【技术实现步骤摘要】
一种在材料表面打印双蛋白复合微图案的方法
本专利技术涉及微生物
,尤其涉及的是一种在材料表面打印双蛋白复合微图案的方法。
技术介绍
细胞的生长,分化与其所处的生理环境密切相关。在体内,细胞外基质以及相邻细胞的分布与排列使得细胞的生长具有很强的导向性,这种来自环境的信号在诸如血管、骨骼、神经等组织的再生中有极为重要的意义。而在体外,细胞的生长则依赋于材料的属性。近来科研进展表明,多种细胞可以响应材料在微米尺寸的几何结构以及成分分布。理想的生物兼容性材料应当可以针对性地参与组织修复与再生,可以实现特定细胞的黏附及相关生长因子的选择性相互作用。此种材料将作为可植入材料在组织工程及医疗修复领域发挥重要作用。为了能使生物分子能在基底材料上规则地分布,就需要通过微加工手段在基底表面构筑微图案,最终达到引导相关细胞定位黏附及定向生长的目的。哈佛大学Whitesides教授研究小组专利技术的″软刻蚀″技术能在多种材料表面上实现微图案化。将软刻蚀技术中的微接触打印与生物分子吸附技术相结合,通过对表面生物分子的吸附沉积过程加以控制,已经研究出了许多在基底表面实现蛋白质的图案化的工艺方法。然而,目前的研究多局限于单一种类的蛋白质图案化,虽然尚有一些实现复合微图案即将两种或多种类型的分子共同结合在同一块基底上,这些方法也都难以实现不同类型的分子严格的区域化分布,从而难以满足生物工程中日趋复杂的结构生长需求。
技术实现思路
本
技术实现思路
鉴于现有技术的以上缺点,目的是提供一种在材料表面制备两种蛋白质的复合微图案的方法,即采用微接触打印,微转移技术以及表面吸附沉积相结合的方法,制备 ...
【技术保护点】
一种在材料表面打印双蛋白复合微图案的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)具有凹凸微结构的PDMS基底的制备;(2)两种蛋白溶液的配制;(3)微图案的打印:用步骤(2)得到的第一种蛋白溶液浸泡步骤(1)得到的带有凹凸微结构的PDMS基底,使得PDMS基底上均匀附着第一种蛋白,之后去除多余溶液,以PBS溶液清洗两次,再以氮气吹干;(4)PDMS平印章的制备:分别按两种质量比例充分混合PDMS与硅橡胶固化剂,所得混合物浇铸在表面平整的硅模版上;于65℃下固化4小时后将固化物从硅模板上剥离得到两种PDMS平印章。(5)将步骤(4)得到的第一种PDMS平印章通过plasma做亲水性处理,再将印章反扣在步骤(3)得到的打印有微图案的PDMS基底上,使得PDMS基底凸起部分的第一种蛋白被印章转移走,PDMS基底仅在凹下部分表面附着有第一种蛋白;(6)将步骤(4)得到的第二种PDMS平印章浸泡在步骤(2)得到的第二种蛋白溶液中,静置半小时,之后以氮气吹干,再以此印章反扣在(5)得到的只有凹下部分表面附着第一种蛋白的PDMS基底上,保持紧密接触后剥离,使得PDMS基底凸起部分均匀打印上第二种蛋白,得到 ...
【技术特征摘要】
1.一种在材料表面打印双蛋白复合微图案的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)具有凹凸微结构的PDMS基底的制备;(2)两种蛋白溶液的配制;(3)微图案的打印:用步骤(2)得到的第一种蛋白溶液浸泡步骤(1)得到的带有凹凸微结构的PDMS基底,使得PDMS基底上均匀附着第一种蛋白,之后去除多余溶液,以PBS溶液清洗两次,再以氮气吹干;(4)PDMS平印章的制备:分别按两种质量比例充分混合PDMS与硅橡胶固化剂,所得混合物浇铸在表面平整的硅模板上;于65℃下固化4小时后将固化物从硅模板上剥离得到两种PDMS平印章;(5)将步骤(4)得到的第一种PDMS平印章通过plasma做亲水性处理,再将印章反扣在步骤(3)得到的打印有微图案的PDMS基底上,使得PDMS基底凸起部分的第一种蛋白被印章转移走,PDMS基底仅在凹下部分表面附着有第一种蛋白;(6)将步骤(4)得到的第二种PDMS平印章浸泡在步骤(2)得到的第二种蛋白溶液中,静置半小时,之后以氮气吹干,再以此印章反扣在步骤(5)得到的只有凹下部分表面附着第一种蛋白的PDMS基底上,保持紧密接触后剥离,使得PDMS基底凸起部分均匀打印上第二种蛋白,得到PDMS表面形状规则的双种蛋白质复合微图案。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)的具体方法为:按质量比10∶1的比例充分混合聚二甲基硅氧烷PDMS与硅橡胶固化剂,所得混合物浇铸在表面具有微米尺寸凹凸微结构的SU-8光刻胶模板上;于65℃下固化4小时后将固化物从SU-8光刻胶模板上剥离得到具有凹凸微结构的PDMS基底;SU-8光刻胶模板采用光刻方法将设计好的图形在SU-8光刻胶上曝光,然后采用显影液进行显影,控制显影时间,使未曝光的SU-8光刻胶部分去除;然后将其置于烘箱内进行烘烤,使曝光区域的SU-8光刻胶完全固化后所得。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)的具体方法为:Collagen和FN两种蛋白分别溶于磷酸缓冲盐溶液PBS中,配制成50μg/mlCollagen和FN溶液。4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,以胶原蛋白Collagen和纤连蛋白FN为原料通过分次微接触打印使C...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨平,胡本慧,裘育,
申请(专利权)人:浙江农林大学,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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