一种草莓茎尖组织培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种草莓茎尖组织培养基。在开放有菌的环境条件下，分别在初代培养、继代培养、生根培养阶段向MS培养基中添加一定量的前胡和桔梗植物提取(混合)物。使用本发明专利技术可省去高压灭菌和炼苗等常规环节，降低植株玻璃化率，降低成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种草莓茎尖组织培养基。
技术介绍
近几年，草莓工厂化育苗在我国发展迅速，并取得了显著的经济效益和社会效益。但是，传统的植物组织培养存在生产成本高、生产过程繁琐、玻璃化率高和污染严重等问题，影响了草莓组培苗规模化生产应用。寻找解决以上问题的组培技术非常重要。为解决以上问题，有报道一种开放式组培方法，其通过向培养基中添加抑(杀)菌剂替代高压灭菌、无菌接种和无菌培养，创造一个方便、快捷、可靠和低成本的组培方法。专利申请号为200910060484.8的“一种开放式植物组织培养育苗方法”是培养基中添加大蒜、黄连、忍冬、甘草、桂花和石蒜提取物，申请号为201110311185.4的“一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法”是培养基中添加益培隆杀菌剂。以上专利是针对微生物污染、组培苗成本、组培苗生产技术等问题提出的解决方案。本专利技术除了解决以上问题外，还针对植物组织培养过程中玻璃化率高的问题，提供一种可有效降低玻璃化率、提高草莓组培苗成活率的草莓茎尖组织培养基。
技术实现思路
本专利技术提供了一种草莓茎尖组织培养基。包括前胡和桔梗植物提取(混合)物的制备及初代培养基、继代培养基和生根培养基的配制。前胡提取物的制备：称量干燥的前胡根茎1kg，粉碎后过40目筛，将前胡粉末置于提取罐中，加入5L 50％乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物，备用。桔梗提取物的制备：称量干燥的桔梗根茎1kg，粉碎后过50目筛，将粉末置于提取罐中提取3次，每次加入3L 60％乙醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤，得到合并的桔梗根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到桔梗提取物，备用。植物提取(混合)物的制备：(1)将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比5～7∶3～5混合，即得初代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物；(2)将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比6～9∶5～6混合，即得继代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物；(3)将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比7～9∶7～10混合，即得生根培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物。初代培养基的配制：配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L6-BA 2ml及初代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物8～12g/L，混匀，调节pH值为5.8～6.0。继代培养基的配制：配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L6-BA 1ml、500mg/L NAA 1ml及继代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物11～15g/L，混匀，调节pH值为5.8～6.0。生根培养基的配制：配制1L 1/2MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L NAA 2ml、500mg/L烯效唑1ml、250mg/L活性炭1ml及生根培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物14～19g/L，混匀，调节pH值为5.8～6.0。将上述配制好的培养基分装到直径6cm，高5.6cm的透明塑料盒中，培养基厚1cm左右，封口。本专利技术具有良好的抑菌效果，省去高压灭菌、无菌接种和无菌培养等环节；能促进茎尖组织生长、分化和生根，能够培育出抗逆性强、品质好、产量高的草莓组培苗；省去炼苗环节，缩短了培养周期。本专利技术提高了工作效率，降低了生产成本(12％以上)，利于工厂化育苗。本专利技术与现有技术相比，是在常规培养基中添加前胡和桔梗植物提取(混合)物。本专利技术除了解决生产成本高、生产过程繁琐和污染严重等问题，还解决了玻璃化率过高的问题。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的阐述。实施例草莓茎尖组织培养草莓茎尖组织培养按照以下步骤进行：1、提取物的制备(1)前胡提取物的制备称量干燥的前胡根茎1kg，粉碎后过40目筛，将前胡粉末置于提取罐中，加入5L 50％乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物，备用。(2)桔梗提取物的制备称量干燥的桔梗根茎1kg，粉碎后过50目筛，将粉末置于提取罐中提取3次，每次加入3L 60％乙醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤，得到合并的桔梗根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到桔梗提取物，备用。(3)植物提取(混合)物的制备①将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比7∶3混合，即得初代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物；②将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比9∶5混合，即得继代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物；③将备用的前胡提取物和桔梗提取物按质量比7∶10混合，即得生根培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物，备用。2、草莓茎尖的培养(1)植物组织培养基的配制a、初代培养基的配制配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L 6-BA2ml及初代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物10g，混匀，调节pH值为5.9。b、继代培养基的配制配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L 6-BA 1ml、500mg/L NAA 1ml及继代培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物14g，混匀，调节pH值为5.9。c、生根培养基的配制配制1L 1/2MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L NAA2ml、500mg/L烯效唑1ml、250mg/L活性炭1ml及生根培养所需的前胡和桔梗植物提取(混合)物17g，混匀，调节pH值为5.9。d、培养基的分装将上述准备好的培养基，在开放有菌的环境中分装到直径6cm，高5.6cm的透明塑料盒中，培养基厚1cm左右，封口。(2)茎尖组织培养a、外植体消毒从无病虫害的草莓植株上选取茎尖，采用常规方法消毒。b、接种初代培养：在开放有菌的环境中，将消毒后的草莓茎尖，切取长0.5～0.8cm含茎尖生长点的外植体，接种到初代培养基上，封口后，放在有菌的自然环境中暗培养5d，再进行光暗培养28d至分化出丛生芽，其中，光照强度18001x，连续光照时间12h/d，温度23～25℃。继代培养：在开放有菌的环境中，将丛生芽切块转接到继代培养基中，封口后，放在有菌的自然环境中培养25d，其中，光照强度1400～18001x，连续光照时间16h/d，温度25～27℃。生根培养：在开放有菌的环境中，将继代培养的幼苗转接到生根培养基中，封口后，放在有菌的自然环境中培养20d，其中，光照强度2500～40001x，连续光照时间10h/d，室温培养。3、组培苗移栽实施例中的生根苗无需炼苗直接采用常规移栽，移栽后25d调查移栽成活率。4、应用效果经本实施例处理与传统组培相比，草莓组织培养过程中玻璃化率降低了31.4％，降低生产成本12.3％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草莓茎尖组织培养基，其特征在于：所述的组织培养基是在常规培养基的基础上添加前胡和桔梗植物提取(混合)物。

【技术特征摘要】
1.一种草莓茎尖组织培养基，其特征在于：所述的组织培养基是在常规培养基的基础上添加前胡和桔梗植物提取(混合)物。2.根据权利要求1所述的草莓茎尖组织培养基，其特征在于：所述的植物提取(混合)物是通过以下提取工艺得到的，(1)前胡提取物：称量干燥的前胡根茎1kg，粉碎后过40目筛，将粉末置于提取罐中，加入5L 50％乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物；(2)桔梗提取物：称量干燥的桔梗根茎1kg，粉碎后过50目筛，将粉末置于提取罐中提取3次，每次加入3L 60％乙醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤，得到合并的桔梗根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到桔梗提...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡家锟，赵东平，高程达，李金艳，朱珂佳，代俊利，沙晓晴，
申请(专利权)人：北京阿格瑞斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11