制造包含VL结构域的结合蛋白的小鼠制造技术

提供了经遗传修饰的小鼠和用于制造和使用它们的方法，其中所述小鼠包括用至少一个轻链V基因区段和至少一个轻链J基因区段替代全部或基本上全部免疫球蛋白重链V基因区段、D基因区段和J基因区段。提供了小鼠，其制造包含与重链恒定区可操作连接的轻链可变结构域的结合蛋白。提供了结合蛋白，其含有免疫球蛋白轻链可变结构域，其包括与重链恒定区相融合的、经体细胞超突变的轻链可变结构域。提供了经修饰的细胞，胚胎和小鼠，其编码用于制造所述结合蛋白的序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
提供了免疫球蛋白样结合蛋白，其包含与免疫球蛋白轻链可变结构域相融合的免疫球蛋白重链恒定区，还提供了结合蛋白，其具有与轻链恒定结构域相融合的免疫球蛋白轻链可变结构域，以及与重链恒定结构域相融合的免疫球蛋白轻链可变结构域。还提供了表达此类结合蛋白的细胞，制造它们的小鼠，以及相关的方法和组合物。背景抗体通常包含四聚体结构，其具有两条相同的重链，每条重链包含与重链可变结构域(Vh)相融合的重链恒定区(Ch)，所述重链与同轻链可变结构域(')相融合的轻链恒定区(CJ相缔合。对于典型的人IgG，抗体分子大小大致为约150kDa至约170kDa(例如，对于IgG3，其包含较长的铰链区)，这取决于IgG的亚类(例如，IgGl，IgG3，IgG4)和可变区的(变化的)长度。在典型的抗体中，Vh与\结构域相缔 合以形成结合靶抗原的结合位点。因此，关于亲和力和特异性的抗体的特点可大部分地取决于Vh和\结构域的特点。在人和小鼠中的典型抗体中，Vh结构域与λ或K'结构域相结合。然而，也已知的是可制造这样的'结构域:其在没有同源Vh结构域(例如，在抗体的情境中天然表达且与特定\结构域相缔合的Vh结构域)的情况下特异性结合靶抗原，而且可以分离这样的Vh结构域:其在没有同源'结构域的情况下特异性结合靶抗原。因此，基于免疫球蛋白的结合蛋白的有用的多样性通常是由产生特定％或'(以及体细胞超突变，在其发生的程度上)的重组以及同源Vh/'对的组合所赋予的。开发组合物和方法来开拓其它的多样性来源将是有用的。本领域中需要基于免疫球蛋白结构的结合蛋白，这包括免疫球蛋白可变区例如轻链可变区，且包括相对于传统抗体显示出提高的多样性的结合蛋白。也存在对于制造有用的结合蛋白的其它方法和动物的需求，所述结合蛋白包括:包含多种轻链免疫球蛋白可变区序列的结合蛋白。还需要用于基于免疫球蛋白的结合蛋白的有用形式，其提供用于从中选择的结合蛋白的增强的多样性，以及免疫球蛋白可变结构域的增强的多样性，这包括用于产生体细胞突变的和克隆选择的免疫球蛋白可变结构域的组合物和方法，所述免疫球蛋白可变结构域用于例如制造人治疗剂。专利技术概要一方面，描述了结合蛋白，其包含免疫球蛋白可变结构域，所述可变结构域衍生自轻链(即kappa(K)和/或lambda ( λ ))免疫球蛋白可变结构域,但不是来自全长重链免疫球蛋白可变结构域。还提供了用于制造结合蛋白的组合物和方法，包括经遗传修饰的小鼠。一方面，提供了核酸构建体，细胞，胚胎，小鼠和方法，用于制造包含一个或多个K和/或λ轻链可变区免疫球蛋白序列及免疫球蛋白重链恒定区序列的蛋白，其中包括包含人λ或K轻链可变结构域和人或小鼠重链恒定区序列的蛋白。一方面，提供了小鼠，其包含免疫球蛋白重链基因座，所述基因座包括用一个或多个轻链可变区(')基因区段以及一个或多个轻链连接区(Jj基因区段替代内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座处的一个或多个免疫球蛋白重链可变区(Vh)基因区段，重链多样性(Dh)基因区段，和重链连接(Jh)基因区段。一方面，提供了小鼠，其包括免疫球蛋白重链基因座，所述基因座包含用一个或多个\基因区段以及一个或多个I基因区段替代全部或基本上全部VH，Dh及Jh基因区段，以在内源重链基因座(VLh基因座)处形成'基因区段序列，其中所述VLh基因座能够与内源小鼠Ch基因重组以形成重排的基因，其衍生自'基因区段，叉基因区段和内源小鼠Ch基因。