T细胞活化的抑制剂制造技术

本发明专利技术提供一种双特异性生物制品，包含对CTLA-4特异性的配体和对pMHC复合物特异性的配体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞活化的抑制剂对相关申请的交叉引用本申请要求下述美国临时申请的权益：2011年6月30日提交的61/503,282号，其全部内容通过援引并入本申请。专利技术背景使用新鲜分离的、离体扩增的或体外诱导的Treg的细胞疗法在自身免疫性疾病或器官移植的模型中已经显示Treg的过继性转移能够恢复Treg相对效应T细胞的平衡，从而控制与这些疾病相关的自身免疫力(Allanetal.,(2008)Immunol.Rev.223:391-421；Jiangetal.,(2006)Expertreviewofclinicalimmunology2:387-392；Rileyetal.,(2009)Immunity30:656-665；Tangetal.,(2012)Journalofmolecularcellbiology4:11-21)。然而，使用过继性转移作为治疗策略在临床转化上面临若干挑战。从人类受试者外周血中能够分离的自身Treg的数目有限，并且对Treg的高度离体扩增可能改变它们的功能性和/或纯度。由于分离的Treg是多克隆的，它们可能对非目标的效应T细胞产生泛免疫抑制功能。重要的是，Treg的可塑性(plasticity)是一个严重的挑战(Bluestoneetal.,(2009)NatRevImmunol9:811-816；Zhouetal.,(2009a)CurrOpinImmunol21:281-285)，因为过继转移的Treg可能丧失Foxp3表达并重新分化成Th17细胞(Koenenetal.,(2008)Blood112:2340-2352.)或致病性记忆T细胞(Zhouetal.,(2009b)NatImmunol10:1000-1007)，从而提高了加重自身免疫或炎症的风险。可以以抗原特异性方式原位诱导Treg生成的治疗剂相比于过继Treg细胞疗法可能有优势。细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4；CD152)是一种公认的T细胞应答负调节物，对T细胞内稳态和自身耐受的维持有重要作用。CTLA-4与共刺激分子CD28同源，并拥有相同的配体：CD80(B7.1)和CD86(B7.2)，这些配体在抗原呈递细胞(APC)的表面上表达。然而，APC上的CD80/CD86对效应T细胞上CD28和CTLA-4的不同的结合导致相反的后果：CD28触发T细胞活化，而CTLA-4导致T细胞抑制。由于CD28在T细胞上组成型表达，而CTLA-4仅在T细胞活化之后才被诱导，并在2-3日之后达到峰值(Jagoetal.,(2004)Clinical&ExperimentalImmunology,136:463-471)，因此在CTLA-4接合之前可能已经发生了大范围的T细胞活化。因此，CTLA-4的主要作用是充当防止过度T细胞应答的防卫，而非抑制T细胞活化。然而，如果CTLA-4过早被其配体接合，然后与T细胞受体(TCR)交联，可能提前减弱TCR信号传导，导致T细胞抑制和应答过低，或无应答(anergy)。该观点已经通过多种方法得到了实验验证，包括下述：(i)通过在珠子上共固定(co-immobilization)或介由第二种抗体来用激动性抗CTLA-4抗体交联T细胞活化性抗体(抗-CD3/抗-CD28)(Blairetal.,(1998)J.Immunol.160:12-15；KrummelandAllison,(1996)JExpMed183:2533-2540；Walunasetal.,(1996)J.Exp.Med.183:2541-2550)；(ii)在APC上用分子手段构建针对CTLA-4的表面连接的激动性scFv(Fifeetal.,(2006)J.Clin.Invest.116(8):2252-61；Griffinetal.,(2001)J.Immunol.Methods.248(1-2):77-90；Griffinetal.,(2000)J.Immunol.164(9):4433-42)；和(iii)将特异性识别APC上的抗原的抗体与激动性抗CTLA-4抗体化学交联(Lietal.,(2007).J.Immunol.179(8):5191-203；Raoetal.,(2001)Clin.Immunol.101(2):136-45；Vasuetal.,(2004)J.Immunol.173(4):2866-76)。恢复Treg对效应T细胞的平衡是治疗自身免疫性疾病的一种有前景的手段。然而，涉及Treg转移的细胞疗法有某些不足之处。因此，急切需要能够以抗原特异性方式诱导Treg产生的治疗手段(例如CTLA-4)用于自身免疫性疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术涉及配体，所述配体在T细胞活化的早期将配体接合的(ligand-engaged)细胞毒性T淋巴细胞抗体-4(CTLA-4)与T细胞受体(TCR)交联，从而弱化TCR信号传导，导致T细胞抑制。为了开发能抑制T细胞活化的作用剂，制作了一种双特异性融合蛋白，其包含多个部分，这些部分可选择性结合并活化CTLA-4并将其共连接(co-ligate)于TCR。与现有技术的手段不同，该双特异性融合蛋白被工程构建为使MHC与CTLA-4交联，然后二者都被拉向(drawnto)TCR，从在免疫突触内CTLA-4/MHCII/TCR三分子复合物。在同种异体MLR中将配体接合的细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)与一种包含突变的小鼠CD80和淋巴细胞活化抗原-3的双特异性融合蛋白(BsB)交联弱化了TCR信号传导和T细胞向Foxp3+调节性T细胞(Treg)的直接分化。如本文中描述的，抗原特异性Treg也可以在抗原特异性环境下被诱导。用BsB短期处理非肥胖糖尿病(NOD)小鼠少许延迟了自身免疫性1型糖尿病(T1D)的发病，同时在血液中Treg短暂增加。然而，用BsB更长期地处理NOD动物显著延迟了疾病发病，而且还减少了表现糖尿病的动物的发生率。对于保持无糖尿病的BsB处理小鼠的胰脏进行的组织病理学分析揭示在胰岛周围有与其他CD3+T细胞及非T细胞白细胞混在的Treg存在。该胰岛周围炎(peri-insulitis)伴随的侵袭性胰岛炎极少，而且没有对产生胰岛素的β-细胞的破坏。因此，能够接合CTLA-4和MHCII，并间接地将其与TCR共连接的双功能蛋白可能在体内诱导抗原特异性Treg以保护小鼠免遭T1D或其他自身免疫性疾病。具体地，本专利技术描述了双特异性融合蛋白，它们将CTLA-4交联到pMHCII复合物。例如，描述了一种包含突变的小鼠CD80(CD80w88a)和淋巴细胞活化抗原-3(LAG-3)的双特异性融合蛋白，其被工程构建为同时接合CTLA-4并将其藉由pMHCII交联于TCR。因此，在第一个方面，提供一种双特异性生物制品，其包含对CTLA-4特异性的配体和对pMHC复合物特异性的配体。在一个方面，本专利技术提供一种双特异性生物制品，其包含对CTLA-4特异性的配体和对pMHC复合物特异性的配体。根据本专利技术的双特异性生物制品能够将T细胞上存在的CTLA-4与抗原呈递细胞(APC)上的肽MHC(pMHC)复合物交联。肽MHC复合物被T细胞上的相关本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.06.30 US 61/503,2821.一种双特异性生物制品，其包含选自CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的对CTLA-4特异性的配体和选自LAG-3的对pMHC复合物特异性的配体，其中所述CD80或CD86与LAG-3被接头分隔开来。2.根据权利要求1的双特异性生物制品，其中所述接头是聚氨基酸序列和抗体Fc域中的一种或多种。3.根据权利要求2的双特异性生物制品，其中所述聚氨基酸序列是G9(Gly-9)。4.根据权利要求1的双特异性生物制品，其中所述对CTLA-4特异性的配体是CD80。5.根据权利要求4的双特异性生物制品，其中CD80被突变而增加了对CTLA-4的特异性。6.根据权利要求5的双特异性生物制品，其中所述CD80是包含选自下组的至少一个突变的人CD80：W84A,K71G,K71V,S109G,R123S,R123D,G124L,S190A,S201A,R63A,M81A,N97A和E196A。7.根据权利要求6的双特异性生物制品，其中所述CD80中的突变是W84A或E196A。8.根据权利要求7的双特异性生物制品，其中所述LAG-3被突变而增加了对pMHCII的特异性。9.根据权利要求8的双特异性生物制品，其中所述LAG-3是包含选自下组的至少一个突变的人LAG-3：R73E,R75A,R75E和R76E。10.根据权利要求8的双特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱云翔，J卡曼，R韦，C蒋，S程，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：
国别省市：