一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，包括优化实验条件、建立线性关系和检测，利用荧光碳点作为探针，碳点的荧光随溴化乙锭浓度的增加而猝灭，溴化乙锭的荧光随小牛胸腺DNA浓度的增加而上升，碳点的荧光强度几乎不变，最后利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值来检测小牛胸腺DNA，荧光碳点的荧光强度变化值与溴化乙锭溶液的浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.999。而溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA有良好的线性关系，相关系数为0.999。本发明专利技术方法操作简单、检测快速且选择性好，可对混合样品中小牛胸腺DNA进行在线原位快速灵敏检测，相对与单独溴化乙锭荧光增敏的方法检测DNA有较大的灵敏度上面的提升。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学检测
，具体涉及一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法。
技术介绍
DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息；策划生物有次序地合成细胞和组织组分的时间和空间；确定生物生命周期自始至终的活性和确定生物的个性。运用DNA我们可以进行亲子鉴定以及个人的隐私保护等。目前，DNA的测定方法主要有分子杂交技术、基于DNA结合蛋白的方法和实时定量PCR法检测等。这些方法具有前处理繁琐、分析时间较长等不足。因此，建立简单、快速、灵敏的DNA检测新方法逐渐引起人们的关注并成为研究重点。近年来，荧光荧光碳点是继富勒烯、碳纳米管及石墨烯之后最热门的碳纳米材料之一。这种纳米材料克服了传统量子点的某些缺点，不仅具有优良的光学性能与小尺寸特性，而且具有良好的生物相容性，易于实现表面功能化，在生化传感、成像分析、环境检测、光催化技术及药物载体等领域具有很好的应用潜力。但迄今为止，将荧光碳点探针用于小牛胸腺DNA检测的相关报道仍未见。针对以上问题，我们研究了一种荧光碳点的探针检测小牛胸腺DNA的新方法，该方法操作简单、检测快速且灵敏度高，能进行溶液中溴化乙锭和小牛胸腺DNA的高灵敏识别。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提供了一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，包括以下步骤：1)优化实验条件：通过一定量的碳点与不同浓度的溴化乙锭溶液混合，其中，碳点的用量固定为20μL，溴化乙锭的浓度依次为0、1×10-6mol/L、3×10-5mol/L和6×10-5mol/L，通过荧光光谱图中碳点荧光强度猝灭最小确定最佳的溴化乙锭浓度；2)建立线性关系：配置多份标准溶液，其中，各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度是固定的，而小牛胸腺DNA的浓度逐渐增加，通过溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA，从荧光光谱图得出溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度之间的线性关系；3)检测：在小牛胸腺DNA待测溶液中，加入一定量的荧光碳点和溴化乙锭溶液，使得与上述各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度相同，根据溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度线性关系，确定小牛胸腺DNA待测溶液中小牛胸腺DNA的含量。优选的是，所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的最佳的溴化乙锭浓度为3×10-4mol/L。优选的是，所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述步骤2)中，各标准溶液中荧光碳点的用量为20μL，溴化乙锭的浓度为3×10-4mol/L；并且所述的步骤3)中，小牛胸腺DNA待测溶液中，荧光碳点的用量也为20μL，溴化乙锭的浓度为3×10-4mol/L。优选的是，所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述的步骤2)中标准水溶液中小牛胸腺DNA的浓度依次为0、4×10-6mol/L、4×10-5mol/L和8×10-4mol/L。优选的是，所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述的步骤2)和步骤3)中，荧光检测的激发波长为375nm；向荧光碳点溶液中加入小牛胸腺DNA溶液后，静置。优选的是，利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，荧光碳点对小牛胸腺DNA待测溶液的检出限可低至4.7×10-7mol/L。优选的是，所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述的荧光碳点合成方法如下：将1.0g1500聚乙二醇和15ml甘油搅拌后置于微波反应器中，将温度设定在140℃高温反应15min，待试管冷却到50℃时加入1.0g的丝氨酸，继续升温至180℃微波反应10min，将制得的样品注入分子量1000的透析袋中进行透析24小时后进行蒸发浓缩，300ml的透析液在60℃恒温的条件下旋转蒸发一个小时，最后得到样品260ml。本专利技术的有益效果：1、本专利技术提供的荧光碳点探针细胞毒性低、生物相容性好、荧光强度高、荧光稳定性好。2、采用本专利技术提供的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，检测过程简单方便，灵敏度高、检测限低，可实现实际样品中小牛胸腺DNA的快速、灵敏检测。附图说明图1是在利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法中，不同浓度的小牛胸腺DNA和荧光碳点与溴化乙锭混合溶液反应后，激发波长为375nm时所得到的荧光光谱图。