在一个实施方案中，所述\区段是人在一个实施方案中，所述叉区段为人叉。在具体的实施方案中，所述\和叉区段是人\和人叉区段。在一个实施方案中，用至少六个人VK基因区段和至少一个Jk基因区段替代全部或基本上全部％，011以及Jh基因区段。在一个实施方案中，用至少16个人Vk基因区段(人Vk)和至少一个Jk基因区段替代全部或基本上全部Vh，D1^P Jh基因区段。在一个实施方案中，用至少30个人Vk基因区段和至少一个Jk基因区段替代全部或基本上全部VH，D1^P Jh基因区段。在一个实施方案中，用至少40个人V K基因区段和至少一个Jk基因区段替代全部或基本上全部VH，Dh和Jh基因区段。在一个实施方案中，所述至少一个J K基因区段包含两个、三个、四个或五个人J K基因区段。在一个实施方案中，所述'区段为人Vk区段。在一个实施方案中，所述人Vk区段包含4-1，5-2，7-3，2-4，1-5和1-6。在一个实施方案中，所述κ '包含3-7，1-8，1-9，2-10,3-11,1-12,1-13,2-14,3-15,1-160 在一个实施方案中，所述人 V κ 区段包含 1-17，2-18，2-19，3-20，6-21，1-22,1-23，2-24，3-25，2-26，1-27，2-28，2-29和 2-30 在一个实施方案中，所述人 Vk 区段包含 3-31，1-32，1-33,3-34,1-35,2-36,1-37,2-38,1-39 和 2-40 在一个实施方案中，所述Vl区`段为人V K区段且包含4-1，5-2，7-3，2-4，1-5，1-6，3-7，1-8，1-9，2-10，3-11，1-12，1-13，2-14，3-15和 1-16。在一个实施方案中，所述 V κ 区段还包含 1-17，2-18，2-19，3-20，6-21，1-22,1-23，2-24，3-25，2-26，1-27，2-28，2-29 和2-30。在一个实施方案中，所述 Vk 区段还包含 3-31，1-32，1-33，3-34，1-35，2-36，1-37，2-38，1-39 和 2-40。在一个实施方案中，所述'区段为人VX区段且包含人λ轻链基因座的簇(Cluster)A的片段。在具体的实施方案中，所述人λ轻链基因座的簇A的片段从hV λ 3_27延伸至hV λ 3-1 ο在一个实施方案中，所述'区段包含人λ轻链基因座的簇B的片段。在具体的实施方案中，所述人λ轻链基因座的簇B的片段从hV λ 5-52延伸至hV λ 1-40。在一个实施方案中，所述' 区段包含人λ轻链可变区序列，其包含簇A的基因组片段和簇B的基因组片段。在一个实施方案中，所述人λ轻链可变区序列包含簇A的至少一个基因区段和簇B的至少一个基因区段。在一个实施方案中，所述\区段包含簇B的至少一个基因区段和簇C的至少一个基因区段。在一个实施方案中，所述Vl 区段包含 hV λ 3-1，4-3，2-8, 3-9, 3-10, 2-11 和 3-12。在具体的实施方案中，所述'区段包含从νλ 3-12跨至νλ 3-1的人λ轻链基因座的连续序列。在一个实施方案中，所述连续序列包含至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12个hV λ。在具体的实施方案中，所述hVA包括3-1，4-3，2-8，3-9，3-10，2-11和3-12。在具体的实施方案中，所述hV λ包含从V λ 3-12跨至V λ 3-1的人λ基因座的连续序列。在一个实施方案中，所述hV λ包含13至28个或更多的hV λ。在具体的实施方案中，所述 hV λ 包括 2-14，3-16，2-18，3-19, 3-21,3-22, 2-23, 3-25 和 3-27 在具体的实施方案中，所述h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳德，S·史蒂文斯，C·古尔，K·A·霍西阿瓦，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：
国别省市：