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得加兰他敏萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6(优选pH为2)用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率1-3BV/h(优选3BV/h)上样至饱和，用含0.5-2.5mol/L(优选1.5mol/L)氨水的40％-80％(优选70％)乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相(流动相：V(乙腈)︰V(磷酸盐)为16︰84)溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶(200-300目)以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10～30(优选1:10)，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到加兰他敏粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得加兰他敏。进一步，所述步骤④中，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为8.4:1.6。进一步，所述石蒜属植物为忽地笑、红花石蒜、玫瑰石蒜、稻草石蒜或中国石蒜(优选忽地笑)。进一步，所述石蒜粉末优选忽地笑鳞茎粉末。与现有技术相比，本专利技术操作简单，提取时间短、提取率高、提取次数少、溶剂用量少、成本较低，采用超声波协同酶法提取，加兰他敏得率为0.02840％；纯化工艺环保，且纯度高，可达99.2％。附图说明图1为本专利技术酶用量对加兰他敏得率的影响示意图；图2为本专利技术酶解时间对加兰他敏得率的影响示意图；图3为本专利技术超声时间对加兰他敏得率的影响示意图。具体实施方式以下结合附图及实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1本实施例包括以下步骤：准确称取经处理的石蒜粉末2.0g，以料液比1:10，单位为g/mL，加入pH为4.5的水中，分别加入原料质量1.0％-3.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，在50℃下酶解20-100min，然后超声波处理5-25min，5000r/min离心20min，取上清液，即得加兰他敏提取液；(2)纯化①溶剂萃取：将步骤(1)提取的加兰他敏提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得加兰他敏萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH为2，用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率3BV/h上样至饱和，用含1.5mol/L氨水的70％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相(流动相：V(乙腈)︰V(磷酸盐)为16︰84)溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶(200-300目)以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到加兰他敏粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得纯度为99.2％的加兰他敏。步骤④中，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为8.4:1.6。参照附图1，酶用量的影响情况，准确称取经处理的石蒜粉末2.000g，加入pH为4.5的水20mL，分别加入原料质量1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，在50℃下酶解1h，超声处理15min，5000r/min离心20min，取上清液，定容至50mL。结果显示，在1％-2.5％范围内加兰他敏得率随酶用量的增加而升高，酶用量为2.5％的效果最佳。参照附图2，酶解时间的影响，称取石蒜粉末2.000g，加入pH为4.5的水20mL，加入原料质量2.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，在50℃下酶解20、40、60、80、100min，超声处理15min，5000r/min离心20min，取上清液，定容至50mL。结果可知，酶解时间在20-60min内，加兰他敏得率随时间增长而升高，之后略有降低。60min效果最佳。参照附图3，超声时间的影响，称取石蒜粉末2.000g，加入pH为4.5的水20mL，加入原料质量2.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，50℃酶解1h，然后超声处理5、10、15、20、25min，5000r/min离心20min，取上清液，定容至50mL，加兰他敏得率在5-15min内随超声处理时间的增长而增加，15min时达最大值。以加兰他敏得率为指标，进行直观分析和方差分析结果见表1、表2。表1超声波协同酶法提取加兰他敏正交设计与结果表2超声波协同酶法提取加兰他敏方差分析方差来源离差平方自由度均方F值P值A7.15223.57612.460＜0.1B15.10727.55426.319＜0.05C13.10526.55222.831＜0.05误差0.57总和35.934通过表1直观分析，可知加兰他敏最佳提取工艺为A2B2C1。根据方差分析(表2)，酶解时间、超声时间对加兰他敏得率的影响显著(P＜0.05)；酶用量对加兰他敏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：称取经处理的石蒜粉末，以料液比1:10，单位比例为g/mL，加入pH为4.5的水中，加入石蒜粉末质量1.0％‑3.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1，在50℃下酶解20‑100min，然后超声波处理5‑25min，5000r/min离心20min，取上清液即得加兰他敏提取液；(2)纯化：①溶剂萃取：将步骤(1)提取的加兰他敏提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得加兰他敏萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6(用D‑001型阳离子交换树脂，以上样速率1‑3BV/h上样至饱和，用含0.5‑2.5mol/L氨水的40％‑80％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇‑水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径‑柱高湿法装柱，所述柱直径‑柱高的比例为1:10～30，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到加兰他敏粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得加兰他敏。...

【技术特征摘要】
1.一种从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：称取经处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:10，单位比例为g/mL，加入pH为4.5的水中，加入石蒜属植物粉末质量1.0％-3.0％的纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1，在50℃下酶解20-100min，然后超声波处理5-25min，5000r/min离心20min，取上清液即得加兰他敏提取液；(2)纯化：①溶剂萃取：将步骤(1)提取的加兰他敏提取液用NaOH调节pH至10，按体积比1:1加入萃取剂三氯甲烷，摇匀，静置过夜，取下层氯仿相，HCl调节pH至2，抽滤，得加兰他敏萃取浓缩液；②阳离子交换树脂吸附：将步骤①中萃取浓缩液经HCl调节pH至1～6，用D-001型阳离子交换树脂，以上样速率1-3BV/h上样至饱和，用含0.5-2.5mol/L氨水的40％-80％乙醇溶液以3BV/h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物Ⅰ；③C18反相硅胶柱层析：C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物Ⅰ的C18填料装于层析柱中，然后以流动相溶解层析出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅱ；④正相硅胶柱层析：用经预处理的20倍质量于步骤③所得干燥物Ⅱ的柱层析用硅胶以柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10～30，步骤③所得干燥物Ⅱ与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干燥物Ⅲ；⑤重结晶：将步骤④所得干燥物Ⅲ经乙醇溶解，再结晶得到加兰他敏粗品，过滤，在50～60℃真空干燥得加兰他敏。2.根据权利要求1所述的从石蒜属植物中提取加兰他敏的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：称取经处理的石蒜属植物粉末，以料液比1:10，单位比例为g/mL，加入pH为4.5的水中，加入石蒜属植物粉末质量2.0％-2.8％的纤维素酶与果胶酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：田春莲，王鹏，刘小攀，覃基信，
申请(专利权)人：吉首大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43