本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株FQ-4F12，以及该细胞株分泌的抗重金属汞单克隆抗体。杂交瘤细胞株FQ-4F12，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.C2014131。其分泌产生的单克隆抗体可识别重金属汞，灵敏度高、特异性好。由该单克隆抗体研制的酶联免疫吸附检测方法可实现水环境中重金属汞的检测，对检测溶液中汞离子含量的IC50可达25ng/mL。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及杂交瘤细胞株FQ-4F12，以及该细胞株分泌的抗重金属汞单克隆抗体。杂交瘤细胞株FQ-4F12，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC?NO.C2014131。其分泌产生的单克隆抗体可识别重金属汞，灵敏度高、特异性好。由该单克隆抗体研制的酶联免疫吸附检测方法可实现水环境中重金属汞的检测，对检测溶液中汞离子含量的IC50可达25ng/mL。【专利说明】杂交瘤细胞株FQ-4F12，及其产生的抗重金属汞单克隆抗体
本专利技术涉及杂交瘤细胞株FQ-4F12，及其分泌的抗重金属汞的单克隆抗体。
技术介绍
重金属汞是自然界存在的一种重要的金属元素。由于具有多种优良特性，汞及其化合物在工农业生产中应用十分广泛。然而，汞是一种对人体和高等生物具有很强毒性的金属污染物。早在20世纪50年代日本熊本水俣病爆发之后，汞的污染问题就引起了人们的关注。近年来，随着城市化进程的不断加快和工业化水平的迅速提升，由生产、生活所致的汞及其化合物污染日趋严重并再度成为全球热点问题之一。 当前，含汞颗粒物的大气沉降、农用含汞杀菌剂的大量使用、工业及生活含汞废水的排放等问题不仅使环境中汞污染现象十分严重，造成农产品中重金属污染超标，严重影响我国农产品质量和国际竞争力，而且还严重危害人类的身体健康。汞对人体的危害主要表现在导致肾损伤(以无机汞形式存在)、中枢神经系统紊乱、智障、甚至死亡(以有机汞形式存在)。汞污染和其它重金属污染往往会造成二种或多种重金属元素的复合污染，并具有普遍性、复杂性等特点，给生态环境带来了更大的压力。因此，对环境中重金属汞污染的检测工作越来越受到人们的关注。 传统的重金属检测方法多采用化学仪器检测，如利用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法、离子色谱仪、X射线荧光光谱法、气相色谱-质谱联用法等，这些检测方法虽然能够精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对费时、费力，费用昂贵，需要具备大型分析仪器设备的室内进行，不适应实践中快速简便的需要。 重金属的免疫检测方法具有快速、廉价、简便、特异的优点，便携而有利于进行现场监测，克服了传统检测方法的缺点。但重金属离子本身免疫原型低，很难制备出针对重金属离子的单克隆抗体。因此，为克服该困难，本专利技术通过化学合成高选择性重金属离子捕获螯合剂，制备重金属离子螯合物，与载体蛋白偶联获得完全抗原，筛选出能够分泌针对环境水中重金属汞离子的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并利用该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体建立了针对环境水中重金属汞离子的酶联免疫检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供杂交瘤细胞株FQ-4F12，及其分泌的抗重金属汞的单克隆抗体。 本专利技术的目的可通过如下技术方案实现: 1.本专利技术提供的杂交瘤细胞株FQ-4F12，已于2014年7月2号保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是:中国，武汉，武汉大学；保藏编号为CCTCCN0.C2014131。 2.抗重金属汞单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC N0.C2014131的杂交瘤细胞株FQ-4F12分泌产生。 3.上述杂交瘤细胞株FQ-4F12，是通过以下方法筛选得到: 3.1人工抗原的合成 称取0.0466g MNA, 0.0346g NHS、0.0619g DCC 溶于 ImL DMF 中，不断搅拌，孵育过夜，13，400rpm离心10分钟，分别逐滴加入溶有0.2g BSA的15mL0.13moI/LNaHCO3溶液和 0.4g OVA的30mL0.13mol/L NaHCO3溶液，边加边搅拌，反应4h，离心取上清，用0.01M PBS透析4天，每天换透析液。MNA-OVA透析液分一半分装保存。称0.06277g CH3HgCl溶于ImL甲醇，甲醇中提前加20uL IM NaOH0将CH3HgCl溶液逐滴加入透析好的MNA-BSA/0VA中，边加边搅拌，反应孵育过夜，第二天，溶液用0.0IM (NH4)2CO3透析4天,蛋白透析液分装,-20 °C保存。其中，Hg-MNA-BSA作为免疫原，Hg-MNA-OVA和MNA-OVA作为包被原。 3.2杂交瘤细胞株的筛选 以100 μ g每只的抗原量免疫6-8周龄健康的雌性BALB/C小鼠。每次间隔时间为2-3周，最后一次加强免疫后3天，无菌条件下取出小鼠脾细胞，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞以5:1的细胞数量用PEG介导的方法融合。融合后置于37°C、5% C02培养箱中培养。培养细胞长至培养孔1/3-1/2时，用间接竞争ELISA法筛选出效价高、抑制率高、细胞生长旺盛的培养孔进行亚克隆。经过3-5次亚克隆后，扩大培养，建立杂交瘤细胞株。 3.3单克隆抗体的制备 将获得的杂交瘤细胞株FQ-4F12注射预先用无菌石蜡油处理过的BA1B/C小鼠，收集该小鼠的腹水，利用辛酸-硫酸铵法对收集的腹水进行纯化处理得到抗重金属汞的单克隆抗体。 4.检测水环境中重金属汞的间接竞争酶联免疫检测技术 包被:用包被缓冲液(0.05mol/L, pH9.6)将包被抗原(Hg-MNA-OVA)稀释为l.0yg.ml/1加入酶标板，每孔50μ 1，4°C中孵育12小时； (2)洗板:用洗涤液PBST (0.05%吐温20，0.01mol/L, ρΗ7.4)洗涤5次，吸水纸拍干; (3)封闭:每孔加入200μ Ll%明胶，37°C孵育1.5h ； (4)洗板:同⑵； (5)加入Hg2+和抗体混合物:用PBST磷酸缓冲液倍比逐级稀释Hg2+溶液，每孔加入25 μ L，再加入稀释一定倍数的抗体溶液25 μ L，37°C孵育lh，PBST洗涤5次，并平行设置阳性对照和阴性对照； (6)洗板:同⑵； (7)加入酶标二抗体:每孔加入50μ L经1: 20000倍PBST稀释的辣根过氧化物酶-羊抗小鼠IgG (武汉博士德公司)，37°C孵育Ih ； (8)洗板:同⑵； (9)显色:每孔加入50 μ L新鲜配制的显色液，37°C温箱孵育1min ； (10)终止:每孔加 25 μ L2mol/L 的 H2504 溶液； 用酶标仪(Thermo C0.)测定450nm波长处的各孔吸光值,并计算抑制率。抗体的IC50 = 25ng/mL。结果表明，制备的抗体能较好的识别Hg2+。 有益效果 (I)本专利技术提供的杂交瘤细胞株及其分泌的抗体稳定性高:杂交瘤细胞冻存于液氮至少保持5年，抗体的稳定性也会比较好，纯化的抗体_20°C冰箱至少可以存放2年。 (2)本专利技术提供的单克隆抗体可特异性识别重金属汞离子，与金属Mg，Mn，Fe, Cd，Zn，Pb等离子的交叉反应率在I %以内。【权利要求】1.一种用于检测重金属汞的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO:C2014131的杂交瘤细胞株FQ-4F12产生。2.产生权利要求1所述的用于检测重金属汞的单克隆抗体的杂交瘤细胞株FQ-4F12，于2014年7月2日保藏于 中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2014131o【文档编号】C07K16/44GK104130330SQ201410399871【公开日】20本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测重金属汞的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO：C2014131的杂交瘤细胞株FQ‑4F12产生。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤权，王利民，王苏妍，蔡佳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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