图2是在利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法中，不同浓度的小牛胸腺DNA和荧光碳点与溴化乙锭混合溶液反应后，使溴化乙锭荧光强度上升而碳点的荧光强度几乎不变从而得到的溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA浓度线性图。图3是在利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法中，不同溴化乙锭浓度与碳点探针反应后，激发波长为375nm时所得到的荧光光谱图。图4是在利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法中，不同溴化乙锭浓度猝灭碳点荧光得到的线性图。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，但绝对不是对本专利技术范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本专利技术，但是本领域技术人员应当理解，本专利技术并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本专利技术的描述可以对本专利技术进行等同替换、组合、改良或修饰，这些都包括在本专利技术的范围内。实施例1配制四个标准水溶液，其中荧光碳点的用量均为20μL，向荧光碳点溶液中加入溴化乙锭溶液，使溴化乙锭溶液的最终浓度依次为0、1×10-6mol/L、3×10-5mol/L和6×10-5mol/L，静置1min，在激发波长为375nm下，检测385-650nm的荧光光谱，依次得图3中的荧光光谱图a，b，c和d，从而得出图4荧光碳点与溴化乙锭的线性关系，通过荧光光谱图中碳点荧光强度猝灭到最小来确定最佳的溴化乙锭浓度为3×10-4mol/L；配制四个标准水溶液，其中荧光碳点的用量均为20μL，溴化乙锭的浓度为3×10-4mol/L，向荧光碳点和溴化乙锭的混合溶液中加入小牛胸腺DNA溶液，使小牛胸腺DNA溶液的最终浓度依次为0、4×10-6mol/L、4×10-5mol/L和8×10-5mol/L，静置1min，在激发波长为375nm下，检测385-650nm的荧光光谱，依次得图1中中荧光光谱图a，b，c和d。从图3和图4中可知碳点的荧光强度随溴化乙锭浓度的增加而猝灭，并且荧光碳点探针的荧光强度变化值与溴化乙锭溶液的浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.999。从图1和图2中可知，通过溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA，溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA浓度有良好的线性关系，相关系数为0.999，根据这种线性关系确定小牛胸腺DNA待测溶液中小牛胸腺DNA的含量。本专利技术利用溴化乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)优化实验条件：通过一定量的碳点与不同浓度的溴化乙锭溶液混合，其中，碳点的用量固定为20μL，溴化乙锭的浓度依次为0、1×10‑6mol/L、3×10‑5mol/L和6×10‑5mol/L，通过荧光光谱图中碳点荧光强度猝灭到最小，来确定最佳的溴化乙锭浓度；2)建立线性关系：配置多份标准溶液，其中，各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度是固定的，而小牛胸腺DNA的浓度逐渐增加，通过溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA，从荧光光谱图得出溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度之间的线性关系；3)检测：在小牛胸腺DNA待测溶液中，加入一定量的荧光碳点和溴化乙锭溶液，使得与上述各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度相同，检测该小牛胸腺DNA待测溶液的荧光强度，并根据溴化乙锭和荧光碳点荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度线性关系，确定小牛胸腺DNA待测溶液中小牛胸腺DNA的含量。

【技术特征摘要】
1.一种利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)优化实验条件：通过一定量的碳点与不同浓度的溴化乙锭溶液混合，其中，碳点的用量固定为20μL，溴化乙锭的浓度依次为0、1×10-6mol/L、3×10-5mol/L和6×10-5mol/L，通过荧光光谱图中碳点荧光强度猝灭到最小，来确定最佳的溴化乙锭浓度；2)建立线性关系：配置多份标准溶液，其中，各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度是固定的，而小牛胸腺DNA的浓度逐渐增加，通过溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA，从荧光光谱图得出溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度之间的线性关系；3)检测：在小牛胸腺DNA待测溶液中，加入一定量的荧光碳点和溴化乙锭溶液，使得与上述各份标准溶液中荧光碳点的用量和溴化乙锭的浓度相同，检测该小牛胸腺DNA待测溶液的荧光强度，并根据溴化乙锭和荧光碳点荧光强度的比值与小牛胸腺DNA的浓度线性关系，确定小牛胸腺DNA待测溶液中小牛胸腺DNA的含量。2.如权利要求1所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的最佳的溴化乙锭浓度为3×10-4mol/L。3.如权利要求1所述的利用溴化乙锭和荧光碳点的荧光强度比值检测小牛胸腺DNA的方法，其特征在于，所述步骤2)中，各标准溶液中荧光碳点的用量为20μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：珊，肖琦，王鲁敏，谢江宁，
申请(专利权)人：广西师范学院，
类型：发明
国别省市：广西;45