本发明专利技术公开了癌症的诊断方法，其特征在于：检测ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ（ＥＲＥＧ）蛋白质。发现ＥＲＥＧ在大肠癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或肾癌中以非常高的频率、在基因水平和蛋白质水平表达亢进。在本发明专利技术的癌症的诊断或治疗中，使用识别ＥＲＥＧ蛋白质的抗体。还公开了含有与ＥＲＥＧ结合的抗体作为有效成分的药物组合物、细胞增殖抑制剂和抗癌药。进一步公开了通过使ＥＲＥＧ表达细胞和与ＥＲＥＧ结合的抗体接触，在ＥＲＥＧ表达细胞中引发细胞毒的方法和抑制ＥＲＥＧ表达细胞的增殖的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用抗EREG抗体的癌症的诊断和治疗
本专利技术涉及癌症的诊断和治疗方法、以及细胞增殖抑制剂和抗癌药。
技术介绍
丰田等人纯化的上皮细胞成长因子(epiderrnalgrowthfactor，以下记作EGF)家族的成员被命名为epiregulin(EREG)。已知EREG发挥诱导Hela细胞的形态变化的癌增殖抑制因子的作用(非专利文献1)。由丰田等人纯化的来自小鼠的EREG(成熟蛋白质)的氨基酸序列包含46个氨基酸残基，与EGF家族的其它成员显示出24％～50％左右的序列同源性。另外，小鼠EREG对人上皮癌细胞株A431细胞上的EGF受体显示出低亲和性。在丰田等人进行的人EREG基因的克隆和表达分析中显示：其它EGF家族成员在人组织中普遍表达，相对于此，在巨噬细胞、胎盘、各种癌细胞中可检测到EREG的表达(非专利文献2)。另外，有人公开了可溶型EREG对几种癌细胞具有增殖抑制效果(WO94/29340)。高桥等人揭示了：Erk(MPK3)和p38(MAPK14)在大鼠的分化型动脉血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell，以下记作VSMC)中的活化诱导细胞的去分化。并且证实VSMC分泌的EREG发挥自分泌和/或旁分泌分化因子的作用。另外，有可能发挥VSMC的分化因子作用的不饱和溶血磷脂酸和PDGFB同型二聚体，以Erk-和p38Mapk-依赖型的方式迅速增量调节EREG的mRNA表达。逆转录酶-多聚酶链式反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction；以下记作RT-PCR)分析和免疫组织化学(immunohistochemical，immunohistochemistry；以下记作IHC)分析明确了：EREG在动脉粥样硬化血管或气囊损伤大鼠动脉中的局限性表达。根据上述结果，高桥等人推测：EREG参与了动脉粥样硬化等血管重建进程(非专利文献3)。Minn等人基于体内选择、转录组分析、功能分析和临床研究，鉴定了几个与乳癌的肺转移相关的基因簇，明确了其中的一个分子为EREG(非专利文献4)。白泽等人进一步明确：EREG不仅在角质形成细胞中表达，还在组织巨噬细胞中表达；以及EREG缺失小鼠出现慢性皮炎的症状。通过本小鼠的分析中的诸多研究显示：在与外部环境的边界(boundary)，EREG在角质形成细胞和巨噬细胞引起的免疫和炎症相关应答中发挥重要作用(非专利文献5)。如上所述，明确了皮炎、癌转移、动脉粥样硬化与EREG的相关性。但迄今为止，关于与EREG结合且具有中和活性和细胞毒活性的抗体对表达EREG的癌细胞的影响，则没有具体的记载。非专利文献1：J.Biol.Chem.270：7495-7500，1995非专利文献2：Biochem.J.326：69-75，1997非专利文献3：Circulation108：2524-2529，2003非专利文献4：Nature436：518-524，2005非专利文献5：Proc.Nat.Acad.Sci.101：13921-13926，2004
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题在于提供抗EREG抗体及其用途。更详细而言，其目的在于提供使用抗EREG抗体诊断和治疗癌症的新型方法、含有抗EREG抗体的新型细胞增殖抑制剂和抗癌药、以及新型抗EREG抗体。解决课题的方法本专利技术人等发现：EREG在大肠癌等癌细胞中高度表达。并且，在测定抗EREG抗体的补体依赖性细胞毒(complement-dependentcytotoxicity；CDC)活性以及抗体依赖性细胞毒(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity；ADCC)活性时，发现抗EREG抗体对EREG表达细胞具有CDC活性和ADCC活性。另外明确了：抗EREG抗体对癌细胞株具有中和作用所产生的增殖抑制效果。根据上述认识，本专利技术人等进一步发现：抗EREG抗体对原发性或转移性的各种癌症的诊断、预防和治疗有效，从而完成了本专利技术。更具体而言，本专利技术人等发现：EREG可用作用于治疗或诊断包括大肠癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、肾癌在内的EREG表达亢进的癌症的手段，从而完成了本专利技术。本专利技术提供含有与EREG蛋白质结合的抗体作为有效成分的药物组合物。本专利技术还提供含有与EREG蛋白质结合的抗体作为有效成分的细胞增殖抑制剂。本专利技术又提供含有与EREG蛋白质结合的抗体作为有效成分的抗癌药。优选与EREG蛋白质结合的抗体为具有细胞毒活性的抗体。进一步优选该抗体为进一步具有中和活性的抗体。在本专利技术的优选方式中，可作为治疗对象的癌症为大肠癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、肾癌。基于本专利技术的含有抗EREG抗体的抗癌药对上述EREG表达亢进的癌症、即原发性或转移性的癌症的治疗有用。本专利技术中特别优选的治疗对象为原发性大肠癌、转移性大肠癌、胰腺癌。本专利技术还提供含有与EREG蛋白质结合的抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。本专利技术的药物组合物对EREG表达亢进的癌症的治疗和/或预防有用。即，本专利技术涉及与EREG蛋白质结合的抗体在制造用于癌症的治疗和/或预防的药物组合物中的应用。在另一方式中，本专利技术提供通过使EREG表达细胞和与EREG蛋白质结合的抗体接触而在表达EREG蛋白质的细胞中引发细胞毒的方法。本专利技术还提供通过使表达EREG蛋白质的细胞和与EREG蛋白质结合的抗体接触来抑制表达EREG蛋白质的细胞增殖的方法。优选与EREG蛋白质结合的抗体为具有细胞毒活性的抗体。还优选表达EREG蛋白质的细胞为癌细胞。在又一方式中，本专利技术提供与EREG蛋白质结合、且对表达EREG蛋白质的细胞具有细胞毒活性的抗体。优选该细胞毒活性为ADCC活性。优选该细胞毒活性为CDC活性。本专利技术还提供结合有细胞毒性物质的抗体。本专利技术中，作为抗体所结合的细胞毒性物质，可以例示化疗药物、放射性同位素和毒性肽。本专利技术中的抗体优选为抗体本身具有细胞毒活性的抗体。本专利技术进一步提供与EREG蛋白质结合、且对表达EREG蛋白质的细胞具有细胞毒活性、并具有中和活性的抗体。在另一方式中，本专利技术提供EREG蛋白质作为癌症诊断标志物的应用。另外，在又一方式中，本专利技术提供癌症的诊断方法，其特征在于：使用与EREG蛋白质结合的抗体检测EREG蛋白质。在本专利技术的方法中，优选检测EREG蛋白质的胞外区。还优选本专利技术的方法使用识别EREG蛋白质的抗体来进行。在本专利技术的方法中，优选检测血液中、血清中或血浆中的EREG蛋白质、或从细胞中分离的EREG蛋白质。在另一方式中，本专利技术提供癌症的诊断方法，该方法包括以下步骤：(a)从受试者体内采取试样的步骤；(b)使用与EREG蛋白质结合的抗体，检测采集的试样中所含的EREG蛋白质的步骤。本专利技术中，上述试样只要可以从受试者体内采集即可，可以使用任何试样。在一方式中，使用从受试者体内采集的血液试样。本专利技术中优选的血液试样为血清。在另一方式中，还使用通过外科或活组织检查(biopsy)从受试者体内采集的试样。该诊断方法所涉及的癌症只要是作为对象的癌细胞表达EREG蛋白质的癌症即可，可以是任何癌症。本专利技术中优选的癌症为：大肠癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和肾癌。基于本专利技术，上述本文档来自技高网...
【技术保护点】
药物组合物，该药物组合物含有与ＥＲＥＧ蛋白质结合的抗体作为有效成分。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2006-10-12 278819/20061.与EREG蛋白质结合的抗体在制备用于治疗选自大肠癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和肾癌的癌症的药物中的应用，其中，所述抗体为具有ADCC活性和/或CDC活性的抗体，且上述与EREG蛋白质结合的抗体识别SEQIDNO:21的氨基酸序列中第63位的Val～第108位的Leu，其中所述抗体为具有中和活性的抗体，其中所述与EREG蛋白质结合的抗体为以下(1)～(8)中任一项所述的抗体：(1)抗体，该抗体含有H链和L链，所述H链具有作为CDR1的SEQIDNO:2的氨基酸序列、作为CDR2的SEQIDNO:4的氨基酸序列、以及作为CDR3的SEQIDNO:6的氨基酸序列，所述L链具有作为CDR1的SEQIDNO:12的氨基酸序列、作为CDR2的SEQIDNO:14的氨基酸序列、以及作为CDR3的SEQIDNO:16的氨基酸序列；(2)(1)的抗体，其中，H链具有作为CH的SEQIDNO:10的氨基酸序列的117～446位的氨基酸序列；(3)(1)的抗体，其中，L链具有作为CL的S...
【专利技术属性】
技术研发人员：油谷浩幸，伊藤浩孝，吉田贤二，
申请(专利权)人：株式会社未来创药研究所，国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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