本发明专利技术公开了一种从火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法，步骤为：将火麻仁药材粉碎，过筛，加入石油醚常压过滤脱脂，滤渣用乙醇渗漉提取，合并提取液；再次脱脂后，用乙酸乙酯萃取，浓缩成浸膏；将浸膏柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；洗脱液的浓缩浸膏用MCI柱层析进行脱色，以甲醇-水梯度洗脱，薄层层析检测，合并比移值相同流份，浓缩成浸膏；该浸膏用硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，薄层层析检测，合并流份，浓缩得浸膏；该浸膏甲醇溶解后作HPLC制备分离，收集Rt＝16min的流份，浓缩结晶，干燥，即得。本发明专利技术的方法拓宽了化合物NeoechinulinA作为药用活性成分的来源，有利于开发新的基于SIRT1调节的防治神经退行性疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法,具体涉及一种从药用植物火麻仁中提取化合物NeoechinulinA的方法及其基于SIRT1调节的防治神经退行性疾病方面的应用，属于药物
技术介绍
Neoechinulin类化合物含三个特征结构区域：吲哚、二酮哌嗪、2-甲基-3丁烯-2-取代基，属于二酮哌嗪类吲哚生物碱。文献报道NeoechinulinA具有很好的抗阿尔茨海默症(Alzheimer’sdisease，AD)等神经退行性疾病的潜力，具体表现在：1)捕获活性氮自由基Peroxynitrite(ONOO-)而发挥神经细胞保护作用。ONOO-在阿尔茨海默症、帕金森病等神经退行性疾病的病理过程中发挥重要的角色(JAntibiot,2007,60(10):614–621)。2)抑制淀粉样肽Aβ42诱导的小胶质细胞的激活而调节AD相关的神经炎症过程。淀粉样肽沉积是阿尔茨海默症的主要病理标志之一，淀粉样肽可激活小胶质细胞介导的神经炎症和紊乱(NeuroToxicology,2013,35:30–40)。目前的文献报道表明，NeoechinulinA主要从多种不同来源的真菌代谢产物及少数药用植物中分离获得，真菌代谢产物如曲霉菌Aspergillussp.(ChemPharmBull2004,52:375–376),炭角菌Xylariaeuglossa(JAntibiot,2005,58:268–270),海洋真菌Eurotiumrubrum(Synlett，2006,5:677–680)，海藻内生菌Chaetomiumglobosum(JNatProd,2006,69:1622–1625),浒苔共生真菌—蜡叶散囊菌Eurotiumherbariorum(中国海洋药物,2013,32(1):37-45),豆科植物锦鸡儿(CaraganachamlaguHam)根的内生真菌HB-1(天然产物研究与开发，2007，19：48-50)。药用植物如朝鲜白头翁Pulsatillacernua(中草药，2013,44(23)：3264-3269)，贯众Cyrtomiumfortunei(NatProdRes，27:2066-2068),旋覆花Inulahupehensis(天然产物研究与开发,2012,24(4):427-431)，仙人掌Opuntiadillenii(中国药物化学杂志，2013，23(2):120-126)；草乌Aconitumcarmichaeli(专利申请号201410031796.7)。在检索的诸多报道中，未见有以火麻仁作为来源提取化合物NeoechinulinA的报道。药用植物火麻仁(FructusCannabis)是桑科一年生草本植物火麻(CannabissativaL.)的干燥成熟果实，资源广泛，是世界长寿之乡广西巴马经常食用的“长寿汤”的主要食材，《神农本草经》列为上品，本草纲目称其“补中益气，久服肥健不老”。其是中药治疗老年痴呆的基本方中的常用中药之一(闫敬来.中医药治疗老年痴呆相关文献的用药规律研究,武汉：湖北中医学院,硕士学位论文,2007)。现代研究表明火麻仁提取物能改善D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力(北京师范大学学报(自然科学版),2003,39：386-389)，可预防化学药物如东莨菪碱等所致小鼠记忆学习能力损伤(ActaPharmaSinica,2003,24(11):1137-1142)，给予动物火麻仁饮食，可抵制Aβ42毒性，具备阿尔茨海默症防治潜力(Molecularsandcells,2011,31:337-342),但文献缺乏其活性物质依据。新近研究表明：III类组蛋白去乙酰化酶Sirtuin成员之一SIRT1，与衰老、代谢综合征、神经退行性疾病、肿瘤的发生相关，成为热门的药物设计靶标(NeurodegenerDis,2012,9:1–10)。研究表明激活SIRT1活性或上调SIRT1表达可发挥多靶点AD防治作用(LancetNeurol,2011,10:275-279；CurrOpinPsychiatr,2012,25:226–230；Frontagingneurosci,2013,5:53)，SIRT1对AD多个病理通路具有调节作用：SIRT1可减少β-淀粉样肽和老年斑的产生(Cell,2010,142:320-332)，可降低神经元的神经缠结(Neuron,2010,67:953-966)，降低ROS水平，延缓神经退化(Nature,2009,460:87-591)，可抑制Aβ对小胶质细胞的激活，从而降低NF-κB信号介导炎症与神经毒性(JBioChem,2005,280:40364–40374)等，发现并发展SIRT1调节药物为AD的新疗法打开了大门(TrendsPharmacolSci，2014,35(3):146-54)。但在检索的诸多现有技术中，未见火麻仁或NeoechinulinA调节SIRT1作用报道，仍属于研究的空白，不利于药用植物进一步的研究和应用，因此，研究NeoechinulinA与SIRT1调节之间的相关性，进而开发SIRT1调节药物用于AD的治疗，是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的不足，本专利技术的目的之一是提供一种从药用植物火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法。该方法首次从药用植物火麻仁中提取分离得到了二酮哌嗪类吲哚生物碱(化合物NeoechinulinA)，拓宽了化合物NeoechinulinA作为药用活性成分的来源。本专利技术还提供了二酮哌嗪类吲哚生物碱在制备基于SIRT1调节的防治神经退行性疾病的药物中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种防治神经退行性疾病的药物组合物，该药物组合物以含有药学有效量的二酮哌嗪类吲哚生物碱(化合物NeoechinulinA)为有效成分。该药物组合物可以与药用辅料混合，以常规方法制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、粉剂或注射剂；给药形式为口服给药或注射给药。所述的药用辅料为甘露糖醇、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、聚乙二醇或注射用溶剂中的一种或几种；所述纤维素衍生物为结晶纤维素、羟丙基纤维素或羧甲基纤维素钠；所述注射用溶剂为水、乙醇或甘油。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：从药用植物火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法，包括以下步骤：(1)制备火麻仁脱脂总提取物：将火麻仁(CannabissativaL.)药材粉碎，粉碎后过80目筛，加入1-2倍体积(g/mL)的石油醚，于25℃-35℃条件下浸泡2h-4h，常压过滤脱脂，滤渣用3-6L的乙醇体积分数为70％-90％(v/v)乙醇-水，于室温下反复渗漉提取2-4次，每次1-3天，合并渗漉提取液,浓缩；提取浓缩液用石油醚萃取(1:1，v/v)再次脱脂后，再用3L-5L乙酸乙酯反复萃取，于30℃-50℃条件下减压浓缩成0.25g/mL的浸膏(50℃测)；(2)分离：将上述乙酸乙酯萃取浸膏用反相常压色谱柱(ODS-A-HG，12nm，50μm)层析，以10％-100％(v/v)甲醇-水梯度洗脱；取60％(v/v)甲醇-水洗脱液的浓缩浸膏用MCI柱层析进行脱色，以40％-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备火麻仁脱脂总提取物：将火麻仁药材粉碎，过筛，加入1‑2倍体积的石油醚，于25℃‑35℃条件下浸泡2h‑4h，过滤脱脂，滤渣用1.5‑2.5L的乙醇体积分数为70％‑90％的乙醇‑水于室温下反复渗漉提取2‑4次，每次1‑3天，合并提取液；浓缩后用石油醚萃取再次脱脂后，再用乙酸乙酯萃取，于30℃‑50℃条件下减压浓缩成浸膏；(2)分离：将步骤(1)的乙酸乙酯萃取浸膏用反相常压色谱柱层析，以甲醇‑水梯度洗脱；60％洗脱浓缩浸膏用MCI柱层析进行脱色素，以甲醇‑水梯度洗脱，用硅胶薄层层析检测，合并比移值相同流份，浓缩成0.51g/mL浸膏；浸膏用硅胶拌样,硅胶柱层析分离，以石油醚‑乙酸乙酯系统梯度洗脱，硅胶薄层层析检测，合并石油醚‑乙酸乙酯为(5‑3)：(5‑7)的流份，浓缩得浸膏；(3)纯化：将步骤(2)中最终得到的浸膏用甲醇溶解,以甲醇‑水作流动相,进行HPLC制备分离，收集Rt＝16min的流份，浓缩置于甲醇中析出白色结晶，干燥，即得。
【技术特征摘要】
1.一种从火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备火麻仁脱脂总提取物：将火麻仁药材粉碎，过筛，加入1-2倍体积的石油醚，于25℃-35℃条件下浸泡2h-4h，过滤脱脂，滤渣用1.5-2.5L的乙醇体积分数为70％-90％的乙醇-水于室温下反复渗漉提取2-4次，每次1-3天，合并提取液；浓缩后用石油醚萃取再次脱脂后，再用乙酸乙酯萃取，于30℃-50℃条件下减压浓缩成浸膏；(2)分离：将步骤(1)的乙酸乙酯萃取浸膏用反相常压色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；60％洗脱浓缩浸膏用MCI柱层析进行脱色素，以甲醇-水梯度洗脱，用硅胶薄层层析检测，合并比移值相同流份，浓缩成0.51g/mL浸膏；浸膏用硅胶拌样,硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，硅胶薄层层析检测，合并石油醚-乙酸乙酯为(5-3)：(5-7)的流份，浓缩得浸膏；(3)纯化：将步骤(2)中最终得到的浸膏用甲醇溶解,以甲醇-水作流动相,进行HPLC制备分离，收集Rt＝16min的流份，浓缩置于甲醇中析出白色结晶，干燥，即得。2.如权利要求1所述的从火麻仁中提取分离二酮哌嗪类吲哚生物碱的方法，其特征在于，步骤(2)中，反相常压色谱柱层析所用的甲醇-水梯度洗脱液中，甲醇的体积分数的梯度范围为10％-100％。3.如权利要求1所述的从火麻仁中提取分离二...
【专利技术属性】
技术研发人员：范培红，闫晓丽，唐嘉靖，张春梅，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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