早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱及诊断模型制造技术

本发明专利技术公开了一种早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱，由表达上调的miR-152，miR-148b-3p，以及表达下调的miR-3187-3p,miR-15b-5p,miR-27a-3p,miR-30a-5p构成。所述早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱中特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物，如SEQIDNO：1～13所示。本发明专利技术还提供了一种早期膀胱癌血清miRNAs诊断模型，利用以下公式：logit(P＝BC)＝0.439+0.1775*(miR-152)+0.0767*(miR-148b-3p)－0.475*(miR-3187-3p)－0.2395*(miR-15b-5p)－0.625*(miR-27a-3p)－0.1693*(miR-30a-5p)计算，用于膀胱癌的早期诊断，经ROC曲线分析，此血清miRNAs模型对膀胱癌具有较高的诊断效率，高于传统的尿液脱落细胞学,此模型能够诊断膀胱癌早期患者(Ta和T1)。

【技术实现步骤摘要】
早期膀胱癌血清m i RNAs特异表达谱及诊断模型
本专利技术涉及早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱，其逆转录引物和检测引物，以及诊断模型，属于医学诊断
。
技术介绍
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在我国其发病率和死亡率均居泌尿系统肿瘤的首位，且近年有逐渐上升的趋势。20% -30%的膀胱癌病人初诊时已发生肌层浸润，而在最初诊断为非侵袭性膀胱癌的病人中，约15%的膀胱癌病人五年内发展为侵袭性膀胱癌。因此，早期诊断和早期治疗是改善膀胱癌预后、降低死亡率的关键。目前，用于膀胱癌的诊断方法主要包括膀胱镜、尿脱落细胞学及影像学检查等。膀胱镜检查虽然具有较高的诊断效能，但该检查方法的有创性限制了其在膀胱癌筛查中的广泛应用；尿液脱落细胞学检查虽特异性较高，但敏感性较低，尤其对低分级肿瘤的敏感性仅为20%~40%，且易受监测这主观因素的影响；CT和超声检查不易发现膀胱内较小的病变，对膀胱癌分期预测具有一定的有限性。寻找临敏感性高和特异性高的早期肿瘤标志物，建立一种安全有效的血清学膀胱癌诊断方法是临床亟待解决的难题。MicroRNA(miRNAs)是一类广泛分布于真核生物的高度保守的、非蛋白编码的单链小分子RNAs，通过对靶mRNA降解或翻译抑制，在转录后水平调节靶基因的表达，进而调控细胞分化、生长、代谢和凋亡等功能。以往研究证实，miRNAs在肿瘤中异常表达，与肿瘤的发生、发展、转移和预后存在密切的联系。近年来研究发现，血清中存在丰富且稳定的miRNAs，通过对比分析肿瘤患者和对照组血清中miRNAs表达谱，发现不同肿瘤具有其特定的miRNAs表达谱，为肿瘤的无创性早期诊断提供了新的依据。因此，确定膀胱癌miRNAs特异表达谱，筛选差异表达的miRNAs，建立膀胱癌血清miRNAs诊断模型，有助于实现对膀胱癌的早期诊断。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供了膀胱癌患者血清miRNA特异表达谱，及其逆转录引物和检测引物、检测试剂盒，以及诊断模型，为临床上膀胱癌的早期发现和早期治疗提供支持。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案:一种早期膀胱癌miRNAs特异表达谱，由上调表达的miR-152, miR-148b_3p以及下调表达的 miR-3187_3p, miR-15b_5p, miR-27a_3p, miR-30a_5p 构成。所述miRNAs来自外周静脉血的血清。所述膀胱癌miRNAs特异表达谱中特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物,如下: ((l)miR-152的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:1所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:2所示:SEQIDNO: I:[0011 ] 5 ’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCAAGTTC-3，；SEQIDNO:2:5’ -ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATGACAGA-3’ ；(2)miR-148b-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:3所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:4所示:SEQIDNO:3:5， -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAAAGTT-3，；SEQIDNO:4:5’ -ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATCACAGAA-3’ ；(3)miR-3187-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:5所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:6所示:SEQIDNO:5:5’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCGCGCAG-3’ ；SEQIDNO:6:5，-ACACTCCAGCTGGGTTGGCCATGGGGCT-3，；(4)miR-15b-5p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:7所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:8所示:SEQIDNO:7:5’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGTAAACC-3’ ；SEQIDNO:8:5，-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACATCATGG-3，；(5)miR-27a-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:9所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:10所示:SEQIDNO:9:5’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCGGAACT-3’ ；SEQIDNO:10:5，-ACACTCCAGCTGGGTTCACAGTGGCTAAGT-3，；(6)miR-30a-5p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:11所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:12所示:SEQIDNO: 11:5’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCTTCCAGT-3’ ；SEQIDNO:12:5，-ACACTCCAGCTGGGTGTAAACATCCTCGAC-3，；(7)六种miRNAs的通用反向检测引物如SEQIDNO:13所示:SEQIDNO:13:5，-TGGTGTCGTGGAGTCG-3，。一种用于早期膀胱癌诊断用试剂盒或生物芯片，包括上述特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物。一种早期膀胱癌血清miRNAs诊断模型。具体如下:运用以下公式计算:1git (P = BC) = 0.439+0.1775* (miR-152)+0.0767* (miR-148b-3p)-0.475*(miR-3187-3p) — 0.2395*(miR-15b_5p) — 0.625*(miR-27a_3p)—0.1693*(miR-30a-5p)公式中的“(miR-152) ”、“(miR-148b_3p) ”、“ (miR-3187_3p) ”、“miR-15b_5p) ”、“miR-27a-3p”、“miR-30a-5p”分别表示相对应的miRNAs的表达量。一种利用上述诊断模型诊断的方法，如下:首先，利用上述特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物测定待诊断患者的血清中六种miRNAs的表达量，包括miR-152，miR-148b-3p, miR-3187_3p，miR-15b_5p，miR-27a_3p 和 miR-30a_5p，然后，运用下述公式计算:logit (P = BC) = 0.439+0.1775* (miR-152)+0.0767* (miR-148b-3p)-0.475*(miR-3187-3p) — 0.2395*(miR-15b_5p) — 0.625*(miR-27a_3p)—0.1693*(miR-30a-5p)将六种miRNAs的表达量分别输入Matlab软件(该软件为所属领域的常规软件，为现有技术中已有的软件)，若1git (P = BC)为1，可以判断为膀胱癌；若1git (P = BC)为0，判断为非膀胱癌。本专利技术首先基于临床常规收集的非侵袭性膀胱癌患者、侵袭性膀胱癌患者及对照者血清样本筛查差异本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种早期膀胱癌miRNAs特异表达谱，其特征在于：由上调表达的miR‑152，miR‑148b‑3p，以及下调表达的miR‑3187‑3p，miR‑15b‑5p，miR‑27a‑3p，miR‑30a‑5p构成。

【技术特征摘要】
1.一种早期膀胱癌miRNAs特异表达谱，其特征在于:由上调表达的miR-152，miR-148b-3p,以及下调表达的 miR-3187_3p，miR-15b_5p，miR-27a_3p，miR-30a_5p 构成。2.根据权利要求1所述的早期膀胱癌miRNAs特异表达谱，其特征在于:所述miRNAs来自外周静脉血的血清。3.权利要求1所述的早期膀胱癌miRNAs特异表达谱中特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物，其特征在于:包括以下引物: (1)miR-152的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:1所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:2 所示: SEQIDN0: I:5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCAAGTTC_3’ ；SEQIDNO:2:5’ -ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATGACAGA-3’ ； (2)miR-148b-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:3所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:4所示:SEQIDNO:3:5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAAAGTT_3’ ；SEQIDNO:4:5’ -ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATCACAGAA-3’ ； (3)miR-3187-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:5所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:6所示:SEQIDNO:5:5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCGCGCAG_3’ ；SEQIDNO:6:5’ -ACACTCCAGCTGGGTTGGCCATGGGGCT-3’ ； (4)miR-15b-5p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:7所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:8所示:SEQIDNO:7:5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGTAAACC_3’ ；SEQIDNO:8:5’ -ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACATCATGG-3’ ； (5)miR-27a-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:9所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:10所示:SEQIDNO:9:5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCGGAACT_3’ ；SEQIDNO:10:5’ -ACACTCCAGCTGGGTTCACAGTGGCTAAGT-3’ ； (6)miR-30a-5p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:11所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:12所示:SEQIDNO:11:5’ -CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCTTCCAGT-3’ ；SEQIDNO:12:5’ -ACACTCCAGCTGGGTGTAAACATCCTCGAC-3’ ； (7)六种miRNAs的通用反向检测引物如SEQIDNO:13所示:SEQIDNO:13:5’ -TGGTGTCGTGGAGTCG-3’。4.一种用于早期膀胱癌诊断用试剂盒或生物芯片，其特征在于:包括特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物，如下: (1)miR-152的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列如SEQIDNO:1所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO:2所示: SEQIDNO: I:.5’ _CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCAAGTTC_3’ ；SEQIDNO:2:5’ -ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATGACAGA-3’ ； (2)miR-148b-3p的逆转录引物和前向检测引物:逆转录引物的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：王传新，杜鲁涛，蒋秀梅，张欣，杨咏梅，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东;37