替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种能测定替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质含量的高效液相色谱方法，该方法能同时测定替米考星、磺胺二甲嘧啶及其钠盐的有关物质；本发明专利技术在测定有关物质含量方面结果准确、可靠，具有很强的实用性与推广价值。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种能测定替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质含量的高效液相色谱方法，该方法能同时测定替米考星、磺胺二甲嘧啶及其钠盐的有关物质；本专利技术在测定有关物质含量方面结果准确、可靠，具有很强的实用性与推广价值。【专利说明】
本专利技术涉及替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质检测方法，属方法学领域。
技术介绍
兽医临床实际中往往通过联合用药使不同药物获得协同或相加作用，从而提高疗 效，减少用量，降低或避免毒性反应，减少细菌耐药性的产生。这使得复方药物的研究应用 在兽药领域越来越受到关注。替米考星是大环内酯类药物，是繁殖期抑菌剂，属于快速抑菌 齐?，磺胺类药物是静止期抑菌剂，是一种慢效抑菌剂，二者合用能够扩大抗菌谱，并有相加 的作用，在临床中有很大的运用基础。按照国家有关规定，对于复方制剂必须按照新兽药申 报，所以，需要进行该复方制剂的有关物质研究。在中国兽药典（2010年版)中，替米考星的 有关物质用高效液相色谱法进行检测，磺胺二甲嘧啶的有关物质用薄层色谱法检测。基于 薄层色谱法不适于杂质的定量研究，所以采用高效液相色谱法进行杂质的检测。但是如果 完全参照药典中关于替米考星有关物质的方法进行检测，发现顺反式替米考星杂质峰未能 达到基线分离，且拖尾严重，图谱见说明书附图1，而同时检测替米考星、磺胺二甲嘧啶钠的 方法尚无研究，因此开发新的检测替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂中有关物质的检测方 法，已达到能将制剂中的杂质完全、准确的检出的目的。 《中华人民共和国兽药典》（2010年版一部）替米考星项下的有关物质检测方法如 下：取替米考星约〇. 2g，精密称定，置50ml量瓶内，加乙腈10ml超声处理使溶解，用磷酸溶 液(取水900ml，加磷酸5. 71g，用12. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至2. 5 ±0. 1，加水至 1000ml)稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取替米考星对照品适量，精密称定，加乙腈制 成每lml中含0. 25mg的溶液，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用上述磷酸溶液稀释至刻度， 摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录36页）试验，用十八烷基键合硅胶为填充 齐U ;以水-磷酸二丁胺溶液 (975:25)为流动相A，以乙腈为流动 相B ;按下表1进行梯度洗脱；检测波长为280nm ;流速为每分钟1. lml。替米考星反式异构 体(两个不完全分开的峰）的相对保留时间为〇. 8,替米考星顺式异构体的相对保留时间为 1. 0,替米考星顺式-8-差向异构体的相对保留时间为1. 2。精密量取供试品溶液和对照品 溶液各1〇μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中（除顺式、反式和 顺-8-差向异构体外)如有杂质峰，以无水物计算，单个杂质不得过3. 0%，各杂质的和不得 过10. 0%。供试品溶液色谱图中任何小于对照品溶液顺式异构体峰面积0. 01倍的峰可忽 略不计。 表1梯度洗脱程序 【权利要求】1. 一种，采用高效液相色谱法 测定，其特征在于采用的流动相为：乙腈为流动相A ;水-磷酸二丁胺溶液为流动相B ; 10% 甲醇溶液为流动相C。2. 根据权利要求1所述的一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检测方 法，其特征在于流动相的梯度洗脱程序。3. 根据权利要求1、2任一所述的一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检 测方法，其特征在于流动相梯度洗脱程序为：4. 根据权利要求1至3任一所述的一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的 检测方法，其特征在于具体实施步骤如下： (1) 取替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂适量，加提取液制成每lmL含替米考星4mg 的溶液，作为供试品溶液；取替米考星对照品适量，精密称定，加提取液制成每lmL中含 0. 25mg的溶液，精密量取5mL，置25mL量瓶中，用提取液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶 液； (2) 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选择250mmX4. 6mm分析柱；以乙腈为流动相 A ;水-磷酸二丁胺溶液〔取二丁胺16. 8mL，加磷酸溶液（1 - 10) 70mL，边加边搅拌，放冷 后，用磷酸调节pH值至2. 5±0. 1，加水至100mL，即得〕（975 :25)为流动相B，10%甲醇溶 液为流动相C，流速为1. lmL/min，检测波长为280nm，替米考星反式异构体(两个不完全分 开的峰）的相对保留时间为0. 9,替米考星顺式异构体的相对保留时间为1. 0,替米考星顺 式-8-差向异构体的相对保留时间为1. 1，理论板数按替米考星顺式峰计算应不低于3000， 替米考星的顺式和反式异构体峰之间的分离度应符合要求； (3) 精密量取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试 品溶液的色谱图中（除顺式、反式和顺-8-差向异构体外）如有杂质峰，按下式以无水物计 算，单个杂质不得过3. 0%，各杂质的和不得过10. 0%，供试品溶液色谱图中任何小于对照 品溶液顺式异构体峰面积〇. 01倍的峰可忽略不计：式中A :供试品溶液色谱图中除了顺式替米考星、反式替米考星、顺-8-差向异构体替 米考星和磺胺二甲嘧啶钠外，有关物质峰面积的和或单个有关物质峰面积； As :对照品溶液色谱图中顺式、反式、顺-8-差向异构体、磺胺二甲嘧啶钠峰面积 的和； Ws :对照品的重量； W :供试品的重量； P :对照品的顺式和反式异构体的含量； N :对照品与供试品的稀释倍数比。5. 根据权利要求4所述的一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检测方 法，其特征是，提取液的配制方法为：取乙腈400-600ml和pH5. 0-8. 0的磷酸盐缓冲液25mL 加入适量水中，用水稀释至1000 mL。6. 根据权利要求1至5任一所述的一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的 检测方法，其特征是替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂所用原料为：替米考星、磺胺二甲嘧 啶或磺胺二甲嘧啶钠，所用辅料包括但不限于磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、DL-酒石酸、柠檬 酸、DL-苹果酸、聚乙二醇6000、无水葡萄糖、环糊精中的一种或多种。【文档编号】G01N30/36GK104251891SQ201310272838【公开日】2014年12月31日 申请日期:2013年6月28日 优先权日:2013年6月28日 【专利技术者】王霞, 刘拓, 张晓鹏 申请人:瑞普（天津）生物药业有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法测定，其特征在于采用的流动相为：乙腈为流动相A；水‑磷酸二丁胺溶液为流动相B； 10%甲醇溶液为流动相C。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王霞，刘拓，张晓鹏，
申请(专利权)人：瑞普天津生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12