白蜡树组织培养快速繁育的方法技术

本发明专利技术公开了一种白蜡树组织培养快速繁育的方法，该方法通过材料消毒、启动培养、增殖分化培养、生根培养、移栽、壮苗培养等几个步骤，将白蜡树的腋芽或茎尖繁育为苗圃苗，试管苗移栽的成活率在90％以上。该方法繁育速度快，可以周年进行，能显著加快白蜡树的繁育进程，有效解决我国盐碱地大面积绿化所需绿植苗源的问题，同时还可以大幅降低绿化的成本，节约公共资源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种树木繁育的方法，具体涉及一种培养繁育白蜡树的方法。
技术介绍
白蜡树(Fraxinus chinensis),别名青榔木、白荆树,为木犀科白蜡树属落叶乔木,全世界总共约有70种，我国有20多种，多为用材树种和园林绿化树种，主要分布在温带地区。白蜡树枝叶繁茂，根系发达，生长迅速，干形通直，树形美观，适应性强，具有良好的抗盐性，能够在盐碱地中种植，是用于盐碱地绿化的重要树种。长期以来，白蜡树以种子繁殖为主，由于其幼龄期长，具有明显的结实间隔期,因此繁殖周期较长，不仅如此，种子繁殖还存在种源遗传变异等诸多弊病。我国沿海等地区存在大面积的盐碱地，绿化所需苗木数量巨大，而作为优良抗盐植物的白蜡树目前的繁殖方法却周期长、效率低，无法满足绿化进程的需求，此问题亟待解决。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种白蜡树的快速繁育方法，该方法采用白蜡树的腋芽或茎尖组织进行培养繁育，能够显著加速白蜡树的繁育进程，且繁育苗的成活率在90％以上。为了实现本专利技术的目的，专利技术人提供了以下技术方案。白蜡树组织培养快速繁育的方法，包括以下操作步骤：A、材料消毒：取白蜡树腋芽或茎尖，用流动水冲洗2-4小时，随后用滤纸吸除表面附着的水，用75％的酒精进行表面消毒20-30秒，然后采用5％的次氯酸钠消毒20-25分钟，再用无菌水冲洗5-6次；B、启动培养：用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后对材料进行截取，接种到启动培养基中，置于22-28℃的接种室中，光照培养20-25天，得到试管苗，启动培养基为在38000毫克/升MS固体培养基中添加噻苯隆制备而成；C、增殖分化培养：将步骤B培养的试管苗剪切成0.3-0.5厘米的茎段、茎尖，接种至增殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30-40天，得到丛生增殖试管苗，增殖培养基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添加水解乳蛋白、噻苯隆、吲哚乙酸制备而成；D、生根培养：剪取2.5-3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养基中进行生根培养，培养周期为20-30天，得到生根苗，生根培养基为在19000毫克/升的MS培养基中添加琼脂、吲哚丁酸、萘乙酸后制备而成；E、移栽：选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养基，移栽至湿润的蛭石中，喷水至蛭石饱和，置于温度22-25℃、光照500-600LX条件下进行培养，培养周期为20-25天，得移栽苗，培养过程中1-9天控制湿度为≥90％，第10天后控制湿度为75％-85％；F、壮苗培养：将移栽苗放置于室温条件下，每周浇一次营养液，浓度为1/2MS营养液或0.2％尿素，进行壮苗培养为50-60天，移栽至苗圃即可。上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤A中所述腋芽或茎尖为当年生长的腋芽或茎尖。树龄和培养成功率成反比，既树龄越长培养成功率越小，树龄短的容易培养，成活率高，所以优选当年生长的新芽进行培养。上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤B中所述截取的长度为0.3-0.5厘米。所选的区域相对细菌较少，植物细胞生长活跃，易于培养和后期生长。上述白蜡树组织培养快速育的方法，步骤B中所述添加噻苯隆的浓度为2毫克/升。添加噻苯隆的目的是促进芽分化，经过多次试验证明，该浓度条件下芽分化数量多，丛生苗质量好、粗壮，为优选浓度。上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤C中所述添加水解乳蛋白的浓度为300-500毫克/升，噻苯隆的浓度为1.5毫克/升，吲哚乙酸0.5毫克/升。添加水解乳蛋白可以促进试管苗更健壮。上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤D中所述添加琼脂的浓度为5-6克/升、吲哚丁酸1-1.5毫克/升、萘乙酸0.5-1毫克/升。上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤E中所述湿润的蛭石的含水量≥90％。步骤D中所述健壮单芽指生长有2-4片叶，且叶片浓绿、平展的单芽。步骤E中所述完整根是指根长0.2-0.6厘米、单株生根数3条以上的根系。步骤D中选择剪取2.5-3厘米高的单芽增殖试管苗，是考虑到低于此范围值时不易于试管苗移栽，影响成活率，高于此范围之不利于培养阶段试管苗生长，容易出现苗子弯曲。经过多次试验得出，该范围较适宜生根培养。步骤E中所述移栽过程中控制湿度可选用覆盖的方法，覆盖时可选用专门用于植物移栽苗的透明塑料苗盘盖，利于移栽苗环境保湿和透光。试管苗从完全封闭和无菌的环境中取出来，移栽到基质中，是从自养到异养的关键过度过程，移栽后覆盖湿度在90％以上，当移栽苗生长出新叶片后，一般在7-10天，揭开覆盖，湿度控制在75％-85％即可。