胎儿有核红细胞的检测制造技术

一方面，本发明专利技术涉及从样本中分离胚胎有核红细胞(FNRBC)的方法，包括：使样本与特异性识别CD147的试剂接触，从而制成一种混合物；保持该混合物处于在所述试剂和样本中的CD147之间形成复合物的状态下；以及从混合物中分离所述复合物；从而从样本中分离FNRBC。在其他的实施方式中，本发明专利技术涉及检测样本中FNRBC的方法，包括：使样本与特异性结合CD147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种组合；保持该组合处于在所述抗体和样本中的FNRBC之间形成免疫复合物的状态下；以及检测组合中是否形成免疫复合物；其中，如果检测到免疫复合物，则在样本中存在FNRBC。另一方面，本发明专利技术进一步包括从去核的RBCs中分离FNRBCs的方法、检测产前异常和/或胎儿性别的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】一方面，本专利技术涉及从样本中分离胚胎有核红细胞(FNRBC)的方法，包括：使样本与特异性识别CD147的试剂接触，从而制成一种混合物；保持该混合物处于在所述试剂和样本中的CD147之间形成复合物的状态下；以及从混合物中分离所述复合物；从而从样本中分离FNRBC。在其他的实施方式中，本专利技术涉及检测样本中FNRBC的方法，包括：使样本与特异性结合CD147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种组合；保持该组合处于在所述抗体和样本中的FNRBC之间形成免疫复合物的状态下；以及检测组合中是否形成免疫复合物；其中，如果检测到免疫复合物，则在样本中存在FNRBC。另一方面，本专利技术进一步包括从去核的RBCs中分离FNRBCs的方法、检测产前异常和/或胎儿性别的方法。【专利说明】胎儿有核红细胞的检测
本专利技术涉及细胞标记物用于从样本中检测、离析和/或分离至少一种胎儿有核红细胞的用途。
技术介绍
产前诊断提供了有关尚未出生的胎儿的健康状况的重要信息并且包括有创伤性检查法和无创伤性检查法。Steele和Bregg在1966年利用羊膜穿刺术进行了第一次可靠的基因诊断。此后，孕早期绒膜绒毛取样(CVS)被证明是安全可靠的早期产前诊断方法。尽管二者均为创伤性技术并潜藏着胎儿流产的潜在风险，但它们仍被认为是产前诊断的金标准。因此，其正在逐渐被无创伤性产前诊断(NIPD)法(其中，将从母体循环中获得的胎儿细胞/遗传物质用于进行产前诊断)所取代。特别是，母体循环中的无细胞DNA、mRNA和胎儿细胞的识别，为Niro用于诊断胎儿染色体病和单基因缺陷提供了可能性。然而，从母体循环中获得的胎儿遗传物质相当不足以提供关于染色体病的可靠信息。特别是，母体循环中的无细胞DNA相当不足以提供用于诊断的完整的染色体信息(例如，异倍体)，且其还昂贵。另一方面，胎儿细胞是用于检测染色体异常的有希望的候选者，但其细胞数量很少。特别是，利用在母体血液中循环的胎儿细胞有望用于异倍体的检测和提供完整的胎儿遗传信息。在此，主要的限制仍在于其在母体循环中的稀缺性并且缺乏有效的分离技术。此外，这些细胞中的某些可能是从前次妊娠存留下来的，不能作为当前胎儿状态的指示。众所周知，产前诊断能够及早识别先天性的出生缺陷及损害胎儿存活的其他危险因素，进而有助于早期介入从而避免并发症并减轻父母的担忧。目前可用的各种方法中，对于从母体循环系统中分离的人胎儿成红血球细胞OiFEs)和/或胎儿有核红细胞(FNRBCs)的诊断，会成为最可靠并且无创伤性的对策。这是由于FNRBCs具有独特的识别标志，并且其存在是当前妊娠的确切指示，因此被视为用于早期孕早期Niro的潜在候选者。特别是，目前的方法常规地遵循获取用于染色体和单基因病的产前诊断(例如羊膜穿刺术、绒膜绒毛取样和脐穿刺)的胎儿细胞，带有虽小而固有的流产的危险(0.5-4%)。来自孕早期母体血液中的胎儿DNA有望成为目前的产前诊断方法的无创伤性替代方案。由于胎儿成红血球细胞的稀缺，迄今尚无法成功地识别和/或分离胎儿成红血球细胞。对于胎儿成红血球细胞的研究仅仅依靠细胞的异源培养，考虑到母体细胞和其他杂质的影响，其可能不能提供准确的信息。胎儿成红血球细胞在体外的成活率差也严重制约了对该类细胞进行进一步分析和研究的可能性。迄今，尚无对于原始胎儿有核红细胞具有特异性的抗体。因此，需要提供胎儿有核红细胞的新的标记物。
技术实现思路
本专利技术限定在所附的独立权利要求中。本专利技术的一些可选择的特征限定在所附的从属权利要求中。本专利技术涉及一种从样本中检测、分离和/或离析至少一种胎儿有核红细胞(FNRBC)的方法，包括:a)用离心法在包含选自1.077-1.120g/ml的密度的密度梯度介质中处理样本；b)使所述样本与在至少20，000的浓度下的特异性结合⑶147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种混合物；c)保持该混合物处于在试剂和样本中的CD147之间形成复合物的状态下；以及d)从混合物中分离所述复合物；从而从样本中检测、分离和/或离析FNRBC。此处所展现的是，⑶147可以是用于从样本中检测、分离和/或富集胎儿有核红细胞(FNRBC)的表面标记物。该FNRBC可以进一步分析其产前异常。因此，此处还提供用于检测FNRBC和/或获得产前诊断的无创伤性方法。在其他的【具体实施方式】中，本专利技术涉及检测样本中FNRBC的方法，包括使样本与特异性结合CD147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种组合；保持该组合处于在所述抗体和样本中的FNRBC之间形成免疫复合物的状态下；以及检测其中是否形成免疫复合物；其中，如果检测到免疫复合物，则在样本中存在FNRBC。本专利技术还在另一方面进一步包括检测产前异常和/或胎儿性别的方法。【专利附图】【附图说明】图1A-D为⑶147在FNRBCs和成人去核红细胞(AARBCs)上的差速免疫细胞化学染色(differential immunocytochemical staining)的图像。(A)阴性对照(省略第一抗体)；(B)抗CD 147在AARBCs上弱的/不能检测的免疫染色；(C-D)抗CD 147在FNRBCs和AARBCs的混合物上的免疫染色；可见，与在AARBCs上的染色相反，在FNRBCs上的染色强。图1E为显示用Adobe Photoshop制图软件和光度柱状图计算的FNRBCs (n=450)和AARBC (n=358)的平均强度值(任意单位亮度)的盒形图，其具有显著差异(p〈0.001曼-怀二氏检验(Mann-Whitney test)。图2A是显示利用DynabeacUMACS或FACS的来自模型混合物的使用抗CD147抗体的FNRBC的平均(％土SEM)回收率和纯度的条形图，以Bonferroni校正AN0VA，*P〈0.01和**Ρ〈0.001。图2Β为用于从标记有与FITC结合的抗⑶147抗体的模型混合物中富集FNRBCs的荧光激活细胞分选(FACS)设门策略(gating strategy)的图像。(i)标记有与FITC结合的抗⑶147抗体的AARBCs的侧向分散(对照)。(ii)标记有与FITC结合的抗⑶147抗体的模型混合物(FNRBCs和AARBCs)的侧向分散。门控区(gated area)P2 (FITC-高/SSC-高)和P3 (FITC-高/SSC-低)相当于靶细胞群FNRBCs。Pl门控区相当于AARBCs。P4门控区相当于碎片。图3为利用DynabeacUMACS和FACS分离技术用抗CD147抗体从模型混合物中富集FNRBCs的离心涂片细胞的图像。(A)Dynabea分离-阳性部分，(B)Dynabead分离-阴性部分，(C)MACS分离-阳性部分，(D)MACS分离-阴性部分，(E)FACS分离-门控区P2，(F)FACS分离门控区P3。FNRBC(虚线箭头)和AARBC(实线箭头)。赖特(Wright)染色(200x)。(Olympus BX61, Pennsylvania, USA)。图4为来自TOP前母血(pre-TOP maternal blood)的e_球蛋白阳性FNRBCs的免疫细胞化学鉴定的图像(x400) (Olympus BX本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从样本中检测、分离和/或离析至少一种胎儿有核红细胞(FNRBC)的方法，包括：a)用离心法在包含选自1.077‑1.120g/ml的密度的密度梯度介质中处理样本；b)使样本与在至少1:20,000的浓度下的特异性结合CD147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种混合物；c)保持该混合物处于在所述试剂和样本中的CD147之间形成复合物的状态下；以及d）从混合物中分离所述复合物；从而从样本中检测、分离和/或离析FNRBC。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮沙·布蒂里·马幼淋，速酷马·颇努萨米，普里亚·卡当派，马海施·楚兰尼，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG