一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用，将氨基化的Fe3O4纳米磁珠分散到Tris缓冲溶液中与癌症标志物抗体（Ab1）相连后作为易分离的免疫探针；中空聚多巴胺-金纳米材料（PDA-Au）分散到Tris缓冲溶液中与癌症标志物抗体（Ab2）相连作为免疫识别物质。Ab1与Ab2与对应癌症标志抗原特异性结合构成三明治夹心免疫体系。通过磁性将该免疫体系分离出来，随后加入到对硝基苯酚与硼氢化钠的混合水溶液中，通过紫外可见仪进行测定。本发明专利技术制备得到的纳米金复合材料免疫传感器免疫检测线性范围为0～100U/mL，检测下限达0.05U/mL，相关系数达0.998。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备氨基化的Fe3O4纳米磁珠 将直径为200～250nm的Fe3O4纳米磁珠分散到水中，Fe3O4纳米磁珠浓度为0.2～0.8mg/mL水，然后按浓度为0.1～0.4μL/mL水加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷，混合均匀，于15～25℃搅拌3～12h，得到氨基化的Fe3O4纳米磁珠；（2）制备中空聚多巴胺‑金纳米材料a）将直径为200～250nm的Fe3O4纳米磁珠加入到pH为8.5的Tris缓冲溶液中，配制成1.0～2.0mg/mL Fe3O4纳米磁珠的Tris分散液，然后加入多巴胺盐酸盐，Fe3O4纳米磁珠与多巴胺盐酸盐的质量比为1:0.8～1.2，混合均匀，于15～25℃搅拌反应3～24h，磁分离，得Fe3O4‑聚多巴胺纳米颗粒；b）将Fe3O4‑聚多巴胺纳米颗粒配制成浓度为0.05～0.1mg/mL的溶液，然后加入质量分数为1%的HAuCl4水溶液，Fe3O4‑聚多巴胺与HAuCl4水溶液的体积比为150～250：1，混合均匀，于80～100℃搅拌反应20～40 min，磁分离，得Fe3O4‑聚多巴胺‑Au纳米材料；c）将Fe3O4‑聚多巴胺‑Au纳米材料配制成浓度为1.5～2.5mg/mL的溶液，加入浓度为5.5～6.5mol/L的盐酸水溶液1.5～2.5mL，于15～25℃搅拌反应5～8h，得中空聚多巴胺‑纳米金材料；（3）制备免疫传感器a）将步骤（1）制备的氨基化的Fe3O4纳米磁珠分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中，配制成浓度为0.5～2.0mg/mL的分散液，按分散液与戊二醛水溶液的体积比0.5～2.0：1加入浓度为2.5wt%的戊二醛水溶液，于15～25℃搅拌反应3～12h，得到功能化Fe3O4纳米磁珠，将功能化Fe3O4纳米磁珠磁分离后重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中，配制成浓度为0.5～1.5mg/mL的分散液，加入浓度为2μg/mL的癌症标志物抗体，即一抗/Ab1，功能化Fe3O4纳米磁珠分散液与一抗/Ab1的体积比为5～20：1，37℃下震荡0.5～2h，随后加入浓度为1wt%的BSA用以封闭非特异性结合位点，功能化Fe3O4纳米磁珠分散液与加入的BSA的体积比为0.5～2：1，37℃下震荡10～60min后磁分离，随后加入pH为7.2的Tris缓冲溶液混合均匀，再次磁分离，将其重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中，配制成质量浓度为0.5～2.0mg/mL的分散液，然后向上述分散液中加入质量浓度为1mg/mL的NaBH3CN水溶液，加入的NaBH3CN水溶液与上述分散液的体积比为0.5～2：1，然后于37℃震荡10～60min，得到Fe3O4‑Ab1；b）将上步得到的Fe3O4‑Ab1分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中配制成浓度为0.5～1.5mg/mL的分散液，加入到从0 U/mL到100 U/mL的不同浓度的癌症标志物的抗原中，其中Fe3O4‑Ab1分散液与相对应的癌症标志物的抗原的体积比为0.5～2：1，37℃震荡10～60min，得到Fe3O4‑Ab1‑癌标；c）将步骤（2）制得的中空聚多巴胺‑纳米金材料分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中配制成浓度为0.5～2.0mg/mL的中空聚多巴胺‑纳米金分散液，然后加入浓度为2μg/mL的癌症标志物抗体，即二抗/Ab2,中空聚多巴胺‑纳米金分散液与二抗/Ab2的体积比为5～20：1，37℃下震荡0.5～2h，随后按中空聚多巴胺‑纳米金分散液与BSA的体积比为0.5～2：1加入浓度为1wt%的BSA用以封闭非特异性结合位点，37℃下震荡10～60min，离心分离，将分离出的固体重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中，配制成浓度为0.5～2.0mg/mL的中空聚多巴胺‑纳米金溶液，然后按中空聚多巴胺‑纳米金分散液与Fe3O4‑Ab1‑癌标的体积比为0.5～2：1加入浓度为0.5～2.0mg/mL的Fe3O4‑Ab1‑癌标，于37℃下震荡10～60min后磁分离，随后加入10～20mLpH为7.2的Tris缓冲溶液混合均匀，再次磁分离，然后加入到对硝基苯酚和硼氢化钠混合水溶液中，得混合溶液，通过对溶液中对硝基苯酚紫外‑可见光谱吸收的变化，即可实现癌症标志物抗原的检测。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：渠凤丽，赵岩，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37