步骤C中所述增殖分化培养基在已经剪取增殖试管苗后可再重复使用1次，具体方法为向已使用过的增殖分化培养基中注入15-20毫升的液体培养液，以保证试管苗继续进行有效分化。该液体培养液成分以MS为基础,向其中添加10000毫克/升的蔗糖、1.5毫克/升的噻苯隆、0.5毫克/升的6-苄基氨基嘌呤、300-500毫克/升的水解乳蛋白，进行有效分化培养，培养周期30-40天，可得到增殖试管苗。本专利技术所述方法在人为的培养环境中进行，给予了植物所需充分的营养、光照、温度。不受自然环境干扰，周年可以进行繁殖，且繁殖速度快，苗木质量好，能够实现对白蜡树优良种质资源的保存及标准化繁殖。本专利技术以白蜡树腋芽或茎尖外植体为材料,建立白蜡树组织培养快速繁殖体系,，所培养的试管苗移栽成活率达90％以上，繁育周期短，加速了白蜡树繁育的进程，促进了生物技术的应用，有效解决我国盐碱地大面积绿化所需绿植苗源的问题。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术所述内容做进一步详细的说明。实施例用于繁育取材的白蜡树可以为野外生长健康的植株，例如生长于河北省沧州市海兴县重盐碱地中生长的白蜡树，以树龄8年的白蜡树为例，选取当年生长的新芽，去掉多余叶片和不合适的部分。A、材料消毒：取白蜡树腋芽或茎尖带有生长点的部分，长度可选取2-3cm，用洁净的流动水冲洗2-4小时，随后用滤纸吸除表面附着的水，用75％的酒精进行表面消毒20-30秒，然后采用5％的次氯酸钠消毒20-25分钟，再用无菌水冲洗5-6次；B、启动培养：用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后采用手术刀(12厘米长，可以更换刀片)切取进腋芽或茎尖，接种到启动培养基中，置于22-28℃的接种室中，光照培养20-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：A、材料消毒：取白蜡树腋芽或茎尖，用流动水冲洗2‑4小时，随后用滤纸吸除表面附着的水，用75％的酒精进行表面消毒20‑30秒，然后采用5％的次氯酸钠消毒20‑25分钟，再用无菌水冲洗5‑6次；B、启动培养：用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后对材料进行截取，接种到启动培养基中，置于22‑28℃的接种室中，光照培养20‑25天，得到试管苗，启动培养基为在38000毫克/升MS固体培养基中添加噻苯隆制备而成；C、增殖分化培养：将步骤B培养的试管苗剪切成0.3‑0.5厘米的茎段、茎尖，接种至增殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30‑40天，得到丛生增殖试管苗，增殖培养基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添加水解乳蛋白、噻苯隆、吲哚乙酸制备而成；D、生根培养：剪取2.5‑3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养基中进行生根培养，培养周期为20‑30天，得到生根苗，生根培养基为在19000毫克/升的MS培养基中添加琼脂、吲哚丁酸、萘乙酸后制备而成；E、移栽：选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养基，移栽至湿润的蛭石中，喷水至蛭石饱和，置于温度22‑25℃、光照500‑600LX条件下进行培养，培养周期为20‑25天，得移栽苗，培养过程中1‑9天控制湿度为≥90％，第10天后控制湿度为75％‑85％；F、壮苗培养：将移栽苗放置于室温条件下，每周浇一次营养液，浓度为1/2MS营养液或0.2％尿素，进行壮苗培养为50‑60天，移栽至苗圃即可。...

【技术特征摘要】
1.白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
A、材料消毒：取白蜡树腋芽或茎尖，用流动水冲洗2-4小时，随后用滤
纸吸除表面附着的水，用75％的酒精进行表面消毒20-30秒，然后采用5％的
次氯酸钠消毒20-25分钟，再用无菌水冲洗5-6次；
B、启动培养：用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后
对材料进行截取，接种到启动培养基中，置于22-28℃的接种室中，光照培
养20-25天，得到试管苗，启动培养基为在38000毫克/升MS固体培养基中
添加噻苯隆制备而成；
C、增殖分化培养：将步骤B培养的试管苗剪切成0.3-0.5厘米的茎段、
茎尖，接种至增殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30-40天，
得到丛生增殖试管苗，增殖培养基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添
加水解乳蛋白、噻苯隆、吲哚乙酸制备而成；
D、生根培养：剪取2.5-3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养
基中进行生根培养，培养周期为20-30天，得到生根苗，生根培养基为在
19000毫克/升的MS培养基中添加琼脂、吲哚丁酸、萘乙酸后制备而成；
E、移栽：选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养基，移
栽至湿润的蛭石中，喷水至蛭石饱和，置于温度22-25℃、光照500-600...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉珍，刘小京，张秀梅，封晓辉，谢志霞，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13