硝酸纤维素膜富集体液蛋白质组蛋白的用途制造技术

本发明专利技术涉及硝酸纤维素膜富集体液蛋白质组蛋白的用途，特别是硝酸纤维素膜富集尿液蛋白质组蛋白、血清蛋白质组蛋白、血浆蛋白质组蛋白、脑脊液蛋白质组蛋白和组织液蛋白质组蛋白的新用途。本发明专利技术还涉及使用硝酸纤维素膜富集体液蛋白质组蛋白的方法，以及富集体液蛋白质组蛋白的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜)的新用途，特别是硝酸纤维素膜富集体液，尤其是血清、血浆、尿液、脑脊液、组织液中的蛋白质组蛋白的新用途。
技术介绍
本领域技术人员熟知硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜)在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。其中它主要用于分子杂交。杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，其中先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。NC膜是人类研究最早的微滤膜之一，至今己有百年的历史。NC属于纤维素衍生物的一种，有一定亲水性但不溶于水，可溶于有机溶剂，如丙酮，微溶于醇类，对核酸等大分子物质具有非特异性吸附作用。在生物学上的应用主要有酶联免疫斑点实验，分离DNA、RNA、内毒素、蛋白质等生物大分子物质，Southern斑点实验,Western斑点实验等。NC膜对蛋白质的吸附力分为两部分，即离子作用力和非离子作用力，主要来源于三种作用:(I)载体上所带的硝基所引起的永久偶极距与蛋白质分子上所带的极性基团所引起的多种静电吸附力，(2)氢键，(3)疏水作用力。近年来蛋白质组学技术取得了很大进展，体液蛋白质组学由于包含了大量关于机体健康的信息，在临床上具有重要的影响，其中尿液蛋白质组学是体液蛋白质组学的一个重要组成部分。尿液采集简便易行，其中富含多种蛋白及小分子多肽，可以反映肾脏、膀胱、前列腺及其他系统的生理功能和疾病状态。在疾病状态时，可能存在着尿蛋白量和尿蛋白成分的异常。因此，完全有可能将尿中出现的一些特殊蛋白成分作为特异性的“生物标志物”(biomarker),用于诊断疾病或监测疾病的进程。现有技术中富集尿蛋白的方法包括有机溶剂沉淀法、超速离心法、冻干法和超滤法等。但是，现有的蛋白提取方法较为繁琐，大量的样品长期储存需占用较大空间。为了克服现有技术的不足之处，本专利技术探索用硝酸纤维素(nitrocellulose，NC)膜收集蛋白使之应用于临床蛋白质组学研究。
技术实现思路
因此，本专利技术的第一方面涉及一种硝酸纤维素膜在制备富集体液蛋白质组蛋白膜制品中的应用，优选地，体液蛋白质组中至少一半种类的蛋白均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的95-100%均被富集在硝酸纤维素膜上，最优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的100%均被富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组中的蛋白均以其天然含量成比例富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组蛋白中的白蛋白以相当于其天然存在比例更少的比例被富集。优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括尿液蛋白质组蛋白、血浆蛋白质组蛋白、血清蛋白质组蛋白、脑脊液蛋白质组蛋白和组织液蛋白质组蛋白。优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括将体液一次性通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，或者将体液循环通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，优选地，体液一次性通过硝酸纤维素膜的流速无限制，更优选地，该流速为0.lml/min 1000ml/min,优选地,体液循环通过硝酸纤维素膜的循环时间在15小时以下，优选地，体液在O 10°C下通过硝酸纤维素膜，更优选地，体液在冰浴条件下通过硝酸纤维素膜；优选地，所述体液在通过硝酸纤维素膜前通过低速离心预先去除不溶物。优选地，所述的硝酸纤维素膜的孔径和孔径均一度无特殊要求，优选孔径为0.22 μ m或0.4 μ m ;优选地，所述硝酸纤维素膜单层使用或多层叠加或多层分隔使用；优选地，硝酸纤维素膜的边缘形状无特殊要求，以能与配套容器配合使用、让体液仅通过硝酸纤维素膜膜孔通过为限。