本发明专利技术具体涉及一种中品肝素钠的提取方法。该中品肝素钠的提取方法，包括：溶解；酶解；去除蛋白；去除钙离子；沉淀；树脂吸附；洗脱；一次氧化；过滤、沉淀；二次氧化；过滤、沉淀；脱水、烘干；称量、包装。采用过氧化氢二次氧化法制备中品肝素钠，确立了酶解结合树脂吸附和氧化法制备肝素钠的新工艺，客服了粗品肝素钠纯化过程中残留杂蛋白难以去除的缺点；在粗品肝素钠溶液中加入胰蛋白酶对杂蛋白进行溶解，再结合树脂吸附及氧化除杂，提高了中品肝素钠的效价和收率。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术具体涉及。该中品肝素钠的提取方法，包括：溶解；酶解；去除蛋白；去除钙离子；沉淀；树脂吸附；洗脱；一次氧化；过滤、沉淀；二次氧化；过滤、沉淀；脱水、烘干；称量、包装。采用过氧化氢二次氧化法制备中品肝素钠，确立了酶解结合树脂吸附和氧化法制备肝素钠的新工艺，客服了粗品肝素钠纯化过程中残留杂蛋白难以去除的缺点；在粗品肝素钠溶液中加入胰蛋白酶对杂蛋白进行溶解，再结合树脂吸附及氧化除杂，提高了中品肝素钠的效价和收率。【专利说明】(一)
本专利技术属于生化行业领域，具体涉及。 (二)
技术介绍
肝素是1916年Mclean研究凝血机制时从肝脏组织中发现的一种酸性粘多糖。1939年，BrinkhousfIj等证明了肝素具有抗凝血活性，从此，肝素作为天然抗凝血物质而受到世界各国的重视。肝素用于临床虽有60余年的历史，但到目前为止，还没有一种能够完全代替它的产品，所以它仍然是最重要的生化药物之一，也是我国主要的出口药物之一。肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。 (三)
技术实现思路
本专利技术提供了，肝素和大多数粘多糖一样，在动物体内多以肝素钠一蛋白质复合物的形式存在，提取过程中由于肝素钠解离不完全使得粗品肝素钠中残留有一定数量的蛋白质，需进一步加工才可用于临床。中品肝素钠的提取就是对粗品肝素钠进行除杂和脱色。 本专利技术是通过如下技术方案实现的:，其特殊之处在于:包括以下步骤:(1)溶解:按照3%的肠衣盐水:粗品肝素钠的亿单位10-15:1的比例，将粗品肝素钠溶于3%的肠衣盐水中，搅拌升温至35-40°C，反应；(2)酶解:用NaOH调节溶液至pH7.5-8.0，按16g/亿单位的比例向反应液中加入胰酶，控制温度在38-42 °C反应；(3)去除蛋白:调PH至8.5，升温至55-65°C，按肝素钠质量的20-30%加入氯化钙，反应，继续升温至90-95°C，停止加热，然后降温至35-45°C，进行离心；(4)去除钙离子:保持溶液温度35-45°C，加入与氯化钙等量的无水碳酸钠，反应，过滤，收集滤液；(5)沉淀:用盐酸调pH至7.0-7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38-42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；(6)树脂吸附:按照10%-15%浓度加水溶解，溶解后，按溶液体积的0.06-1%加入亚硫酸钠，调节PH7.0-7.5，温度55-60°C，按照肝素钠亿单位:树脂体积比1:10的比例加入树脂进行吸附，吸附，吸附结束后，过滤，收集树脂；(7)洗脱:将所收集到的树脂，用饱和肠衣盐水:树脂1.2-1.5:1的比例进行洗脱，按溶液体积的0.06-1%加入亚硫酸钠，调节pH7.0-7.5，温度55-60°C，洗脱，洗脱结束后，收集洗脱液；(8)合并、沉淀:将收集到的洗脱液合并，用食品级乙醇进行沉淀，上层乙醇度数38-42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀； (9)一次氧化:将步骤收集到的沉淀，用2%的肠衣盐水按10%-15%的浓度进行溶解，溶解后，调节ρΗΙΟ.5-11.0，温度25-30。。，加入H202进行氧化；(10)过滤、沉淀:将溶液过滤，收集过滤液，用盐酸调pH7.0-7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38-42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀； (11)二次氧化:将步骤(10)收集到的沉淀，重复步骤(9)的操作，进行二次氧化；(12)过滤、沉淀:重复步骤(10)的操作，将溶液进行过滤、沉淀；(13)脱水、烘干:将步骤(12)收集到的沉淀，用95-100度乙醇进行脱水，脱水后的沉淀用双锥进行烘干，即得中品肝素钠； (14)称量、包装:将中品肝素钠，进行称量，按规格要求，将中品肝素钠进行包装得成品O 本专利技术的中品肝素钠的提取方法，步骤(I)反应为2-3小时，步骤(2)反应时间为4-5小时，步骤(6)吸附时间为4-5小时。 本专利技术的中品肝素钠的提取方法，所述步骤(3)去除蛋白:调PH至8.5，升温至600C，按肝素钠质量的20-30%加入氯化钙，反应0.5小时，继续升温至90-95°C，停止加热，然后降温至35-45°C，进行离心。 本专利技术的中品肝素钠的提取方法，所述步骤(6)树脂吸附:将步骤(5)所得沉淀，按照10%-15%浓度加水溶解，溶解后，按溶液体积的0.06-0.08%加入亚硫酸钠，调节PH7.0-7.5，温度55-60°C，按照体积比肝素钠亿单位:树脂1:10的比例加入树脂进行吸附，吸附4-5小时，吸附结束后，过滤，收集树脂。 