一种通城虎茎段的繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种通城虎茎段的繁殖方法，包括：步骤(1)制作通城虎外植体；步骤(2)利用诱导培养基培养外植体，待外植体萌发后获得试管苗，诱导培养基中含0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤；步骤(3)利用增殖培养基培养试管苗，增殖培养基中含0.5-1.0mg/L的激动素、0-0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0-0.2mg/L的吲哚丁酸；步骤(4)利用壮苗培养基培养试管苗丛生芽，壮苗培养基中含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的吲哚丁酸；步骤(5)利用生根培养基培养健壮试管苗，试管苗根长2-4cm，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0-1.0mg/L的萘乙酸；步骤(6)炼苗，移栽至基质中培养。本发明专利技术中通过通城虎茎段的快速繁殖方法，能够快速繁殖出大量适合移栽的优良通城虎种苗、满足生产需要。

【技术实现步骤摘要】
一种通城虎茎段的繁殖方法
本专利技术涉及一种通城虎茎段的繁殖方法。
技术介绍
通城虎为马兜铃科植物，又名五虎通城、定心草、天然草、学萎、血藤暗消，草质藤本，根圆柱形，细长，茎无毛，干后常有纵棱；味苦、辛，性温，有小毒，有解毒消肿、祛风镇痛、行气止咳之效，主治风湿骨痛、胃脘痛、腹痛、咽喉炎、跌打损伤、小儿惊风、毒蛇咬伤。产于广西(陆川、苍梧、昭平)、广东(博罗、德庆、阳春等)、江西(德兴)、浙江和福建等地，野生的通城虎常生于山谷林下灌丛中和山地石隙中，对生长环境要求较为严格，因此地域分布范围相当有限，近年来随着市场需求量的不断增加，对野生资源的采集量逐渐增大，野生通城虎资源濒临枯竭。利用组织培养快繁技术，可以有效快速的增加其繁殖系数，不仅能满足市场对通城虎药材的需求，又有利于通城虎资源的保护。
技术实现思路
本专利技术设计开发了一种通城虎茎段的繁殖方法。本专利技术中通过通城虎茎段的快速繁殖方法，能够快速繁殖出大量适合移栽的优良通城虎种苗、满足生产需要。本专利技术提供的技术方案为：一种通城虎茎段的繁殖方法，包括：步骤(1)、制作通城虎外植体；步骤(2)、利用诱导培养基培养外植体，待外植体萌发后获得试管苗，诱导培养基中含0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤；步骤(3)、利用增殖培养基培养试管苗，得到试管苗丛生芽，增殖培养基中含0.5-1.0mg/L的激动素、0-0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0-0.2mg/L的吲哚丁酸；步骤(4)、利用壮苗培养基培养试管苗丛生芽，得到健壮试管苗，壮苗培养基中含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的吲哚丁酸；步骤(5)、利用生根培养基培养健壮试管苗，得到带根的试管苗，试管苗根长2-4cm，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0-1.0mg/L的萘乙酸；步骤(6)、炼苗，移栽至基质中培养。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(2)中，诱导培养基中含1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤；所述步骤(3)中，增殖培养基中含0.5mg/L的激动素、0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.2mg/L的吲哚丁酸；所述步骤(4)中，壮苗培养基中含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚丁酸；所述步骤(5)中，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0.6mg/L的萘乙酸。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(6)中，基质由腐殖土、蛭石和椰糠按照体积比3∶1∶1混合组成。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述诱导培养基、增殖培养基和壮苗培养基均采用MS培养基，生根培养基采用1/2MS培养基，诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均含有4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值均为5.8。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(1)中，选取通城虎植株上带顶芽的嫩茎段或带一个腋芽的嫩茎段作为外植体。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(1)中，对外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用体积浓度为1％的洗洁精水溶液浸泡5-10min，自来水冲洗15-30min，无菌水润洗一次，然后用体积浓度为75％的酒精浸泡30-50s，再用添加了2-3滴吐温-20的质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒6-8min，最后用无菌水冲洗3-5次。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(2)中，培养温度为24-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；所述步骤(3)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；所述步骤(4)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天；所述步骤(5)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(6)中炼苗的具体过程为：将带根的试管苗连同培养瓶移出培养室，转入大棚，在温度为25-27℃的条件下放置7天，然后打开瓶盖，在瓶中加入自来水，炼苗3-4天。优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(6)中，移栽后的培养过程具体为：移栽后7-10天使用塑料薄膜保湿，塑料薄膜上面再覆盖一层报纸，遮光率为60％-70％，空气湿度为85％-90％，每天喷雾1次。本专利技术通过生物技术对通城虎进行组织培养快速繁殖，不受季节、时间的限制，在短时间内培育出大量可供移栽的通城虎幼苗，显著提高了通城虎种苗的繁殖系数和种苗质量，实现了通城虎种源的延续。同时，本专利技术采用以芽生芽的茎段培养方式，诱导时间短，发生过程简单，能较好的保持母本的生物学性状，能够确保通城虎的药用价值。具体实施方式下面对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。一种通城虎茎段的繁殖方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择：取通城虎带顶芽的嫩茎段或靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用毛细刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2-4cm的带顶芽的嫩茎段以及带一个腋芽的嫩茎段，最佳为3cm。(2)外植体的消毒：将步骤(1)的嫩茎段依次用质量浓度为1％洗洁精水溶液浸泡5-10min，自来水冲洗15-30min，无菌水润洗一次，然后用体积浓度为75％的酒精浸泡30-50s，再用添加了2-3滴吐温-20的150毫升质量浓度为0.1％升汞消毒7min，无菌水冲洗3-5次，最后摊开在消毒滤纸上以除去表面水分，得到无菌外植体。(3)无菌芽诱导：将步骤(2)得到的带顶芽或带节的嫩茎段去头去尾后切下1.0cm-2.0cm接种到MS培养基中，培养温度为24-26℃，光照强度1500lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天，外植体萌发后获得无菌试管苗，其中MS培养基中1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤(6-苄氨基腺嘌呤简称6-BA)、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，培养基的pH值为5.8。(4)试管苗丛生芽继代增殖培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗置于MS增殖培养基中，温度24-26℃，光照强度2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS增殖培养基中添加了0.5mg/L激动素(激动素简称KT)、0.2mg/L6-BA、0.2mg/L吲哚丁酸(吲哚丁酸简称IBA)、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，培养基的pH值为5.8，KT与6-BA促进分裂，IBA促进生长。(5)壮苗培养：将步骤(4)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度24-26℃，光照强度2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养21天得到健壮试管苗，其中MS壮苗培养基中含0.5g/L的粉状活性炭、0.2mg/L的6-BA、0.4mg/LIBA、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，培养基的pH值为5.8。6-BA与IBA结合能有利促进通城虎试管苗生长，随着IBA浓度的增加，效果越好，但浓度过高则容易长愈伤组织，以0.4mg/LIBA为宜。(6)生根培养：将步骤(5)中得到的健壮试管苗置于1/2MS生根培养基中(1/2MS将MS的大量元素减半其他不变而配置的培养基)，培养温度24-26℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通城虎茎段的繁殖方法，其特征在于，包括：步骤(1)、制作通城虎外植体；步骤(2)、利用诱导培养基培养外植体，待外植体萌发后获得试管苗，诱导培养基中含0.5‑2.0mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤；步骤(3)、利用增殖培养基培养试管苗，得到试管苗丛生芽，增殖培养基中含0.5‑1.0mg/L的激动素、0‑0.2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、0‑0.2mg/L的吲哚丁酸；步骤(4)、利用壮苗培养基培养试管苗丛生芽，得到健壮试管苗，壮苗培养基中含0.2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、0.3‑0.5mg/L的吲哚丁酸；步骤(5)、利用生根培养基培养健壮试管苗，得到带根的试管苗，试管苗根长2‑4cm，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0‑1.0mg/L的萘乙酸；步骤(6)、炼苗，移栽至基质中培养。

【技术特征摘要】
1.一种通城虎茎段的繁殖方法，其特征在于，包括：步骤(1)、选取通城虎植株上带顶芽的嫩茎段或带一个腋芽的嫩茎段作为通城虎外植体；步骤(2)、利用诱导培养基培养外植体，待外植体萌发后获得试管苗，诱导培养基中，以MS为基本培养基，含0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值为5.8，培养温度为24-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；步骤(3)、利用增殖培养基培养试管苗，得到试管苗丛生芽，增殖培养基中，以MS为基本培养基，含0.5-1.0mg/L的激动素、0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.2mg/L的吲哚丁酸、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值均5.8，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；步骤(4)、利用壮苗培养基培养试管苗丛生芽，得到健壮试管苗，壮苗培养基中，以MS为基本培养基，含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的吲哚丁酸、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值为5.8，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天；步骤(5)、利用生根培养基培养健壮试管苗，得到带根的试管苗，试管苗根长2-4cm，生根培养基中，以1/2MS为基本培养基，并含0.5mg/L的吲哚丁酸、0.6mg/L的萘乙酸、4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值为5.8，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽梅，陈乾平，谷筱玉，白隆华，莫长明，曾雯雯，龙海荣，黄芩芬，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45