本专利技术的第二方面涉及一种富集体液蛋白质组蛋白的方法，包括将体液通过硝酸纤维素膜以得到体液蛋白质组蛋白，优选地，体液蛋白质组中的至少一半种类的蛋白均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的60 %、70 %、80 %、90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^； 100%均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的95-100 %均被富集在硝酸纤维素膜上，最更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的100%均被富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组中的蛋白均以其天然含量成比例富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组蛋白中的白蛋白以相当于其天然存在比例更少的比例被富集。优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括尿液蛋白质组蛋白、血浆蛋白质组蛋白、血清蛋白质组蛋白、脑脊液蛋白 质组蛋白和组织液蛋白质组蛋白。优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括将体液一次性通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，或者将体液循环通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，优选地，体液一次性通过硝酸纤维素膜的流速无限制，更优选地，该流速为0.lml/min 1000ml/min,优选地,体液循环通过硝酸纤维素膜的循环时间在15小时以下，优选地，体液在O 10°C下通过硝酸纤维素膜，更优选地，体液在冰浴条件下通过硝酸纤维素膜；优选地，所述体液在通过硝酸纤维素膜前通过低速离心预先去除不溶物。优选地，所述的硝酸纤维素膜的孔径和孔径均一度无特殊要求，优选孔径为0.22 μ m或0.4 μ m ;优选地，所述硝酸纤维素膜单层使用或多层叠加或多层分隔使用；优选地，硝酸纤维素膜的边缘形状无特殊要求，以能与配套容器配合使用、让体液仅通过硝酸纤维素膜膜孔通过为限。本专利技术的第三方面涉及一种用于执行上述第二方面的富集体液蛋白质组蛋白的方法的试剂盒，其包括硝酸纤维素膜、配套容器及使用该硝酸纤维素膜的说明书，其中使用时硝酸纤维素膜被置于配套容器中或者硝酸纤维素膜被预先置于配套容器中，以将配套容器分隔为上下两个或多个空间，从而使体液仅能通过膜从配套容器的一个空间进入另一个空间，以及可选地，将配套容器加压或减压的设备。换言之，由于尿液等体液中某些蛋白的变化与疾病特别是肾脏的疾病的发生、发展有着密切的联系，通过体液蛋白质组学技术有可能发现疾病如肾脏疾病的早期诊断标志物。其中，尿液蛋白质组研究中尿液的收集及蛋白富集方法的选择直接影响后期鉴定的蛋白种类及疾病差异蛋白标志物的发现。目前富集体液蛋白质组蛋白如尿液蛋白质组蛋白的方法包括有机溶剂沉淀法、超速离心法、冻干法和超滤法等，但已有的方法都有一定的局限性。本领域技术人员曾对以上几种方法进行了比较，发现冻干法富集尿液蛋白的总量最多，但种类最少；超滤法富集蛋白的总量和种类都不是最好；有机溶剂沉淀法虽然富集尿蛋白总量稍逊于冻干法，但富集蛋白种类最多，且重复性较好。还有人比较了几种不同的有机溶剂，综合富集蛋白总量、蛋白种类、重复性和分离效果，丙酮沉淀富集尿蛋白效果最佳。因此，本专利技术尝试用硝酸纤维素膜(NC膜)来富集体液蛋白质组蛋白，尤其是尿液蛋白质组蛋白，并将其富集的蛋白与现有技术中丙酮沉淀法富集的蛋白进行比较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硝酸纤维素膜在制备富集体液蛋白质组蛋白膜制品中的应用，优选地，体液蛋白质组中至少一半种类的蛋白均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的95?100％均被富集在硝酸纤维素膜上，最优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的100％均被富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组中的蛋白均以其天然含量成比例富集在硝酸纤维素膜上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪姣，贾露露，高友鹤，李明喜，李雪梅，李学旺，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：