一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法技术

本发明专利技术是一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法。该方法是将细胞种植在96孔板上进行卷烟烟气染毒后直接固定、染色、上高内涵成像系统进行检测。根据细胞核的荧光值与背景荧光值之差设置细胞主核及微核荧光强度参数，测量细胞主核及微核的大小设置核直径参数，根据细胞核之间的距离设置距离参数。根据以上设定对图片进行分析，在结果导出栏选择具有微核的双核细胞数及双核细胞总数，从而计算出微核率。本方法需要的细胞量少，不需要消化细胞和制作微核片，并且检测速度快，样本量大、准确率高。

【技术实现步骤摘要】
一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法
本专利技术涉及用高内涵成像系统检测卷烟主流烟气总粒相物(TPM)体外细胞微核方法，属于卷烟烟气安全性评价

技术介绍
体外细胞微核试验是目前用于卷烟烟气安全性评估的体外毒理学检测试验之一，用于评价卷烟烟气的遗传毒性。传统微核试验是利用细胞生物学方法经显微制片后在显微镜下直接计数待测材料微核率。传统微核检测方法需要的细胞量大，并且需要将细胞消化下来后进行微核制片，这样细胞损失多、损伤大，并且后期是人工阅片，存在检测样本量受限、准确度不高和效率低的问题。而近年来，随着微核检测范围的拓展，检测样品需求大大增加，传统微核试验就难以满足快速高通量检测需要。随着科学技术的发展，多种微核的自动化阅片方法得到研究。在2010年的OECD（TheOrganisationforEconomicCo-operationandDevelopment）中提到可使用自动化的系统器对微核进行计数和检测，为微核试验的统一标准提供了新的研究方向[OECDGUIDELINEFORTHETESTINGOFCHEMICALS487:InVitroMammaliaCel本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）按照烟草国标方法平衡卷烟，选取重量和吸阻一致的烟支，全自动转盘式吸烟机上抽吸20支卷烟， 用剑桥滤片捕集器中剑桥滤片捕集烟气的总粒相物，将剑桥滤片用DMSO浸泡，超声波提取20 min，最后定容至 10 mg TPM/ml DMSO，‑80℃低温保存备用；（2）按常规方法传代培养CHO细胞，待细胞长满时将细胞密度约5×104个细胞/ml的 CHO细胞种于96孔板，置于37℃、体积浓度5％CO2培养箱中培养24 h；（3）用25‑200μg/ml的TPM处理处于对数生长期的CHO细胞培养物，每组设三个平行，所有组...

【技术特征摘要】
1.一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）按照烟草国标方法平衡卷烟，选取重量和吸阻一致的烟支，全自动转盘式吸烟机上抽吸20支卷烟，用剑桥滤片捕集器中剑桥滤片捕集烟气的总粒相物，将剑桥滤片用DMSO浸泡，超声波提取20min，最后定容至10mgTPM/mlDMSO，-80℃低温保存备用；（2）按常规方法传代培养CHO细胞，待细胞长满时将细胞密度约5×104个细胞/ml的CHO细胞种于96孔板，置于37℃、体积浓度5％CO2培养箱中培养24h；（3）用25-200μg/ml的TPM处理处于对数生长期的CHO细胞培养物，每组设三个平行，所有组中都加入终浓度为6μg/ml的细胞松弛素B以对细胞分裂进行阻断，置于37℃、体积浓度5％CO2培养箱中培养24h；（4）用PBS洗涤生长于96孔板上的CHO细胞，接着用质量浓度4％多聚甲醛溶液固定10min，用PBS洗涤2次；（5）用...

【专利技术属性】
技术研发人员：高茜，缪明明，夭建华，曾婉俐，朱洲海，管莹，米其利，李雪梅，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南;53