抗生素产生菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗生素产生菌及其应用。本发明专利技术所述的抗生素产生菌系链霉菌属，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomyces sp.lnu-13)，保藏编号为CCTCC NO：M2014555。本发明专利技术所述的Lnu-13菌株经PCR技术，DNA测序仪分析，该菌株的16SrDNA序列由1409个碱基组成。本发明专利技术采用平板对峙法，检测Lnu-13对多种供试病原菌的拮抗作用，其中对金黄葡萄球菌、甜瓜枯萎病菌和番茄叶霉病菌均具有较强的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
抗生素产生菌及其应用
本专利技术涉及微生物
，特别涉及一种具有高效、广谱的抗多种植物病原菌的链霉菌菌株及其应用。本专利技术所称的抗生素产生菌，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2014555。
技术介绍
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70％是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂、维生素和有机酸等。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。因此，放线菌与人类关系密切，开发新的抗生素产生菌种在医药工业及农业生物防治上有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有广谱拮抗活性的土壤放线菌—链霉菌Lnu-13。本专利技术的另一目的在于提供链霉菌Lnu-13在抗植物病原真菌和病原细菌中的应用。本专利技术的抗生素产生菌，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2014555。本专利技术的链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)，是从辽宁省仙人洞国家自然保护区土壤中分离得到。将土壤样品稀释105，利用高氏一号培养基，采用常规的平板划线分离法进行分离培养，挑取放线菌单菌落，编号备用，筛选而得。1、链霉菌Lnu-13的显微形态特征图1为Lnu-13在光学显微镜100X下的孢子丝和气生菌丝形态，在显微镜下观察，Lnu-13菌株基内菌丝无横膜，不断裂；气生菌丝发达，多分枝，孢子丝大部分为直形、波曲形，有些为螺旋状。孢子呈圆形或椭圆形。图2为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征(正面)，图3为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征(反面)，图中显示Lnu-13在高氏一号培养基上生长良好，表面形状为棉絮状，菌落与培养基着生紧密。菌株Lnu-13的菌丝形态符合链霉菌属的特征。2、Lnu-13生理生化特性：菌株Lnu-13使牛奶凝固和胨化、水解淀粉能力较强、能产生硫化氢但较弱，不能液化明胶，不能分解纤维素、不能还原硝酸盐，氯化钠对菌株成长影响不大。在供试的碳源中，不能利用木糖，在含有葡萄糖、半乳糖和蔗糖的培养基上生长旺盛，对淀粉和纤维二糖的利用能力较差。3、链霉菌Lnu-13的16SrDNA序列分析方法：(1)链霉菌Lnu-13的DNA提取采用反复冻融法，以此为模板进行PCR扩增。(2)PCR引物：正向引物BSF8/27：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′反向引物BSR1541/1522：5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′(3)PCR引物由上海生物工程有限公司合成。(5)PCR扩增条件：94℃5min；94℃30s，57℃30s，72℃1.5min；30个循环；72℃5min。本专利技术链霉菌Lnu-13菌株，PCR产物测序由上海生物工程有限公司完成，测得的序列如SCQIDNO.1所示，将所测得的16SrDNA序列用BLAST搜索工具从GeneBank中调出与其相关的16SrDNA序列，然后用CLASTALX软件进行多序列比对，并采用MEGA4.1软件中的邻位相接法(Neighbor-Joining)进行系统进化树的构建与同源性比较，所构建的系统进化树见图4。链霉菌Lnu-13菌株经PCR技术，DNA测序仪分析，它的16SrDNA序列全长1409bp，将其与GeneBank数据库中相关菌株的16SrDNA序列进行比较，结果与已报道的蓝色链霉菌(Streptomycescyaneus)同源性达到99％。本专利技术从辽宁省仙人洞国家自然保护区土壤中得到的链霉菌Lnu-13，通过生理生化反应，并利用PCR反应扩增该菌株的16SrDNA，经过测序鉴定，利用CLASTALX软件进行多序列比对，然后用MEGA4.1软件中的邻位相接法(Neighbor-Joining)进行系统进化树的构建，鉴定链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)菌株为蓝色链霉菌(Streptomycescyaneus)。本专利技术的有益效果是：本专利技术所提供的链霉菌Lnu-13对多种常见植物病原真菌具有拮抗作用，同时对病原细菌具有很好的抑菌效果，其中对金黄葡萄球菌抑制作用最强，抑菌带宽达到18.6mm。以甜瓜枯萎病为例对Lnu-13发酵液进行了田间药效实验，结果显示Lnu-13对甜瓜枯萎病具有很好的防治效果，防治效果可以达到71％，且对甜瓜幼苗生长有一定的促进作用。本专利技术所提供的链霉菌Lnu-13具有高效广谱的抑菌谱，展示了该菌株在农业的生物防治及医药行业具有很好的应用前景。附图说明抗生素产生菌，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，简称：CCTCC，保藏单位地址：中国，武汉大学，邮政编码：430072。保藏日期为2014年11月6日，保藏编号为CCTCCNO：M2014555。图1为Lnu-13的孢子丝和气生菌丝形态(光学显微镜100X)。图2为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征(正面)。图3为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征(反面)。图4为Lnu-13菌株的系统发育进化树。具体实施方式实施例1链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)的抑菌作用1)活化：将链霉菌Lnu-13(Streptomycessp.lnu-13)(CCTCCNO：M2014555)，在无菌操作台上操作，用无菌接种环沾取保藏的菌液后均匀涂在高氏1号斜面固体平板上，28℃培养3～5天。2)采用平板对峙法，刮取经过活化的Lnu-13孢子制备悬浮液，根据供试病原菌分别在PDA((病原真菌)及牛肉膏蛋白胨(病原细菌)固体平板中间均匀划线，30℃培养3～5天。再于Lnu-13划线垂直方向等距离接种各种病原菌，继续培养2～5天，观察记录抑菌情况。每处理重复3次，结果如表1。病原菌分别采用：金黄葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)，产气肠杆菌(Enterobacteraerogene)，蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)，辣椒根腐病菌(PepperRootRot)、番茄叶霉病菌(Cladosporiumfulvum)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、甜瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)。表1病原菌抑菌带平均宽度金黄葡萄球菌(Staphylococcusaureus)18.6mm热带假丝酵母(Candidatropicalis)7.6mm产气肠杆菌(Enterobacteraerogene)9.8mm蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)11.3mm辣椒根腐病菌(PepperRootRot)12.1mm番茄叶霉病菌(Cladosporiumfulvum)15.8mm番茄早疫病菌(Alternariasolani)14.6mm甜瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)16.7mm由表1可见，本专利技术的链霉菌Lnu-13本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗生素产生菌，其特征在于：命名为链霉菌Lnu‑13(Streptomyces sp.lnu‑13)，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2014555。

【技术特征摘要】
1.一种抗生素产生菌，其特征在于：命名为链霉菌(Streptomycessp.)Lnu-13，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2014555，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述的链霉菌Lnu-13在抑制辣椒根腐病菌、番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌、甜瓜枯萎病菌、金黄葡萄球菌、产气肠杆菌、蜡质芽孢...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑方亮，朱春玉，潘思明，郑甜甜，张茂盛，刘宏生，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21