基于高通量测序技术进行核酸适配体序列优化的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高通量测序技术进行核酸适配体序列优化的方法，包括将核酸适配体以单个碱基顺移的方式解析后，合成带有接头DNA片段的解析DNA片段；将解析DNA片段与靶标孵育，获得其中与靶标结合的部分；以结合解析DNA片段为模板，采用逆转录酶催化获得双链DNA文库；采用高通量测序技术对获得的双链DNA文库进行测序，然后根据测序结果，选择百分比最高的解析DNA片段作为核酸适配体的优化序列。本发明专利技术比普通的核酸适配体方法更准确、快速，可以实现多种核酸适配体、多种靶标类型的同步、高通量分析，提高了核酸适配体优化研究的效率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于高通量测序技术进行核酸适配体序列优化的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1) 将候选核酸适配体以单个碱基顺移的方式分解为解析序列；(2) 合成解析DNA片段，所述解析DNA片段包含解析序列，一端与DNA接头相连，所述一端为解析序列的3’端或5’端；(3) 将解析DNA片段按等摩尔混合后制备成解析DNA文库，将解析DNA文库与靶标的混合物，在一定条件下孵育，所述靶标为筛选适配体所采用的物质；所述一定条件为核酸适配体筛选时的孵育条件，包括孵育的温度、时间以及缓冲液的类型、pH值；(4) 将结合解析DNA片段与游离解析DNA片段分离，所述结合解析DNA片段为与靶标结合的解析DNA片段；(5) 将结合解析DNA片段与靶标分离，制备结合解析DNA文库；(6) 以结合解析DNA文库为模板，利用引物和逆转录酶合成结合解析DNA片段的互补链，制备双链DNA文库，所述的引物与所述解析DNA片段中DNA接头序列互补；(7) 采用高通量测序技术对获得的双链DNA文库进行高通量测序，然后对测序结果进行分析，双链DNA文库中序列最多的解析序列为核酸适配体的优化序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王开宇，兰小鹏，吴冬，马立强，陈庄，
申请(专利权)人：中国人民解放军南京军区福州总医院，
类型：发明
国别省市：福建;35