用于癌症诊断的针对密蛋白18.2的抗体制造技术

本发明专利技术涉及针对位于CLDN18.2的C端部分中之表位的抗体，其可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18.2。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及针对位于CLDN18.2的C端部分中之表位的抗体，其可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18.2。 DSM ACC3143 2011.10.06 DSM ACC3144 2011.10.06【专利说明】用于癌症诊断的针对密蛋白18. 2的抗体 密蛋白（Claudin)是位于上皮与内皮的紧密连接内的整合膜蛋白（integral membrane protein)。预测密蛋白具有四个跨膜区段，有两个胞外环，并且N端和C端均位 于细胞质中。跨膜蛋白质密蛋白（CLDN)家族在上皮与内皮紧密连接的维持中发挥关键作 用，并且还可能在细胞骨架的维持中以及在细胞信号转导中发挥作用。 密蛋白18(CLDN18)分子是整合跨膜蛋白（四次跨膜蛋白，tetraspanin)，其具 有四个跨膜疏水区和两个胞外环（环1由疏水区1和疏水区2环绕而成；环2由疏水区 3和疏水区4环绕而成）。CLDN18以两种不同剪接变体存在，这两种变体描述于小鼠和 人中（Niimi，Mol. Cell. Biol. 21:7380-90,2001)。所述剪接变体（Genbank 登记号：剪 接变体 1(CLDN18. I) :NP_057453, NM_016369,和剪接变体 2(CLDN18. 2) :NM_001002026， NP_001002026)的分子量为约27. 9/27. 72kD。剪接变体CLDN18. 1和CLDN18. 2在包含第一 个跨膜（TM)区和环1的N端部分中存在差异，而C端的蛋白质一级序列相同。参见图1。 CLDN18. 1在正常肺的细胞中选择性表达，而CLDN18. 2仅在胃细胞上表达。但是， CLDN18. 2在正常胃中的表达局限于已分化的胃上皮短寿细胞中。已确认，CLDN18. 2在多种 肿瘤组织中表达。例如，已发现，CLDN18. 2在胰腺癌、食管癌、胃癌、支气管癌、乳腺癌以及 ENT肿瘤中表达。CLDN18. 2是有预防和/或治疗原发肿瘤之价值的靶标，所述原发肿瘤例 如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌（例如非小细胞肺癌（NSCLC))、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌 和胆囊癌及其转移癌，特别是胃癌转移例如Krukenberg肿瘤、腹膜转移和淋巴结转移。 CLDN18. 2在癌细胞和正常细胞之间的差异表达、其膜定位、其在大多数毒性相关 正常组织中不存在、其在胃中的表达局限在可通过胃的靶阴性干细胞来补充的非必要的细 胞群体-已分化的胃细胞，使得CLDN18. 2成为癌症免疫治疗的有吸引力的靶标，并且在癌 症治疗中使用靶向CLDN18. 2的基于抗体的治疗剂（therapeutics)使高水平的治疗特异性 成为可能。 CLDN18. 2靶向抗体的临床应用面临人CLDN18. 2与人CLDN18. 1高度同源这一问 题。可以成功地构建靶向CLDN18. 2之示出人CLDN18. 2与人CLDN18. 1之间的序列差异的 N端胞外结构域的CLDN18. 2特异性抗体。为产生靶向CLDN18. 2之N端部分并且具有使其 能够在临床上用于诊断目的（例如，用于检测癌组织切片的细胞中CLDN18. 2的表达）之特 性的抗体而作出的尝试以失败告终。 本专利技术人出乎意料地发现，针对位于CLDN18. 2的C端部分内的特定表位的抗体满 足了用于抗体诊断应用之标准，特别是用于检测和鉴定表达CLDN18. 2的细胞。最出乎意料 地，这些抗体虽然针对CLDN18. 1与CLDN18. 2之间相同的序列，但并不靶向非癌肺细胞。 本专利技术的抗体可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18. 2。优 选地，癌疾病或癌细胞以CLDN18. 2在表面表达为特征。表达CLDN18. 2的癌细胞是靶向 CLDN18. 2之治疗的合适的靶标，例如，使用针对CLDN18. 2之抗体的治疗。在一个实施方案 中，癌细胞表达或异常表达CLDN18. 2,而相应的正常细胞不表达CLDN18. 2或以较低水平表 达CLDN18. 2。表达CLDN18. 2的细胞优选地选自致瘤性胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、 肺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。
技术实现思路
本专利技术涉及抗体或其抗原结合片段，其 (i)与具有氨基酸序列 TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO :5)或 EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO :6)的肽相结合，和/或 Qi)与密蛋白18. 2 (CLDN18. 2)相结合，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至 少与 CLDN18. 2 中具有氨基酸序列 TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO :5)或 EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO :6)的表位相结合从而与CLDN18. 2相结合。 在一个实施方案中，所述CLDN18. 2是细胞表面膜结合CLDN18. 2。在一个实施方 案中，所述CLDN18. 2存在于癌细胞上，其中所述癌细胞优选为表达CLDN18. 2的癌细胞。在 一个实施方案中，所述癌细胞选自胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细 胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。在一个实施方案中，本专利技术的抗体或 抗原结合片段不与除胃上皮细胞以外的非癌细胞相结合。在一个实施方案中，本专利技术的抗 体或抗原结合片段不与非癌肺细胞相结合。在一个实施方案中，本专利技术的抗体是嵌合抗体、 人抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，本专利技术的抗体是单克隆抗体。 在这些和另一些方面，本专利技术涉及一种抗体，其包含： (I)抗体重链，所述抗体重链包含： (i)根据SEQ ID NO :7的抗体重链序列或其变体， (ii)根据SEQ ID NO :7的抗体重链序列之⑶R序列中的至少一个、优选两个、更 优选全部三个，或其变体，或者 (iii)根据SEQ ID NO : 10的⑶R3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ ID NO :8的CDRl序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO :9的CDR2序列或其变体， 和 / 或 (II)抗体轻链，所述抗体轻链包含： ⑴根据SEQ ID NO : 11的抗体轻链序列或其变体， (ii)根据SEQ ID NO :11的抗体轻链序列之⑶R序列中的至少一个、优选两个、更 优选全部三个，或其变体，或者 (iii)根据SEQ ID NO : 14的⑶R3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ ID NO : 12的⑶Rl序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO : 13的⑶R2序列或其变体。 在上述和另一些方面，本专利技术还涉及一种抗体，其包含： (I)抗体重链，所述抗体重链包含： (i)根据SEQ ID NO : 15的抗体重链序列或其变体， (ii)根据SEQ ID NO :15的抗体重链序列之⑶R序列中的至少一个、优选两个、更 优选全部三个，或其变体，或者 (iii)根据SEQ ID NO : 18的⑶R3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ ID NO : 16的⑶Rl序列或其变体，和/或根据SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗体或其抗原结合片段，其(i)与具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：6)的肽相结合，和/或(ii)与密蛋白18.2(CLDN18.2)相结合，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN18.2中具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：6)的表位相结合从而与CLDN18.2相结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔·沙欣，厄兹莱姆·图雷奇，里塔·米特纳赫特克劳斯，斯特凡·韦尔，
申请(专利权)人：加尼梅德药物公司，约翰·古腾堡大学美因兹医学大学转化肿瘤学公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE