阳离子性脂质制造技术

本发明专利技术提供一种使得能容易地将核酸导入细胞内的阳离子性脂质、含有该阳离子性脂质及核酸的组合物、使用含有该阳离子性脂质及核酸的组合物将核酸导入细胞内的方法等，所述阳离子性脂质由式(I)表示，式中，R1及R2相同或不同，为链烯基等，X1及X2为氢原子、或者连接在一起形成单键或亚烷基，X3不存在或者为烷基等，Y不存在或者为阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L3为单键等，R3为烷基等，L1及L2为-O-、-CO-O-或者-O-CO-。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】阳离子性脂质
本专利技术涉及使得能容易地将核酸导入例如细胞内等的新型阳离子性脂质及含有 该阳离子性脂质的新型组合物等。
技术介绍
所谓阳离子性脂质，为下述两亲性分子，具有含有一个或者多个烃基的脂质亲和 性区域、和含有至少带一个正电的极性头基（headgroup)的亲水性区域。阳离子性脂质与 核酸等巨大分子通过形成以总电荷计带正电的复合体，使得核酸等巨大分子容易通过细胞 的原生质膜进入细胞质，因此阳离子性脂质是有用的。能够在体外及体内进行的该过程作 为转染被人们知晓。 典型地，阳离子性脂质单独使用或者与磷脂等中性脂质组合。已知阳离子性脂质 与中性脂质组合，能够容易地形成含有整齐排列的脂双层膜的小泡，因此这样的组合是有 用的。阳离子性脂质单独或者与中性脂质组合形成的小泡、或者脂质体在表面具有多个正 电荷，通过该电荷，能够与多核苷酸或者带负电的蛋白质等其他阴离子性分子形成复合体。 通过多核苷酸/阳离子性脂质/中性脂质复合体的表面上残留的总阳离子电荷，能够与细 胞膜表面的主要的负电荷引起很强的相互反应。 大量的不同种类的阳离子性脂质为了用于转染而被合成，目前已有市售。上述阳 离子性脂质包括例如 Lipofectin、Lipofectin ACE、Lipofect AMINE、Transfeactam、D0TAP 等。 专利文献1中公开的、N-[l-(2,3-二油基氧基）丙基]-N，N，N-三甲基氯化 铵（D0TMA)等为当初开发的阳离子性脂质之一。D0TMA等的特征在于，向分子赋予阳离 子部位的、具有季氮的丙铵基（propanaminium group)及与分子的丙基骨架形成醚键的 一对高级烃。季氮被甲基等链比较短的烷基链三取代。结构上类似的阳离子性脂质、 N-(2,3-二-(9-(Z)_十八碳烯酰基氧基））-丙烷-1-基-N，N，N-三甲基氯化铵（D0TAP)不 含形成了醚键的烷基，而含有酰基。 专利文献2及3中公开的、例如N-[l-(2, 3-二油基氧基丙基）]-N，N_二甲 基-N-羟基乙基溴化铵（D0RIE)、2, 3-二油基氧基-N-[2-(精胺羧基酰胺）乙基]-N，N-二 甲基-1-丙铵基三氟乙酸（D0SPA)等的特征在于，向分子赋予阳离子部位的、具有季氮的丙 铵基及与分子的丙基骨架形成醚键的一对高级烃，并且特征在于，季氮被甲基等链比较短 的烷基链和羟基烷基三取代。 专利文献4中公开了例如1,2-二亚油基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷（DLinDMA) 等。DLinDMA等的特征在于，出于开发更柔软的阳离子性脂质、并且由此提高脂质体等的膜 流动性的目的，使结构上类似的阳离子性脂质即D0TAP及D0TMA的高级烷基为至少具有2 处不饱和部位的高级烷基。另外，专利文献5中公开了例如2, 2-二亚油基-4-二甲基氨基 甲基-[1，3]_ 二氧戊环（DLin-K-DMA)等。 专利文献1 :日本特开昭61-161246号公报（美国专利5049386号说明书） 专利文献2 :国际公开第91/16024号小册子 专利文献3 :国际公开第97/019675号小册子 专利文献4 :国际公开第2005/121348号小册子 专利文献5 :国际公开第2009/086558号小册子
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种将核酸容易地导入例如细胞内等的新型阳离子性脂 质及含有该阳离子性脂质的新型组合物等。 本专利技术涉及以下⑴?（27)。 ⑴式⑴表示的阳离子性脂质 本文档来自技高网...

【技术保护点】
式(I)表示的阳离子性脂质，式中，R1及R2相同或不同，为碳原子数12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者炔基，或者R1及R2连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，X1及X2为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基，X3不存在，或者为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基，X3不存在时，Y也不存在，a及b为0，L3为单键，R3为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷‑3‑基、哌啶‑3‑基、哌啶‑4‑基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L1及L2为‑O‑，或者Y也不存在，a及b相同或不同为0～3，并且a和b不同时为0，L3为单键，R3为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷‑3‑基、哌啶‑3‑基、哌啶‑4‑基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L1及L2相同或不同，为‑O‑、‑CO‑O‑或者‑O‑CO‑，或者Y也不存在，a及b相同或不同为0～3，L3为单键，R3为氢原子，L1及L2相同或不同，为‑O‑、‑CO‑O‑或者‑O‑CO‑，或者Y也不存在，a及b相同或不同，为0～3，L3为‑CO‑或者‑CO‑O‑，R3为吡咯烷‑2‑基、吡咯烷‑3‑基、哌啶‑2‑基、哌啶‑3‑基、哌啶‑4‑基、吗啉‑2‑基、吗啉‑3‑基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L1及L2相同或不同，为‑O‑、‑CO‑O‑或者‑O‑CO‑，X3为碳原子数1～6的烷基或者碳原子数3～6的链烯基时，Y为制药上能允许的阴离子，a及b相同或不同，为0～3，L3为单键，R3为碳原子数1～6的烷基、碳原子数3～6的链烯基、吡咯烷‑3‑基、哌啶‑3‑基、哌啶‑4‑基或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1～6的烷基或碳原子数3～6的链烯基，L1及L2相同或不同，为‑O‑、‑CO‑O‑或者‑O‑CO‑。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.11.02 US 61/554,622;2012.07.12 US 61/670,840;1.式（I)表示的阳离子性脂质，式中，R1及R2相同或不同，为碳原子数12?24的直链状或支链状的烷基、链烯基或者 炔基，或者R1及R2连接在一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链 稀基亚甲基， X1及X2为氢原子，或者连接在一起形成单键或亚烷基， X3不存在，或者为碳原子数1?6的烷基或者碳原子数3?6的链烯基， X3不存在时， Y也不存在，a及b为0, L3为单键，R3为碳原子数1?6的烷基、碳原子数3?6的链 烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或不同的1?3个氨基、单烷基氨 基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲 酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1?6的烷基或碳原子数3?6的链烯基， L1及L2为-0-,或者 Y也不存在，a及b相同或不同为0?3,并且a和b不同时为0, L3为单键，R3为碳原 子数1?6的烷基、碳原子数3?6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者 被相同或不同的1?3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲 酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数 1?6的烷基或碳原子数3?6的链烯基，L 1及L2相同或不同，为-〇-、-〇)-〇-或者-0-C0-， 或者 Y也不存在，a及b相同或不同为0?3, L3为单键，R3为氢原子，L1及L2相同或不同， 为-〇-、-co-ο-或者-0-C0-，或者 Y也不存在，a及b相同或不同，为0?3, L3为-C0-或者-C0-0-，R3为吡咯烷-2-基、 吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或者被相同或 不同的1?3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单 烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1?6的 烷基或碳原子数3?6的链烯基，该取代基的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三 烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或者吗啉基，L 1及L2相同或不同，为-〇-、-〇)-〇-或者-0-C0-， X3为碳原子数1?6的烷基或者碳原子数3?6的链烯基时， Y为制药上能允许的阴离子，a及b相同或不同，为0?3, L3为单键，R3为碳原子数1? 6的烷基、碳原子数3?6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或者被相同或 不同的1?3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单 烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数1?6的 烷基或碳原子数3?6的链烯基，L 1及L2相同或不同，为-0-、-C0-0-或者-0-C0-。2. 如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L1及L2为-0-或者-O-CO-，R1及R 2为 十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、（Z)_十四 烧 -9_烯基、（Z)-十六烧_9_烯基、（Z)-十八烧_6_烯基、（Z)-十八烧_9_烯基、(E)-十八 烷-9-烯基、（Z)-十八烷-11-烯基、（9Z，12Z)-十八烷-9, 12-二烯基、（9Z，12Z，15Z)-十八 烷-9, 12, 15-三烯基、（Z)-二十烷-11-烯基、（11Z，14Z)-二十烷-11，14-二烯基、 3, 7, 11-三甲基十二烷-2, 6, 10-三烯基或3, 7, 11，15-四甲基十六烷-2-烯基。3. 如权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，L1及L2为-C0-0-，R1及R 2为十三烷基、 十五烷基、十七烷基、十九烷基、二i^一烷基、二十三烷基、（Z)-十三烷-8-烯基、（Z)-十五 烧 -8_烯基、（Z)-十七烧_5_烯基、（Z)-十七烧_8_烯基、（E)-十七烧_8_烯基、（Z)-十七 烷-10-烯基、（8Z，11Z)-十七烷-8, 11-二烯基、（8Z，11Z，14Z)-十...

【专利技术属性】
技术研发人员：洼山刚之，江良公宏，直井智幸，八木信宏，
申请(专利权)人：协和发酵麒麟株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP