本发明专利技术公开了一种(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮作为自噬诱导剂的应用。本发明专利技术实验中主要利用相关实验证明了(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在诱导A549细胞或血管内皮细胞自噬中的应用。本发明专利技术通过倒置相差显微镜观察细胞形态学变化实验、荧光显微镜观察细胞内酸性小泡聚集实验、蛋白质免疫杂交印迹实验充分证明了(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在诱导A549细胞和血管内皮细胞中的作用。
【技术实现步骤摘要】
姜黄素衍生物DIMMO在制备自噬诱导剂中的应用一、
：本专利技术涉及一种姜黄素衍生物的应用，特别是涉及一种姜黄素衍生物DIMMO在制备自噬诱导剂中的应用。姜黄素衍生物DIMMO即(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮((3E,5E)-3-(3,4-dimethoxybenzylidene)-5-[(1H-indol-3-yl)methylene]-1-methylpiperidin-4-one，简称DIMMO)。二、
技术介绍
：(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮简称DIMMO，其结构式为：(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮的分子式为C24H24N2O3，分子量(M)为388.46。姜黄是一种传统中药材，是从姜科、天南星科类的植物根茎中提取的一种二酮类化学成分。姜黄素则是从姜黄中提取的一类酚类色素，是姜黄的主要成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和降血脂等作用。有报道称姜黄素能够有效抑制人子宫内膜癌细胞(HEC1B)的增殖，并且可以引起细胞凋亡。其诱导凋亡的机制是将细胞周期阻滞在G2/M期。但姜黄素本身水溶性差，生物利用率较低，限制其广泛应用。自噬(autophagy)是存在于真核细胞内的一种普遍生理现象，由Ashford和Porter在1962年发现并提出，自发现以来受到越来越多科研工作者的关注。自噬分为三类：巨自噬(Macroautophagy)、微自噬(Microautophagy)及分子伴侣介导的自噬(Chaperone-mediatedautophagy,CAM)，这里主要讨论巨自噬(以下简称“自噬”)。在自噬研究中，寻找能够有效诱导细胞自噬的化学小分子至关重要。根据检索，关于姜黄素及姜黄素衍生物的研究以抗肿瘤居多。例如：1、申请号为201010183509.6、名称为“苯丁酰基姜黄素衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用”的专利技术专利，该专利公开了姜黄素衍生物在抑制肝癌中的作用。2、申请号为201110201683.3、名称为“姜黄素在制备甲状腺癌治疗剂中的应用”的专利技术专利，该专利公开了姜黄素可以杀伤甲状腺癌细胞并且对正常甲状腺细胞影响较小。3、申请号为201110435234.5，名称为“姜黄素衍生物C2在抗结肠癌药物中的应用”的专利技术专利，该专利公开了一种姜黄素衍生物比母本姜黄素本身稳定，亲脂性更强；同时，姜黄素衍生物C2与母本姜黄素相比对结肠癌细胞具有更强的杀伤毒性，对正常结肠细胞的杀伤作用较小，这为姜黄素衍生物被开发成新的抗结肠癌药物提供了理论基础。目前，仅有研究表明姜黄素能够诱导自噬，对于姜黄素衍生物诱导细胞自噬的报道甚少。三、
技术实现思路
：本专利技术要解决的技术问题是：提供一种(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用。本专利技术提供的一种自噬诱导剂，在癌细胞和正常细胞中均有明显效果。为了解决上述问题，本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供一种(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用。根据上述的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用，所述(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在诱导A549细胞或血管内皮细胞自噬中的应用。根据上述的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用，所述(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在诱导A549细胞或血管内皮细胞自噬中应用的有效浓度为10μM～40μM。本专利技术利用的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮(DIMMO)已有论文公开其制备方法。该论文的详细信息：期刊名为JOURNALOFCHEMICALRESEARCH，发表年份为2012年2月(February2012)，题目为“Synthesisandbiologicalevaluationofcurcuminanalogueshavingapiperidonecoreaspotentialantioxidantagents”；作者为JianWang,GangchunSun*,ZhichengLi*,WenpengMaiandJingxiXie(*代表通讯作者)；卷期为Volume36,Number2；页码为pp.63-65(3)。实验证明：下面结合(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮的药理实验及结果，证明(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮诱导细胞自噬的效果，即在制备自噬诱导剂中的应用。血管内皮细胞及A549细胞的制备：以常规方法培养血管内皮细胞及A549细胞，选取生长状态良好的、且处于对数生长期的血管内皮细胞及A549细胞备用。结合细胞生物学和分子生物学的方法，进行如下实验，以观察(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮诱导细胞自噬的效果。实验1、倒置相差显微镜观察细胞形态：实验方法：1)细胞接种：将细胞按一定密度传到24孔板中；2)加药：种板24h后，吸去旧培养液，每次采用1mL、1×PBS洗2遍；3)24孔板中每孔分别加入1mL浓度为1μM、5μM、10μM、20μM、40μM的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮药物溶液；4)加药处理后置于倒置相差显微镜下观察细胞形态，并拍照。按下列实验分组处理血管内皮细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态。溶剂对照组：40μM的二甲基亚砜(DMSO)孵育细胞0.5、1、3、6小时，细胞形态正常。(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮处理组：分别用1μM、5μM、10μM、20μM、40μM的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮孵育细胞0.5、1、3、6、24小时，细胞出现时间和浓度依赖性的空泡化。按下列实验分组处理A549细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态。溶剂对照组：40μM的二甲基亚砜(DMSO)孵育细胞3、6、12或24小时，细胞形态正常。(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮处理组：分别用1μM、5μM、10μM、20μM、40μM的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮孵育A549细胞3、6、12或24小时，与对照组相比，细胞趋圆变亮。实本文档来自技高网...
【技术保护点】
(3E，5E)‑1‑甲基‑3‑(3，4‑二甲氧基苯亚甲基)‑5‑(3‑吲哚亚甲基)‑哌啶‑4‑酮作为自噬诱导剂的应用。
【技术特征摘要】
1.(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用。2.根据权利要求1所述的(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4-酮在制备自噬诱导剂中的应用，其特征在于：所述(3E，5E)-1-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-5-(3-吲哚亚甲基)-哌啶-4...
【专利技术属性】
技术研发人员：张璐，孙纲春，苗一鸣，余京婷，王凤羽，王剑，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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