转氨酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种转氨酶及其应用。该转氨酶具有SEQ ID NO.：2或4所示的氨基酸序列；或与SEQ ID NO.：2或4所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且具有高度立体选择性-R构型催化活性的ω-转氨酶活性的氨基酸序列，其中，高度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1.1倍。本发明专利技术的转氨酶能够高效地合成手性纯度较高的R构型手性胺，适合手性胺合成的工业化应用。

【技术实现步骤摘要】
转氨酶及其应用
本专利技术涉及手性化合物的合成领域，具体而言，一种转氨酶及其应用。
技术介绍
手性胺广泛存在于自然界中，是很多重要生物活性分子的结构单元，是合成天然 产物和手性药物的重要中间体，很多手性胺还可成为重要的手性助剂和手性拆分试剂。所 以，手性胺化合物的制备有很重要的经济意义。 现阶段，手性胺的制备主要采用化学还原的方法，利用前手性酮制备得到光学活 性的胺。在Pd/c及喹宁的催化作用下，前手性酮与甲酸以及无机氨/有机伯胺进行反应 生成手性胺；另有研究者以钌配合物为催化剂，通过前手性酮不对称胺化还原得到手性 胺(RenatKadyrovetal.HighlyEnantioselectiveHydrogen-TransferReductive Amination:CatalyticAsymmetricSynthesisofPrimaryAmines.AngewandteChemie InternationalEdition. 2003,42(44)，第 5472-5474 页），此类反应中金属催化剂是非 常关键的因素，且对金属催化剂要求苛刻，反应需要在高压条件下完成，操作设备要求高， 同时金属催化剂价格昂贵，对环境污染也较大（OhkumaTetal.Trans-RuH(etal_BH4) (binap)(1,2-diamine):acatalystforasymmetrichydrogenationofsimpleketones underbase-freeconditions.JournaloftheAmericanChemicalSociety.2002, 124(23)，第 6508-6509 页）。 氨基转移酶，也称为转氨酶，可以催化一个氨基与羰基互换的过程。转氨酶属 于转氨酶之一，但有少许不同。转氨酶是指一类酶，只要在其催化的转氨反应中，反应的 底物或产物中不含有a-氨基酸，就可以称该酶为转氨酶。《-转氨酶可以利用酮类化 合物为原料，通过立体选择性地转氨基作用，高效生产手性胺。因其底物相对廉价、产物纯 度高的特点，受到研究人员越来越多的关注。人们希望能充分发掘其潜力，将其推广用于手 性胺的工业生产，但目前对该酶的研究及应用仍然比较少。 本领域仍然存在对具有高度立体选择性-R构型催化活性的w_转氨酶的需求，以 满足制备手性胺化合物的需求。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种新的转氨酶及其应用，以适应手性胺的工业化生产需求。 为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种转氨酶或其修饰物、功能 等同物、功能片段或变体，该转氨酶的氨基酸序列包含选自如下序列的序列：a)如SEQID NO. :2或4所示的氨基酸序列；b)与SEQIDNO. :2或4所示的氨基酸序列具有至少80% 同一性且具有高度立体选择性-R构型催化活性的转氨酶活性的氨基酸序列，其中该 氨基酸序列不是如SEQIDN0. :5或6所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列；c)在SEQ IDN0. :2或4中所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而由SEQID NO. :2衍生而来且具有高度立体选择性-R构型催化活性的转氨酶活性的蛋白质，其中 该氨基酸序列不是如SEQIDNO. :5或6所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列；其中，高 度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1. 1倍。 进一步地，转氨酶的氨基酸序列是将SEQIDN0. :2所示的氨基酸序列的第38位 上的亮氨酸替换为异亮氨酸的氨基酸序列。 根据本专利技术的另一个方面，提供了一种核苷酸，该核苷酸编码上述的转氨酶或其 修饰物、功能等同物、功能片段或变体。 进一步地，上述核苷酸的序列包含选自如下序列的序列：a)如SEQIDN0. :1或3 所示的核苷酸序列；b)与SEQIDN0. :1或3所示的核苷酸序列具有至少80%同一性且编 码具有高度立体选择性-R构型催化活性的转氨酶的核苷酸序列，其中该核苷酸序列不 是如SEQIDN0. :5或6所示的核苷酸序列；c)在高严谨条件下与SEQIDN0. :1或3所示 的核苷酸序列杂交且编码具有高度立体选择性-R构型催化活性的《 _转氨酶的核苷酸序 列，其中该核苷酸序列不是如SEQIDN0. :5或6所示的核苷酸序列；其中，高度立体选择性 是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1. 1倍。 根据本专利技术的再一个方面，提供了一种重组载体，该重组载体中有效连接有上述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转氨酶或其修饰物、功能等同物、功能片段或变体，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列包含选自如下序列之一的序列：a)如SEQ ID NO.：2或4所示的氨基酸序列；b)与SEQ ID NO.：2或4所示的氨基酸序列具有至少80％同一性且具有高度立体选择性‑R构型催化活性的ω‑转氨酶活性的氨基酸序列，其中该氨基酸序列不是如SEQ ID NO.：5或6所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列；c)在SEQ ID NO.：2或4中所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而由SEQ ID NO.：2或4中衍生而来且具有高度立体选择性‑R构型催化活性的ω‑转氨酶活性的蛋白质，其中该氨基酸序列不是如SEQ ID NO.：5或6所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列；其中，高度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1.1倍。

【技术特征摘要】
2013.11.26 CN 201310611503.81. 一种转氨酶或其修饰物、功能等同物、功能片段或变体，其特征在于，所述转氨酶的 氨基酸序列包含选自如下序列之一的序列： a) 如SEQ ID NO. :2或4所示的氨基酸序列； b) 与SEQ ID NO. :2或4所示的氨基酸序列具有至少80%同一性且具有高度立体选 择性-R构型催化活性的《 -转氨酶活性的氨基酸序列，其中该氨基酸序列不是如SEQ ID NO. :5或6所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列； c) 在SEQ ID NO. :2或4中所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基 酸而由SEQ ID NO. :2或4中衍生而来且具有高度立体选择性-R构型催化活性的转氨 酶活性的蛋白质，其中该氨基酸序列不是如SEQ ID NO. :5或6所示的核苷酸序列所编码的 氨基酸序列； 其中，高度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约I. 1倍。2. 根据权利要求1所述的转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列是将SEQ ID NO. :2所示的氨基酸序列的第38位上的亮氨酸替换为异亮氨酸的氨基酸序列。3. -种核苷酸，其特征在于，所述核苷酸编码权利要求1或2所述的转氨酶或其修饰 物、功能等同物、功能片段或变体。4. 根据权利要求3所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列包含选自如下序列 之一的序列： a) 如SEQ ID NO. :1或3所示的核苷酸序列； b) 与SEQ ID NO. :1或3所示的核苷酸序列具有至少80%同一性且编码具有高度立 体选择性-R构型催化活性的转氨酶的核苷酸序列，其中该核苷酸序列不是如SEQ ID NO. :5或6所示的核苷酸序列； c) 在高严谨条件下与SEQ ID NO. :1或3所示的核苷酸序列杂交且编码具有高度立 体选择性-R构型催化活性的转氨酶的核苷酸序列，其中该核苷酸序列不是如SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪浩，高峰，李艳君，张艳，李少贺，
申请(专利权)人：凯莱英医药集团天津股份有限公司，凯莱英生命科学技术天津有限公司，天津凯莱英制药有限公司，凯莱英医药化学阜新技术有限公司，吉林凯莱英医药化学有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12