一种胶原膜的制备方法及胶原膜技术

本发明专利技术涉及生物领域，尤其涉及一种胶原膜的制备方法及胶原膜。所得胶原膜比较致密，且具有合适的降解性，能够有效保护真皮基质层和避免创面感染。克服了现有技术胶原膜比较稀松，不适合用于作为组织工程皮肤的真皮层的保护层的缺陷。本发明专利技术实施例提供的胶原膜的制备方法，包括：配置胶原蛋白溶液，所述胶原蛋白溶液的pH值为6-8；将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块；将所述胶块在交联剂作用下震荡交联并清洗；将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，得到胶原膜。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，尤其涉及一种胶原膜的制备方法及胶原膜。
技术介绍
皮肤是人体最大的器官，它具有屏障、感觉、调节体温、分泌与排泄、参与免疫反应、维持内外环境稳定等功能。随着经济、科技和社会的发展及人类平均寿命的延长，各种外伤特别是烧伤、老年性疾病等引起的皮肤缺损越来越多。自体皮肤移植作为这类皮肤缺损治疗的金标准，在临床应用中取得很大的成效。但是，自体皮肤移植需要把患者身上完好的皮肤通过手术切割下来，再覆盖到患者的皮肤缺损区，相应加大了对患者的打击，且在供皮区有可能形成疤痕及色素沉淀等，对患者造成二次伤害。为了克服自体皮肤移植的缺陷，出现了多种替代自体皮肤的组织工程皮肤。例如，一种为包含双层活细胞的组织工程皮肤，该组织工程皮肤由表皮活细胞和真皮活细胞构成，虽然非常接近人体皮肤，但是由于活细胞生长及保存条件苛刻，使得该组织工程皮肤保质期短，且生产和保存成本较高，极大的限制了各种皮肤疾病治疗的应用；另一种为只包含真皮层的组织工程皮肤，其中真皮层由成纤维细胞和支架构成，例如可以通过将成纤维细胞接种于支架上培养，成纤维细胞在支架内增殖而形成。该组织工程皮肤虽然成分接近人体真皮，但是在使用时非常容易导致创面感染，也极大的限制了各种皮肤疾病治疗的应用。所以，为组织工程皮肤的真皮层设置一层有效的保护层，对于组织工程皮肤的应用非常重要。胶原(Collagen)是细胞外最重要的水不溶性纤维蛋白，是构成细胞外基质的骨架。胶原在哺乳动物体内含量丰富，约占人体或其他动物蛋白的20％-30％。主要存在于软骨、皮肤及肌腱等组织中，在动物体内起支持、保护及连接等多种作用。由于胶原具有良好的生物相溶性、无毒、弱抗原性、可降解性及安全性等优点，因此可以作为天然生物材料。例如，根据其止血功能，可以制作成海绵状用于止血，或者用于敷裹伤口；根据其可降解性可以用作手术缝线；进一步的可作为支架材料用于组织工程医学领域，引导组织再生，促进伤口修复愈合。例如，公告号为CN 103071189 A的专利提供了一种组织引导再生用胶原膜的制备方法，该方法具体包括如下步骤：将胶原溶于酸性溶液中；将所得溶液的pH值调至5-9；继续将所得溶液快速剪切搅拌，获得胶原乳液；将所得胶原乳液离心，收集溶液上面的胶原膜；所得胶原膜经模具成型，冷冻干燥，采用物理或/和化学方法交联，即可。现有技术中公开的胶原膜直接通过离心成膜，所得胶原膜比较稀松，适合用于引导组织再生，但是并不适合用于作为组织工程皮肤的真皮层的保护层。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于，提供一种胶原膜的制备方法及胶原膜，所得胶原膜比较致密，且具有合适的降解性，能够有效保护真皮基质层和避免创面感染。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：第一方面，本专利技术实施例提供一种胶原膜的制备方法，包括：配置胶原蛋白溶液，所述胶原蛋白溶液的pH值为6-8；将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块；将所述胶块在交联剂作用下震荡交联并清洗；将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，得到胶原膜。优选的，所述配置胶原蛋白溶液，包括；将胶原蛋白和0.05％-0.5％的乙酸混合，静置溶解；在冰浴条件下，将溶解后的胶原蛋白溶液中加入酚红溶液，并调节pH值至6-8。优选的，所述将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块，包括：将所述胶原蛋白溶液移至凝胶模具中，在37℃下恒温凝胶30min-80min，得到胶块。