一种猴耳环种子苗茎段组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种猴耳环种子苗茎段组织培养快速繁殖方法，依次经过外植体的采集与表面消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、丛生芽的继代培养以及生根培养后，得到完整植株，即可出瓶炼苗，并移栽。本发明专利技术的方法操作容易，生产成本低，不污染环境，可以实现规模化生产。通过本发明专利技术培养的猴耳环种苗，其遗传性状稳定，保持了亲本特性，具备包括稳定、投入少、产出高、周期短等诸多优势。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了，依次经过外植体的采集与表面消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、丛生芽的继代培养以及生根培养后，得到完整植株，即可出瓶炼苗，并移栽。本专利技术的方法操作容易，生产成本低，不污染环境，可以实现规模化生产。通过本专利技术培养的猴耳环种苗，其遗传性状稳定，保持了亲本特性，具备包括稳定、投入少、产出高、周期短等诸多优势。【专利说明】
本专利技术属于组织培养快速繁殖
，具体涉及。
技术介绍
猴耳环iArchidendron clypearia)为含羞草科猴耳环属，别名围涎树、蚊龙木、落地金钱、鸡三树、尿桶公等，常绿乔木，高达十米。猴耳环分布于浙江、福建、广东、海南、四川、广西及云南，生于荒山坡树林中、路旁及河旁。猴耳环既是一种分布在亚热带沿海地区的优秀乡土植物，也是一种重要的园林观花观果植物。此外，猴耳环的茎干、叶片甚至整个植株体内含有多种化学成分，其生理活性广泛，具有细胞毒、抑菌、镇痛、抗病毒等作用。目前猴耳环的需求量、市场交易量逐年增加，猴耳环的利润额一直处于持续上涨趋势，受利益驱动，很多原生地的猴耳环都遭遇掠夺性的砍伐，使大量资源迅速减少和消失。国内外研究工作者大都对猴耳环的药性成分进行研究，对猴耳环的快速繁殖技术研究甚少。因此，建立猴耳环的组织培养快速繁殖技术体系，培育性状一致的植株，对保护猴耳环野生资源和满足药材市场的原材料需求，实现猴耳环的人工规模化育苗和生产显得十分迫切。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术所解决的技术问题在于提供了一种猴耳环实生苗茎段组织培养快速繁殖方法，通过丛生芽途径进行猴耳环组织培养能够获得大量遗传性状稳定的试管苗，保持良好的亲本特性，并且具备包括不变性、投入少、产出高、周期短在内的诸多优势。本专利技术通过以下技术方案来解决上述技术问题:一种猴耳环实生苗茎段组织培养快速繁殖方法，依次包括以下步骤: 1)外植体的采集与表面消毒:选取猴耳环实生种子苗一二年生幼嫩枝条，采集后将洗净的枝条分段，并对枝条进行预处理获取1.5-2cm长、带1-2个侧芽的径段，而后在超净工作台上先用无菌蒸馏水润洗两次，再依次通过酒精和升汞溶液进行表面消毒处理，在用升汞溶液进行处理期间不断的摇晃培养瓶，使茎段与液体充分接触，之后立即用无菌蒸馏水冲洗5-8次，冲洗好后将茎段置于灭菌待用的碟子中，切除叶柄、茎段两端受伤部位，将茎段接种到芽诱导培养基中；2)丛生芽的诱导:采用诱导培养基培养一周之后，新芽长出，30天后新芽长到l-2cm；培养过程中，温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；3)丛生芽的增殖:将丛生芽切割成2段，每段1-2节，转接到丛生芽增殖培养基，培养45-60天，获得大量丛生芽；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；4)继代培养:采用继代培养基进行继代培养，每45天继代一次；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；5)生根培养:继代苗达到合适数量后，采用生根培养基进行生根培养，培养30?50天得到生根苗；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天;6)试管苗移栽:选择每年3-5月、7-11月为出瓶移栽的季节，或者提供类似3?5、7-11月份自然条件的生长环境进行出瓶移栽；移栽前，试管苗放置于具自然光散射的温室中炼苗7-10天，然后从瓶中取出小苗，清洗根部的培养基，取出后种植于新配制的培养土中，温室须保持通风，湿度在70?80%，温度保持在15°C以上至室温范围内，高于30°C必须用风机、水帘降温。优选地,所述诱导培养基成为MS基本培养基,未添加任何激素,培养基pH值为5.8-6.00优选地，所述丛生芽增殖培养基成分中含有MS + 6-BAC6-苄氨基腺嘌呤)0.50?1.50 mg/L +IBA (吲哚丁酸)0.00 ?0.20 mg/L +NAA (萘乙酸)0.00 ?0.10mg/L +GA3 (赤霉素)0.10 ?1.00 mg/L ο优选地，所述继代培养基成分中含有MS +6-BA (6_苄氨基腺嘌呤)0.20?1.50mg/L + NAA (萘乙酸)0.00 ?0.10 mg/L + IBA (吲哚丁酸)0.00 ?0.20 mg/L + GA3 (赤霉素)0.10 ?1.50 mg/L ο优选地，所述生根培养基成分中含有1/2MS + IBA (吲哚丁酸)0.00?1.00 mg/L+ NAA (萘乙酸)0.00 ?2.00 mg/L。优选地，所述外植体的采集与表面消毒，所述外植体的采集与表面消毒步骤中，对枝条进行预处理是指用自来水冲洗外植体表面0.5-1 h，剪去叶片，并剪成1.5-2cm长、带1-2个侧芽的径段，接着用洗洁剂溶液浸泡6min后，再用棉球蘸洗洁剂溶液仔细轻轻清洗腋芽及茎段，再用清水冲洗0.5-1 h，放入干净容器中待用。优选地，所述外植体的采集与表面消毒步骤中，依次通过酒精和升汞溶液进行处理是指接着转入75%的酒精中30 S，用无菌蒸馏水冲洗2到3次，然后用0.1%升汞6- 10min对猴耳环茎段灭菌，期间不断的摇晃培养瓶。优选地，所述培养土中草炭土、珍珠岩、蛭石的配比3:1:1。相比于现有技术，本专利技术的猴耳环实生苗茎段组织培养快速繁殖方法的有益效果在于:该方法操作容易，生产成本低，不污染环境，能够实现规模化生产。通过本专利技术培育出的猴耳环种苗，其遗传性状稳定，保持了亲本的特性，具备包括不变性、投入少、产出高、周期短在内的诸多优势。【具体实施方式】本专利技术【具体实施方式】中提供的一种猴耳环组织培养快速繁殖方法，具体包括以下依次进行的步骤:I)外植体的采集与表面消毒:选取猴耳环实生种子苗一二年生幼嫩枝条，采集后将洗净的枝条分段，并对枝条进行预处理获取1.5-2cm长、带1-2个侧芽的径段，而后在超净工作台上先用无菌蒸馏水润洗两次，再依次通过酒精和升汞溶液进行表面消毒处理，在用升汞溶液进行处理期间不断的摇晃培养瓶，使茎段与液体充分接触，之后立即用无菌蒸馏水冲洗5-8次，冲洗好后将茎段置于灭菌待用的碟子中，切除叶柄、茎段两端受伤部位，将茎段接种到芽诱导培养基中；2)丛生芽的诱导:采用诱导培养基培养一周之后，新芽长出，30天后新芽长到l-2cm；培养过程中，温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；3)丛生芽的增殖:将丛生芽切割成2段，每段1-2节，转接到丛生芽增殖培养基，培养45-60天，获得大量丛生芽；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；4)继代培养:采用继代培养基进行继代培养，每45天继代一次；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天；5)生根培养:继代苗达到合适数量后，采用生根培养基进行生根培养，培养30?50天得到生根苗；培养条件为:温度为25±2°C，光照强度为1500-2000 lx，光照时间为12小时/天;6 )试管苗移栽:选择每年3-5月、7-11月为出瓶移栽的季节，或者提供类似3?5、7-11月本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猴耳环种子苗茎段组织培养快速繁殖方法,?其特征在于该方法依次包括以下步骤：1）外植体的采集与表面消毒：选取猴耳环实生种子苗一二年生幼嫩枝条，采集后将洗净的枝条分段，并对枝条进行预处理获取1.5?2cm长、带1?2个侧芽的径段，而后在超净工作台上先用无菌蒸馏水润洗两次，再依次通过酒精和升汞溶液进行表面消毒处理，在用升汞溶液进行处理期间不断的摇晃培养瓶，使茎段与液体充分接触，之后立即用无菌蒸馏水冲洗5?8次，冲洗好后将茎段置于灭菌待用的碟子中，切除叶柄、茎段两端受伤部位，将茎段接种到芽诱导培养基中；2）丛生芽的诱导：采用诱导培养基培养一周之后，新芽长出，30天后新芽长到1?2cm；培养过程中，温度为25±2℃，光照强度为1500?2000?lx，光照时间为12?小时/天；3）丛生芽的增殖：将丛生芽切割成2段，每段1?2节，转接到丛生芽增殖培养基，培养45?60天，获得大量丛生芽；培养条件为：温度为25±2℃，光照强度为1500?2000?lx，光照时间为12?小时/天；4）继代培养：采用继代培养基进行继代培养，每45天继代一次；培养条件为：温度为25±2℃，光照强度为1500?2000?lx，光照时间为12?小时/天；5）生根培养：继代苗达到合适数量后，采用生根培养基进行生根培养，培养30～50天得到生根苗；培养条件为：温度为25±2℃，光照强度为1500?2000?lx，光照时间为12?小时/天；6）试管苗移栽：选择每年3?5月、7?11月为出瓶移栽的季节，或者提供类似3～5、7?11月份自然条件的生长环境进行出瓶移栽；移栽前，试管苗放置于具自然光散射的温室中炼苗7?10天，然后从瓶中取出小苗，清洗根部的培养基，取出后种植于新配制的培养土中，温室须保持通风，湿度在70～80%，温度保持在15℃以上至室温范围内，高于30℃必须用风机、水帘降温。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵小兰，黄烈健，王渝余，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：