miR-1914*和miR-1915的用途制造技术

本发明专利技术涉及miR-1914*和/或miR-1915作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物的应用，以及其在制备具有抑制大肠癌转移、侵袭、凋亡、增值功能的药物中的应用。本发明专利技术中的miR-1914*和miR-1915是存在于血浆中，可以检测，并且它们在大肠癌耐药患者血浆中成下调趋势，其具有相对的组织特异性，既与大肠癌一线化疗耐药有关，同时还影响患者预后。miR-1914*和miR-1915单独使用或联合使用在大肠癌一线化疗耐药中起较为重要的作用，尤其是联合使用效果更好。

【技术实现步骤摘要】
miR-1914*和miR-1915的用途
本专利技术设计涉及一种microRNA的用途，属于生物

技术介绍
大肠癌（colorectalcancer,CRC）为结肠癌和直肠癌的总称，大肠癌是指大肠粘膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变，预后不良，死亡率较高。全世界范围内大肠癌的发病率男性处于恶性肿瘤的第三位。据国际癌症研究组织(IARc)提供的数据显示，亚洲地区，东亚死亡率为120.1/100,000。我国随着生活水平提高，饮食习惯改变，总体发病率也呈现上升趋势。上海地区近年来大肠癌发生率每年上升4.2%，由原来占恶性肿瘤的第7位上升至第3位。研究表明，肿瘤的发展程度是影响生存期的重要因素，随着肿瘤分期的不断进展，患者的5年生存率大幅的下降。然而，在我国仅有10%的患者初诊时处于T1期，大部分患者就诊时已经处于进展期，故其5年生存率徘徊在20%-50%之间。目前在我国临床大肠癌患者T3、T4晚期期患者较多，预后更差，因此尤其需要引起我国临床肿瘤医生的注意。大肠癌治疗主要为以手术+化疗为主的综合性治疗。而手术患者中约50%的患者在术后5年内出现复发或转移。术前新辅助化疗可降低大肠癌分期、改善术式选择、提高近期疗效;术后化疗可抑制大肠癌复发、治疗肿瘤转移。结直肠癌辅助化疗始于20世纪50年代，经历探索、争论近30年，直至1988年Buyse等发表了第一个结直肠癌辅助化疗有效的荟萃(meta)分析报告，大家对结直肠癌辅助化疗的有效性才达成共识。10多年来，众多学者致力于结直肠癌辅助化疗的新药开发和新方案设计，其中较为常用的一线化疗为XELOX,FOLFOX方案。可望降低分期，创造手术机会，提高术后生存率。化疗疗效取决于肿瘤对化疗药物的敏感程度,这由肿瘤自身的生物学特性决定。究其原因可能是由于肿瘤的多药耐药。随着近年来对结直肠癌多药耐药研究，给我们展示了结直肠癌治疗的新突破点，对于结直肠癌多药耐药逆转剂的开发应用，将使结直肠癌的治疗出现质的飞跃。肿瘤的发生发展与细胞的分子网络异常有密切的关系，细胞从癌变到肿瘤的快速生长、侵袭和转移是一个多因素作用、多基因参与，经过多阶段变化累积起来的、极其复杂的病变过程。通过研究基因的改变以寻找肿瘤的发病原因和诊断及其预后方法是研究肿瘤的重要途径，而最近几年，作为非编码的microRNA对癌症的研究已成为焦点。microRNAs在1993年首次被发现，长度18－25nt，具有较好的稳定性和易于检测的特点。microRNA在发育，细胞增殖、分化和凋亡等多种细胞径中都起了重要的调节作用。据推测microRNA可能调控至少30%的基因的表达况。microRNA在进化上高度保守，它们广泛存在于植物、线虫以及人类的细胞中它们能有效地抑制相关蛋白质的合成，导致靶mRNA的降解，或者以其他形式调节机制来抑制靶基因的表达，产生基因沉默。microRNA主要通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。microRNA组织特异性和时序性，决定组织和细胞的功能特异性。最近的研究发现，microRNA表达与多癌症相关，大约50%得到注解的microRNAs在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性点(fragilesite)，这说明microRNAs在肿瘤发生过程中起至关重要的作用，这些microRNAs所起的作用类似于抑癌基因和癌基因的功能。目前在许多肿瘤中已经发现了比较特异性的microRNAs。正因为这些microRNA和临床结果、癌症预后密切相关，它们有望成为肿瘤诊断、靶向治疗及预后预测的新的生物标记物。目前microRNA在肿瘤发生和发展过程中的生物学作用的研究已取得长足进步，但是还有许多问题有待于进一步解决，许多研究目前尚处于初步阶段。当前microRNAs已成为肿瘤研究中的又一个热点吸引了众多学者的关注。既往对microRNAs的研究主要集中于它们在细胞内的活动。2008年，Mitchell等通过分离健康人血浆中的18～24个核苷酸的RNA，并发现microRNAs能以一种非常稳定的形式存在于人体血浆中，以保护其免受内源性RNase的降解。当前种种研究表明microRNA，瘤细胞基因表达模式与正常组织有明显的不同,可以通过检测肿瘤病人循环RNA中的肿瘤特异的mRNA来进行肿瘤的诊断。
