一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法技术

本发明专利技术提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，包括如下步骤：取Tris-HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合，得到TNE buffer病毒浓缩液；取蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液；将病毒提取液与慢病毒上清液的混合溶液放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，4℃的条件下离心；去除上清液，随后中加入PBS，得到慢病毒溶液，将慢病毒溶液放入冰箱中4℃条件下静置，上清液即为高滴度慢病毒产品；该方法不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品，慢病毒产品制备成本低，该方法操作简单，可以广泛用于大部分实验室。

【技术实现步骤摘要】
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法
本专利技术涉及一种制备高滴度慢病毒产品的方法，具体涉及一种不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品的方法。
技术介绍
慢病毒是HIV病毒改造而来，能侵染分裂及非分裂细胞。改造的慢病毒可以在体外培养的HEK293细胞生产，慢病毒浓缩能显著提高慢病毒的滴度，可以用于脑等部位注射进行在体实验。目前，大部分方法浓缩慢病毒需要超高速离心(离心力在90000g以上)，超高速离心机的昂贵及操作复杂，很难成为常规操作，因此大大增加了慢病毒产品的制备成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术的不足，并提供一种不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品的方法。实现本专利技术目的所采用的技术方案为，一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，包括如下步骤：(1)制备TNEbuffer病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到TNEbuffer病毒浓缩液，TNEbuffer病毒浓缩液中，Tris-HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNEbuffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管中，静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，2～6℃的条件下离心1～4小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：3～1：5；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝500：1～50：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中加入PBS，得到慢病毒溶液，保持慢病毒溶液的液面平稳，将慢病毒溶液放入冰箱中，2～6℃条件下静置8～24小时，将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出，上清液即为高滴度慢病毒产品。步骤1中Tris-HCl溶液、NaCl溶液和EDTA溶液的体积比为Tris-HCl溶液：NaCl溶液：EDTA溶液＝60：80：0.6～140：240：1.2。步骤3中取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管的具体步骤是先将病毒提取液加入离心管中，再将慢病毒上清液滴加在病毒提取液中静置形成分层。步骤3中取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管的具体步骤是先将慢病毒上清液加入离心管中，再将病毒提取液注入离心管管底中静置形成分层。步骤3中用离心机对离心管进行离心时，离心机运行模式为上升速度和下降速度最慢的模式。由上述技术方案可知，使用TNEbuffer病毒浓缩液溶解蔗糖，制备蔗糖质量体积浓度为0.05～0.5g/mL的病毒提取液，并使用该病毒提取液浓缩慢病毒上清液中的慢病毒，在常规离心力1000g～10000g的离心条件下即可制备高滴度慢病毒产品，离心时选择离心机上升速度和下降速度最慢的模式进行混合溶液的离心，可提高慢病毒的产量。与现有技术相比，该方法不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品，慢病毒产品制备成本低，该方法操作简单，可以广泛用于大部分实验室。附图说明图1为HEK293人类胚胎肾细胞的流式细胞仪分析图。图2为超高速离心浓缩慢病毒的流式细胞仪分析图。图3为本实施例制备慢病毒的流式细胞仪分析图。图4为GFP阳性细胞的百分比对比图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进行详细具体说明，以下实施例中使用的慢病毒材料为GFP慢病毒。实施例1：一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，离心力10000g，离心4小时，50倍浓缩，步骤如下：(1)制备TNEbuffer病毒浓缩液：取pH为7.4的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液，按Tris-HCl：NaCl：EDTA＝100：200：1的体积比混合，得到TNEbuffer病毒浓缩液，TNEbuffer病毒浓缩液中，Tris-HCl的浓度为50mmol/L，NaCl的浓度为100mmol/L，EDTA的浓度为0.5mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNEbuffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.1g/mL；(3)离心：将病毒提取液加入离心管中，再将慢病毒上清液滴加在病毒提取液中静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，选择离心机上升速度和下降速度最慢的运行模式进行混合溶液的离心，在相对离心力10000g，4℃的条件下离心4小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：4；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝50：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中加入PBS，得到慢病毒溶液，保持慢病毒溶液的液面平稳，将慢病毒溶液放入冰箱中，4℃条件下静置24小时，将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出，上清液即为高滴度慢病毒产品。实施例2：一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，离心力5000g，离心2小时，500倍浓缩，步骤如下：(1)制备TNEbuffer病毒浓缩液：取pH为7.2的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液，按Tris-HCl：NaCl：EDTA＝110：200：1的体积比混合，得到TNEbuffer病毒浓缩液，TNEbuffer病毒浓缩液中，Tris-HCl的浓度为50mmol/L，NaCl的浓度为90mmol/L，EDTA的浓度为0.45mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNEbuffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.2g/mL；(3)离心：将慢病毒上清液加入离心管中，再将病毒提取液注入离心管管底中静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，选择离心机上升速度和下降速度最慢的运行模式进行混合溶液的离心，在相对离心力5000g，4℃的条件下离心2小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：4；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝500：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中加入PBS，得到慢病毒溶液，保持慢病毒溶液的液面平稳，将慢病毒溶液放入冰箱中，4℃条件下静置18小时，将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出，上清液即为高滴度慢病毒产品。实施例3：一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，离心力1000g，离心4小时，100倍浓缩，步骤如下：(1)制备TNEbuffer病毒浓缩液：取pH为7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液，按Tris-HCl：NaCl：EDTA＝80：160：1的体积比混合，得到TNEbuffer病毒浓缩液，TNEbuffer病毒浓缩液中，Tris-HCl的浓度为40mmol/L，NaCl的浓度为80mmol/L，EDTA的浓度为0.5mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNEbuffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.5g/mL；(3)离心：将慢病毒上清液加入离心管中，再将病毒提取液注入离心管本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备TNE buffer病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris‑HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到TNE buffer病毒浓缩液，TNE buffer病毒浓缩液中，Tris‑HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管中，静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，2～6℃的条件下离心1～4小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：3～1：5；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝500：1～50：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中加入PBS，得到慢病毒溶液，保持慢病毒溶液的液面平稳，将慢病毒溶液放入冰箱中，2～6℃条件下静置8～24小时，将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出，上清液即为高滴度慢病毒产品。...

【技术特征摘要】
1.一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备TNEbuffer病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到TNEbuffer病毒浓缩液，TNEbuffer病毒浓缩液中，Tris-HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNEbuffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管中，病毒上清液位于病毒提取液上方，静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，在相对离心力1000g～5000g，2～6℃的条件下离心1～4小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：3～1：5；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝500：1～50：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋伟，阳小飞，李小红，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42