本发明专利技术公开了一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法，该方法以高速逆流色谱装置作为分离纯化设备，包括配制构成固定相、流动相的溶剂系统，并以上相为固定相，下相为流动相，将配制好的固定相用气压方式压入并充满主机工作鼓，使其主机转动，然后以预定的流量泵入溶解的叉子圆柏的乙醇提取浸膏和流动相，根据检测谱图，在流动相中分别收集分离得到的鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素组分。本发明专利技术提供的液—液分配色谱分离制备方法，完全克服了样品在固体填料上的不可逆吸附、沾污和变性等缺点，操作简便易行，有机溶剂消耗量少，分离效率高，所得产物纯度高达98％以上。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，该方法以高速逆流色谱装置作为分离纯化设备，包括配制构成固定相、流动相的溶剂系统，并以上相为固定相，下相为流动相，将配制好的固定相用气压方式压入并充满主机工作鼓，使其主机转动，然后以预定的流量泵入溶解的叉子圆柏的乙醇提取浸膏和流动相，根据检测谱图，在流动相中分别收集分离得到的鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素组分。本专利技术提供的液—液分配色谱分离制备方法，完全克服了样品在固体填料上的不可逆吸附、沾污和变性等缺点，操作简便易行，有机溶剂消耗量少，分离效率高，所得产物纯度高达98％以上。【专利说明】
本专利技术涉及从天然植物中制备活性成分的方法，具体涉及从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的方法。
技术介绍
叉子圆柏，又名沙地柏、爬柏、臭柏、双子柏、新疆圆柏。系柏科圆柏属植物，匍匐灌木，主要分布于欧洲南部至中亚和我国西北部等干旱贫瘠环境中，耐旱性强，可作为水土保持及固沙造林的优良树种。叉子圆柏因具有杀虫、杀菌、抗肿瘤、抗病毒等药用价值而被广泛关注。叉子圆柏中的有效组分可分为精油和非精油两部分。精油部分以萜类为主，包括单萜类、二萜类、倍半萜类以及多萜类；非精油部分中成分较为复杂，其中以木脂素类和多酚类(包括黄酮类)化合物为主，并含有少量的香豆素类物质、有机酸和留醇等。木脂素类化合物是一类由苯丙素衍生物(C6-C3)聚合而成的天然化合物活性成分，是植物小分子量次生代谢产物，多以二聚体的形式存在，少数为三聚体和四聚体，具有结构多样性和广泛的生物活性，在植物体内大多呈游离状态，也有与糖结合成甙存在于植物的树脂状物质中，所在部位各异，分布于植物的根、茎、叶、花、果实等部位。从叉子圆柏中分离出的木脂素类化合物中又以鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的含量最高。 对于鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的分离和纯化，现有技术一般采用柱层析和重结晶精制(中国专利申请CN101967151A ；CN101503410A ;CN101805348A)，工艺方法上存在着分离、纯化步骤繁多、复杂的问题。由于鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的结构和性质十分相近，纯化难度大，分离后虽然其纯度可进一步提高，但得率大幅下降，而且由于采用了层析柱，设备投资较大，操作烦琐，溶剂消耗量大，柱层析时还会使样品容易被不可逆吸附在柱填料上而损失，并且由于木脂素类化合物的结构不稳定性，在固体填料上还会发生开环和异构化等反应，因而分离效率较低。而高速逆流色谱是新型的现代色谱分离技术，它是基于运转螺旋管内两相溶剂的单向性流体动力学现象而获得高效率分离的色谱系统，是一种连续的无需任何固体填料的高效、快速的液一液分配色谱分离技术，避免了因固体填料带来的样品不可逆吸附、沾污和变性等各种问题，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，而且节约溶剂，分离结果能达到相当高的纯度。迄今为止，尚未见文献和专利报道从较低纯度的叉子圆柏的乙醇提取浸膏中，直接采用高速逆流色谱法同时分离纯化制备鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决以上提出的问题，提供一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼白毒素的方法，该方法操作简便、分离效率高。 一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的方法，包括以下步骤: (I)将叉子圆柏粉碎成粗粉，以乙醇水溶液进行提取，得到的提取液浓缩后，冷冻干燥得到乙醇提取浸膏； 其中，所述的叉子圆柏选用叉子圆柏的茎、叶或果实(球果)；所述的乙醇水溶液的质量百分比为70?95% ;所述的提取方法为冷浸和渗漉； (2)以溶剂A、溶剂B、溶剂C和溶剂D组成高速逆流溶剂系统，将所述高速逆流溶剂系统充分混合后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，取下相为流动相； 其中，溶剂A为卤代烷烃或脂肪烷烃； 溶剂B为脂肪酸酯； 溶剂C为脂肪醇； 溶剂D为水或者脂肪酸的水溶液； (3)将步骤(2)得到的固定相用气压方式压入并充满高效逆流色谱仪的主机工作鼓，开启逆流色谱仪，使主机转动，用流量泵泵入步骤(2)得到的流动相，取步骤(I)得到的乙醇提取浸膏溶解于流动相中进样，分别收集鬼白毒素的洗脱液和脱氧鬼白毒素的洗脱液，浓缩后得到所述的鬼白毒素和所述的脱氧鬼白毒素。 本专利技术提供的方法，以高速逆流色谱作为分离装置，实现了结构和性质十分相近的木脂素类化合物鬼白毒素和脱氧鬼白毒素的同时分离和纯化，也为天然药用植物质量控制所需要的高纯度对照品的制备提供一种实用的新技术方法。 作为优选，所述的卤代烷烃为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷中的至少一种，包括任一种或任意种以任意比例混合的混合物。 作为优选，所述的脂肪烷烃为正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、石油醚中的至少一种，包括任一种或任意种以任意比例混合的混合物。 作为优选，所述的脂肪酸酯为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯中的一种或任意两种等容积的混合物；作为进一步的优选，所述脂肪酸酯为乙酸乙酯。 作为优选，所述的脂肪醇是甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇中的任一种；作为进一步的优选，所述脂肪醇为甲醇。 作为优选，所述的溶剂A、溶剂B和溶剂C的容积比为1.0:0.3?2.0:0.8?1.5，水或乙酸水溶液的用量应至少保证使上下相分层。 作为优选，所述的溶剂A为四氯化碳、正己烷或者石油醚； 所述的溶剂B为乙酸乙酯； 所述的溶剂C为甲醇； 所述的溶剂D为水或醋酸水溶液；其中，醋酸水溶液中乙酸的浓度范围为0.01?0.10mol/L。 作为优选，步骤(3)中，主机转速为400?800rpm ； 流动相的流量为3?5mL/min。 本专利技术提供的方法，分离过程是在高速逆流色谱分离装置中连续进行的，操作简便易行，有机溶剂消耗量少，它不用任何固体填料，与柱层析等色谱方法比较，不存在固态载体所造成的样品吸附损耗、沾污和变性等问题。逆流色谱分离装置中的分离柱，可按分离需要设置，以调节分离柱的不同容量。在运行状况下，多个分离柱可以行星式设置同时绕中心轴旋转，因而扩大了柱容量。分离后，分别收集得到的鬼白毒素和脱氧鬼白毒素组分，经减压浓缩、真空干燥，最后可同时获得高纯度的鬼白毒素和脱氧鬼白毒素组分，其纯度高达98%以上，是一种操作简便、分离效率高的分离制备方法。 【具体实施方式】 逆流色谱分离装置中的分离柱配置数量可以为2?3个，采用各种规格的聚四氟乙烯(PTFE)管多层缠绕，根据缠绕管的长度和管径的大小可设计成不同柱容量的分离柱。 叉子圆柏的乙醇提取浸膏按以下步骤提取得到:选用叉子圆柏的茎、叶或果实(球果)作为原料，先将原料粉碎成粗粉，采用95%的乙醇进行冷浸和渗漉提取，合并叉子圆柏的乙醇提取液，减压浓缩回收乙醇，将残留的乙醇完全蒸出后，进行冷冻干燥，最后得到叉子圆柏的乙醇提取浸膏，备用。经高效液相色谱(HPLC)分析检测，叉子圆柏的乙醇提取浸膏中鬼臼毒素的质量百分含量为0.41%，脱氧鬼臼毒素的质量百分含量为1.54%。 下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。 实施例1 本实施例的逆流色谱的主机工作鼓中，多层缠绕的聚四氟乙烯(PTFE)管的柱容量为2.5升。溶剂系统采用四氯化碳:乙酸乙酯:甲醇:水=1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从叉子圆柏中同时制备高纯度鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将叉子圆柏粉碎成粗粉，以乙醇水溶液进行提取，得到的提取液浓缩后，冷冻干燥得到乙醇提取浸膏；(2)以溶剂A、溶剂B、溶剂C和溶剂D组成高速逆流溶剂系统，将所述高速逆流溶剂系统充分混合后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，取下相为流动相；其中，溶剂A为卤代烷烃或脂肪烷烃；溶剂B为脂肪酸酯；溶剂C为脂肪醇；溶剂D为水或者脂肪酸的水溶液；(3)将步骤(2)得到的固定相用气压方式压入并充满高效逆流色谱仪的主机工作鼓，开启逆流色谱仪，使主机转动，用流量泵泵入步骤(2)得到的流动相，取步骤(1)得到的乙醇提取浸膏溶解于流动相中进样，分别收集鬼臼毒素的洗脱液和脱氧鬼臼毒素的洗脱液，浓缩后得到所述的鬼臼毒素和所述的脱氧鬼臼毒素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈平，楼辉，钱越英，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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