本专利技术的中品肝素钠的提取方法，所述步骤(7)洗脱:将步骤(6)所收集到的树月旨，用饱和肠衣盐水:树脂1.2-1.5:1的比例进行洗脱，按溶液体积的0.06-0.08%加入亚硫酸钠，调节PH7.0-7.5，温度55-60°C，洗脱时间2小时，洗脱结束后，收集洗脱液，然后重复上述步骤，将树脂进行二次洗脱。 本专利技术的中品肝素钠的提取方法，所述步骤(9) 一次氧化:将收集到的沉淀，用2%的肠衣盐水按10%-15%的浓度进行溶解，溶解后，调节ρΗΙΟ.5-11.0，温度25_30°C，加入溶液体积2%的H2O2进行氧化，H2O2分4次加入，加入时间分别为O小时、I小时、2小时、4小时，维持pH、温度，共氧化24小时。 本专利技术的有益效果:采用过氧化氢二次氧化法制备中品肝素钠，在此过程中采用低温离心技术解决了去除杂蛋白时沉淀不易滤除的困难，确立了酶解结合树脂吸附和氧化法制备肝素钠的新工艺，客服了粗品肝素钠纯化过程中残留杂蛋白难以去除的缺点；在粗品肝素钠溶液中加入胰蛋白酶对杂蛋白进行溶解，再结合树脂吸附及氧化除杂，提高了中品肝素钠的效价和收率。本专利技术在树脂吸附以及洗脱中加入了亚硫酸钠，大大提高了肝素钠的收率(提高至少30%)，以及肝素钠溶液的澄清度和吸光度。 (四)【具体实施方式】实施例1:(I)溶解:粗品肝素钠2Kg，效价95 USP u/mg，折合粗品肝素钠1.9亿单位。用3%的肠衣盐水22.8L进行溶解，搅拌升温至38°C，反应2小时。 (2)酶解:步骤(I)结束后，用20%的NaOH调节溶液PH 7.5，加入胰酶30.4g，控制温度40°C，反应4小时。 (3)去除蛋白:步骤(2)结束后，调pH至8.5，升温至60°C，加入氯化钙500g，反应0.5小时，继续升温至90°C，停止加热。然后降温至40°C左右，进行离心。 (4)去除韩尚子:步骤(3)结束后，保持溶液温度40 C，加入无水碳酸纳500g，反应0.5小时，过滤，收集滤液。 (5)沉淀:将步骤(4)所得的过滤液,用6mol/L的盐酸调ρΗ7.0,用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数39度，静置4小时。上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀。 (6)树脂吸附:将步骤(5)所得沉淀2.38Kg，加入2%的肠衣盐水23.8L进行溶解，溶解后，加入亚硫酸钠14.28g，调节pH7.0，温度58°C。检测溶液活性7810单位/mL，折合肝素钠本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中品肝素钠的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）溶解：按照3%的肠衣盐水：粗品肝素钠的亿单位10‑15:1的比例，将粗品肝素钠溶于3%的肠衣盐水中，搅拌升温至35‑40℃，反应；（2）酶解：用NaOH调节溶液至pH 7.5‑8.0，按16g/亿单位的比例向反应液中加入胰酶，控制温度在38‑42℃反应；（3）去除蛋白：调pH 至8.5，升温至55‑65℃，按肝素钠质量的20‑30%加入氯化钙，反应，继续升温至90‑95℃，停止加热，然后降温至35‑45℃，进行离心；（4）去除钙离子：保持溶液温度35‑45℃，加入与氯化钙等量的无水碳酸钠，反应，过滤，收集滤液；（5）沉淀：用盐酸调pH至7.0‑7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（6）树脂吸附：按照10%‑15%浓度加水溶解，溶解后，按溶液体积的0.06‑1%加入亚硫酸钠，调节pH7.0‑7.5，温度55‑60℃，按照肝素钠亿单位：树脂体积比1:10的比例加入树脂进行吸附，吸附，吸附结束后，过滤，收集树脂；（7）洗脱：将所收集到的树脂，用饱和肠衣盐水：树脂1.2‑1.5:1的比例进行洗脱，按溶液体积的0.06‑1%加入亚硫酸钠，调节pH7.0‑7.5，温度55‑60℃，洗脱，洗脱结束后，收集洗脱液；（8）合并、沉淀：将收集到的洗脱液合并，用食品级乙醇进行沉淀，上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（9）一次氧化：将步骤收集到的沉淀，用2%的肠衣盐水按10%‑15%的浓度进行溶解，溶解后，调节pH10.5‑11.0，温度25‑30℃，加入H2O2进行氧化；（10）过滤、沉淀：将溶液过滤，收集过滤液，用盐酸调pH7.0‑7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（11）二次氧化：将步骤（10）收集到的沉淀，重复步骤（9）的操作，进行二次氧化；（12）过滤、沉淀：重复步骤（10）的操作，将溶液进行过滤、沉淀；（13）脱水、烘干：将步骤（12）收集到的沉淀，用95‑100度乙醇进行脱水，脱水后的沉淀用双锥进行烘干，即得中品肝素钠；（14）称量、包装：将中品肝素钠，进行称量，按规格要求，将中品肝素钠进行包装得成品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李鑫，谢成君，王慧，陈露，刘建洋，甄爱华，
申请(专利权)人：山东绅联生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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