优选的，将所述胶块在交联剂作用下震荡交联，包括：将所述胶块在EDC作用下，室温震荡交联14-40h。优选的，所述EDC的浓度为10mM-50mM。优选的，所述将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，包括：一次压膜：按照0.5kg/胶块-1.5kg/胶块的压力对所述胶块施压5min-15min，然后按照2kg/胶块-5kg/胶块的压力对所述胶块施压40min-70min；清洗：用纯化水对所述一次压膜后的胶块清洗至少一次；二次压膜：按照2kg/胶块-5kg/胶块的压力对所述清洗后的胶块再次施压20min-40min。优选的，所述将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，包括：一次压膜：按照0.5kg/胶块-1.5kg/胶块的压力对所述胶块施压5min-15min，然后按照2kg/胶块-5kg/胶块的压力对所述胶块施压40min-70min。优选的，所述胶原膜为牛源性胶原膜。第二方面，本专利技术实施例提供一种胶原膜，所述胶原膜由第一方面任一所述的胶原膜的制备方法制备而得。第三方面，本专利技术实施例提供一种重组人脱细胞真皮，包含如第二方面所述的胶原膜，以及与所述胶原膜粘合的真皮基质层，所述胶原膜用于保护所述真皮基质层，所述真皮基质层包含生物活性因子和失活的人源成纤维细胞。本专利技术实施例提供的一种胶原膜的制备方法，通过将胶原蛋白溶液先凝胶，得到胶块；再对胶块进行交联，增加其强度，然后对交联后的胶块进行压膜，所得胶原膜比较致密，且具有合适的降解性，能够有效保护真皮基质层和避免创面感染。克服了现有技术胶原膜比较稀松，不适合用于作为组织工程皮肤的真皮层的保护层的缺陷。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1为本专利技术实施例提供的一种胶原膜的制备方法的流程图；图2为本专利技术实施例中一种组织工程真皮的结构示意图；图3为本专利技术实施例中另一种组织工程真皮的结构示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胶原膜的制备方法，其特征在于，包括：配置胶原蛋白溶液，所述胶原蛋白溶液的pH值为6‑8；将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块；将所述胶块在交联剂作用下震荡交联并清洗；将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，得到胶原膜。

【技术特征摘要】
1.一种胶原膜的制备方法，其特征在于，包括：
配置胶原蛋白溶液，所述胶原蛋白溶液的pH值为6-8；
将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块；
将所述胶块在交联剂作用下震荡交联并清洗；
将所述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，得到胶原膜。
2.根据权利要求1所述胶原膜的制备方法，其特征在于，所述配置
胶原蛋白溶液，包括：
将胶原蛋白和0.05％-0.5％的乙酸混合，静置溶解；
在冰浴条件下，将溶解后的胶原蛋白溶液中加入酚红溶液，并调节
pH值至6-8。
3.根据权利要求1或2所述胶原膜的制备方法，其特征在于，所述
将所述胶原蛋白溶液凝胶，得到胶块，包括：
将所述胶原蛋白溶液移至凝胶模具中，在37℃下恒温凝胶
30min-80min，得到胶块。
4.根据权利要求1所述胶原膜的制备方法，其特征在于，将所述胶
块在交联剂作用下震荡交联，包括：
将所述胶块在EDC作用下，室温震荡交联14-40h。
5.根据权利要求4所述胶原膜的制备方法，其特征在于，所述EDC
的浓度为10mM-50mM。
6.根据权利要求1所述胶原膜的制备方法，其特征在于，所述将所
述震荡交联并清洗后的胶块进行压膜，包括：
一次压膜：...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨苹，杨维，荣辉，张爱兵，
申请(专利权)人：陕西艾尔肤组织工程有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61