技术实现思路
本专利技术要解决的第一个技术问题是提供一种大肠癌化疗药物的耐药性标示物。本专利技术为解决第一个技术问题提出的一种技术方案是：miR-1914*和/或miR-1915作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物的应用。本专利技术要解决的第二个技术问题是提供一种具有抑制大肠癌转移、侵袭、凋亡、增值功能的药物。本专利技术为解决第二个技术问题提出的一种技术方案是：miR-1914*和/或miR-1915、含有miR-1914*的编码基因和/或miR-1915的编码基因的重组载体、含有miR-1914*的编码基因和/或miR-1915的编码基因的重组病毒或含有miR-1914*的编码基因和/或miR-1915的编码基因的重组病毒载体在制备具有抑制大肠癌转移、侵袭、凋亡、增值功能的药物中的应用。本专利技术要解决的第三个技术问题是提供一种新的大肠癌耐药蛋白。本专利技术为解决第二个技术问题提出的一种技术方案是：NFIX作为大肠癌耐药蛋白的应用。本专利技术具有积极的效果：（1）本专利技术使用基因芯片技术筛选出miR-1914*和miR-1915两个microRNA。经过多组大量的验证，表明miR-1914*和miR-1915是存在于血浆中，可以检测，并且它们在大肠癌耐药患者血浆中成下调趋势，从而可以作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物，可以制成试剂盒，用于区分耐药大肠癌与化疗敏感大肠癌。（2）本专利技术证实了miR-1914*和miR-1915能够影响耐药大肠癌细胞的耐药性，使其对化疗药物敏感。且miR-1914*和miR-1915共同作用于耐药大肠癌细胞要强于单个microRNA对耐药大肠癌细胞的影响。（3）本专利技术证实了miR-1914*和miR-1915在体内也能影响耐药大肠癌的耐药性，且对大肠癌细胞的转移，侵袭，凋亡，增值产生影响。从而miR-1914*和/或miR-1915，或者含有miR-1914*的编码基因和/或miR-1915的编码基因的重组载体、重组病毒、重组病毒载体可以制备具有抑制大肠癌转移、侵袭、凋亡、增值功能的药物。（4）本专利技术证实了miR-1914*和miR-1915具有相对的组织特异性，既与大肠癌一线化疗耐药有关，同时还影响患者预后。miR-1914*和miR-1915单独使用或联合使用在大肠癌一线化疗耐药中起较为重要的作用，尤其是联合使用效果更好。（5）本专利技术证实了miR-1914*和miR-1915的共同靶基因为NFIX，miR-1914*和miR-1915主要通过NFIX影响耐药大肠癌中的耐药蛋白，NFIX是新的大肠癌耐药蛋白。附图说明图1是实施例1中的某个样本取RNA水溶液行1%的琼脂糖凝胶电泳图；图2是实施例1中血浆miR-1914*在四期大肠癌一线化疗有效组、四期大肠癌一线化疗耐药组中表达的散点图；图3是实施例1中血浆miR-1915在四期大肠癌一线化疗有效组、四本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑1914*作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-1914*作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物的应用，不用于疾病的诊断与治疗。2.miR-1914*和miR-1915联合使用作为大肠癌化疗药物的耐药性标示物的应用，不用于疾病的诊断与治疗。3.miR-1914*、含有miR-1914*的编码基因的重组载体、含有miR-1914*的编码基因的重组病毒或含有miR-1914*的编码基因的重组病毒载体在制备具有抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡劲松，蔡三军，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：上海;31