一种测定杆状病毒滴度的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定杆状病毒滴度的方法，该方法包括如下步骤：将对数生长期的昆虫细胞以2×104～4×104/0.1mL/孔的细胞密度铺到细胞培养板中，置培养箱中培养使昆虫细胞贴于孔底；将被检的杆状病毒接种到昆虫细胞板中于培养箱中培养；弃去细胞板内培养基，固定，洗细胞板，加入gp64单抗孵育，洗细胞板，再加入羊抗鼠荧光抗体孵育，洗细胞板，荧光显微镜下观察；计算病毒的TCID50。本发明专利技术测定杆状病毒滴度的方法结合了间接免疫荧光，是一种直接判定各孔细胞是否感染的TCID50测定方法，重复性好，得到的检测结果更为准确，不需要结合细胞病变来进行判断，没有主观和经验因素的影响。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种测定杆状病毒滴度的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）昆虫细胞板的制备：将对数生长期的昆虫细胞以2×104～4×104/0.1mL/孔的细胞密度铺到细胞培养板中，置培养箱中培养使昆虫细胞贴于孔底；（2）接种杆状病毒：将被检的杆状病毒接种到昆虫细胞板中于培养箱中培养；（3）间接免疫荧光确定被感染的细胞孔数：弃去细胞板内培养基，固定，洗细胞板，加入gp64单抗孵育，洗细胞板，再加入羊抗鼠荧光抗体孵育，洗细胞板，荧光显微镜下观察，细胞膜显示亮绿色荧光判定该细胞所在孔为阳性孔；（4）病毒滴度计算：计算病毒的TCID50。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李晶梅，朱薇，温文生，漆世华，谢红玲，靖志强，李建，秦红刚，廖园园，
申请(专利权)人：武汉中博生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：