一种生物敷料的制备方法及生物敷料技术

本发明专利技术涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种生物敷料的制备方法及生物敷料。该方法工艺简单，所获得的生物敷料含有活性因子，在应用于创面修复时，活性因子能够迁移至创面参与创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦。本发明专利技术实施例提供一种生物敷料的制备方法，包括：步骤1)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织工程
，尤其涉及一种生物敷料的制备方法及生物敷料。
技术介绍
近年来，随着组织工程皮肤的发展，越来越多的真皮替代物被研发出来，并被作为一种临时性敷料应用于临床上来覆盖皮肤缺损，加快创面修复。目前，在这些临时性敷料中，Integra是通过将牛I型胶原与6_硫酸软骨素交联，构成海绵状网格作为真皮层，在所述真皮层的一表面上外覆一层硅胶膜而获得的一种临时性敷料，其中，所述6-硫酸软骨素是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖，6-硫酸软骨素被广泛应用于动物组织的细胞外基质及细胞表面，用于改善炎症等，该临时性敷料利用外来营养物质交联用于覆盖创面，从而为创面修复提供外来营养物质，仅能够作为临时敷料来覆盖皮肤缺损，随着组织工程皮肤的不断发展，含有活细胞的真皮层作为一种生物敷料用于创面修复时，由于活细胞分泌的细胞外基质具有活性因子，能够参与创面修复，缩短愈合时间，因此，寻求一种具有活性因子的生物敷料成为目前的紧要任务。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于，提供一种生物敷料的制备方法及生物敷料。该方法工艺简单，所获得的生物敷料含有活性因子，在应用于创面修复时，活性因子能够迀移至创面参与创面修复，从而能够加快创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案:—方面，本专利技术实施例提供一种生物敷料的制备方法，包括:步骤I)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。优选的，所述将所获得的真皮层进行冷冻干燥包括:预冻结段:将真皮层在-30--40°C冻结1.5_3h，真皮层中的水分冻结为冰；升华阶段:在真空度为10_30Pa下，在Ih内升温至_10°C，保温8_10h ;在Ih内升温至0°C，保温8-10h，在Imin内升温至10°C，保温2_3h，将预冻结段形成的冰升华除去真皮层中大部分水分；再干燥阶段:在真空度为10-30Pa下，在Imin内升温至20°C，保温3_5h，除去真皮层中的结合水分。可选的，步骤I)之前还包括:制备覆盖有胶原的尼龙网膜；具体为:取尼龙网膜除菌，将除菌后的尼龙网膜沾上胶原溶液置于容器中，静置、凝固。优选的，所述容器为皮片发生器。可选的，将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上具体为:将人成纤维细胞与胶原溶液的混合液加入到覆盖有胶原的尼龙网膜上，其中，所述混合液中人成纤维细胞的浓度为1-10X 16个/ml。优选的，步骤I)中培养的具体方法为:在36-38°C、5%-10%的二氧化碳培养箱中培养8-12天，每天更换培养液一次。进一步地，所述细胞外基质至少包括:表皮生长因子EGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、转化生长因子-β ITGF- β 1、转化生长因子-β 2TGF-13 2、转化生长因子-β 3TGF-13 3、类胰岛素一号增长因子IGF-1、类胰岛素二号增长因子IGF-2。另一方面，本专利技术实施例提供一种生物敷料，包括:真皮层以及涂覆在所述真皮层上表面的硅胶膜；其中，所述真皮层含有经冷冻干燥失活的人成纤维细胞和细胞外基质。优选的，所述生物敷料为膜片状。可选的，所述细胞外基质至少包括:表皮生长因子EGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、转化生长因子-β ITGF-β 1、转化生长因子-β 2TGF-0 2、转化生长因子-β 3TGF- β 3、类胰岛素一号增长因子IGF-1、类胰岛素二号增长因子IGF-2。本专利技术实施例提供的一种有活性的生物敷料的制备方法及有活性的生物敷料。该方法工艺简单，通过将人成纤维细胞接种在覆盖有胶原的尼龙网膜进行三维培养，使得人成纤维细胞分泌人源性胶原、氨基多糖等多种生物活性因子，并通过冷冻干燥使得所述人成纤维细胞失活，获得含有活性因子的生物敷料，该含有活性因子的生物敷料在应用于创面修复时，活性因子能够迀移至创面及其创面周围，促进机体创周及创面的细胞增殖与血管新生，从而能够加快创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦，进一步地，由于冷冻干燥后的真皮层为多孔的海绵状，在冷冻干燥后的真皮层上涂覆硅胶溶液，操作更加方便，不易对真皮层造成损伤，且涂覆所形成的硅胶膜作为表皮层更加均匀平整，在用于创面修复时，能够保护真皮层以及创面免受外界异物以及病原体的入侵，为真皮层参与创面修复提供保障。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1为本专利技术实施例提供的一种生物敷料的制备方法；图2为本专利技术实施例提供的另一种生物敷料的制备方法；图3为本专利技术实施例提供的另一种生物敷料的制备方法；图4为本专利技术实施例提供的另一种生物敷料的制备方法。【具体实施方式】现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例所涉及的材料均可以通过商业途径或通过申请人获取。—方面，本专利技术实施例提供一种生物敷料的制备方法，包括:步骤I)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。其中，所述冷冻干燥是指将物料冷冻到冰点以下从而使水转变为冰，在真空下冰直接转变为蒸汽而除去的干燥方法，冷冻干燥适用于热敏物质，在真空和低温下进行操作，使得物料中酶的活性受到抑制，将物料中的生物活性因子的损伤降至最低限度，能够保持物料的稳定性与生物活性，并且冷冻干燥后的成品物理结构与分子结构变化极小，能够较好地保持原有的组织结构和外观形态，成品呈多孔状，具有优异的复溶性，能够迅速恢复物料的组织结构。本专利技术实施例提供的一种有活性的生物敷料的制备方法。该方法工艺简单，通过将人成纤维细胞接种在覆盖有胶原的尼龙网膜进行三维培养，使得人成纤维细胞分泌人源性胶原、氨基多糖等多种生物活性因子，并通过冷冻干燥使得所述人成纤维细胞失活，获得含有活性因子的生物敷料，该含有活性因子的生物敷料在应用于创面修复时，活性因子能够迀移至创面及其创面周围，促进机体创周及创面的细胞增殖与血管新生，从而能够加快创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦，进一步地，由于冷冻干燥后的真皮层为多孔的海绵状，在冷冻干燥后的真皮层上涂覆硅胶溶液，操作更加方便，不易对真皮层造成损伤，且涂覆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物敷料的制备方法，其特征在于，包括：步骤1)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨苹，何宁，张爱兵，
申请(专利权)人：陕西艾尔肤组织工程有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61