本发明专利技术是一种富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法及应用。取富含蜕皮激素的植物原料，用乙醇回流提取，过滤，浓缩，离心。离心的上清液经脱色，大孔树脂柱层析纯化，浓缩，干燥，即得到标准提取物。该方法简单易行，生产周期短，质量稳定可控，易于规范化批量制备和工业化生产，应用该方法得到的提取物经HPLC指纹图谱检测相似度达99%以上。可应用于制备固定制剂作为降低血糖、抗风湿关节炎的药物，以及作为天然化妆品的原料，还可以用于动物养殖业。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然产物化学和健康产品领域，具体地说是一种富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法及应用。
技术介绍
蜕皮激素(ecdysterone)为天然存在的留酮类化合物，其结构图如图I所示，主要是蜕皮激素(β-ecdysone)。也包括具有同样的以6_酮_7_烯_27_留体为基本骨架的天然产物。蜕皮激素具有特殊的生理功能，是天然药物、保健食品、天然化妆品的活性有效物质。植物中蜕皮激素及其类似物的发现，为蜕皮激素的大量制备提供了天然资源。目前，从植物中提取蜕皮激素的方法，多以水加热提取后，用乙酸乙酯等有机溶剂萃取，硅胶柱层析纯化。不仅提取率较低，而且操作繁复，成本较高，不适用于工业化生产。且产品常伴有乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂残留，不容易除去，不利于环保。已公开或授权的有关蜕皮激素提取和应用的专利，只提供一种植物提取蜕皮激素的方法，均采用多种有机溶剂提取，产品只提供蜕皮激素的含量，未能建立标准提取物的制备与分析检测技术。例如，中国专利201010039119. I公布了一种从露水草中提取蜕皮激素的方法。该方法以水或乙醇(或甲醇)提取露水草根，提取液浓缩后碱化，用正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，通过阴离子交换树脂纯化。该方法仅以露水草为原料，采用多种有机溶剂萃取，操作繁复，成本较高，不利于工业化生产和环保。
技术实现思路
本专利技术的目的是改变传统的用乙酸乙酯等有机溶剂萃取制备蜕皮激素的工艺，提供一种适于工业化生产的新方法，批量制备富含蜕皮激素的植物标准提取物以及它的应用。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术的技术方案如下 1、将富含蜕皮激素的植物原料加入10倍量的乙醇回流提取，共提取三次，每次I小时，过滤，合并滤液得乙醇提取液； 2、将乙醇提取液放置，冷却至室温，过滤，将滤液以一定流速通过D941大孔树脂层析柱，树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10，以含水低级醇洗脱，洗脱量为2-3BV,同时，用薄层层析法TLC检测指导洗脱，TLC的条件，展开剂乙酸乙酯；显色剂10 %硫酸乙醇液,收集富含蜕皮激素部位的洗脱液,浓缩至小体积,通过大孔树脂HPD-100层析柱，大孔树脂与样品的重量比为10:1-0. 5，柱径高比为1:8-10，以含水低级醇梯度洗脱，用TLC法检测指导洗脱，TLC的条件为，展开剂乙酸乙酯；显色剂10 %硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液； 3、将洗脱液减压浓缩，干燥，干燥方法可以冷冻干燥，也可采用真空干燥、加热干燥、喷雾干燥和减压干燥等。按上述方法得到的产物为白色至类白色粉末，经HPLC (高效液相色谱)技术分析检测，为不同植物原料的不同规格的富含蜕皮激素的系列植物标准提取物。富含蜕皮激素的植物原料来源于鸭跖草科植物珍珠露水草(Cyanotisarach-noidea C. B. Clarke)、觅科植物牛膝 iAchyranthes bidentata Blume)。菊科植物漏芦(Rhaponticum uni-florum (L. ) DC.),唇形科植物筋骨草Makino)等,及其同属植物。所述的柱层析用的填充剂为大孔树脂，包括但不限于DM-130，D-941, D-2026,D-101, DA-201, D-1400, AB-8, CAD-40, CAD-45, ADS-5, HPD-500，HPD-100，以及XAD-2, XAD-4, Diaion 型号的树脂。所述的柱层析分离用的洗脱剂，可以是水和低级醇，包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等中的一种低级醇。采用不同比例的水和低级醇混合溶剂进行梯度洗脱。需要根据 对植物标准提取物的不同标准要求，以及具体的植物原料和投样量，优选合适的工艺参数，并应用TLC和(或)HPLC技术进行在线质量监测。本专利技术所述的方法具有如下优点仅用水和低级醇提取制备富含蜕皮激素的植物标准提取物，得率高、制备过程简单易行、生产周期短、质量稳定可控、无毒、无三废污染，适宜于批量制备和工业化生产，应用该方法得到的提取物经HPLC指纹图谱检测相似度达99%以上。本专利技术提取用的低级醇，可回收使用。本专利技术使用的柱层析填充剂材料可以重复使用，生产成本低。本专利技术的富含蜕皮激素的植物标准提取物可按药品和保健食品生产的规范要求，作为生理活性天然物质，制成各种口服制剂，包括片剂，胶囊剂，颗粒剂，口服液等。该植物标准提取物具有促进胶元蛋白的合成、促进细胞生长、诱导神经细胞分化、保护心脑血管、降低血糖、降低血脂、抗心律不齐、抗疲劳、促智、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、促进伤口愈合、美白保湿、强健肌肉，以及活血化瘀、通经活络，除湿镇痛等生理活性，可用于健康产品，作为药品、保健食品和功能性化妆品的天然原料，还可以用于养殖业。本专利技术的富含蜕皮激素的植物标准提取物可以作为功能性天然产物，在化妆品或皮肤外用品中广泛使用。为达到局部施用的目的，可以含水的醇溶液形式、油状溶液形式、水包油或油包水或多相乳状液形式，以及含水或油状凝胶形式，制成软膏，奶液，泡沫，露，气溶胶等剂型，以及固体制剂等。附图说明图I蜕皮激素的化学结构图。图2 β.-蜕皮激素对照品的HPLC图。图3露水草标准提取物ECA65 (66. 8%)的HPLC图。图4露水草标准提取物ECA80 (84. 7%)的HPLC图。图5露水草标准提取物ECA95 (98. 5%)的HPLC图。图6七批露水草标准提取物ECA80的HPLC指纹图谱。图7露水草标准提取物ECA65，ECA80，ECA95及β.-蜕皮激素对照品的TLC图。具体实施例方式实施例I :露水草标准提取物的制备(1)露水草根15kg，加10倍量乙醇，回流提取三次，每次I小时，过滤，合并滤液，得乙醇提取液； (2)乙醇提取液放置冷却，至室温，过滤，滤液通过D941大孔树脂层析柱。树脂与提取液的重量比为1:15，柱径高比为1:8;以乙醇洗脱；洗脱量为3BV，用薄层层析法TLC检测指导洗脱。薄层层析的条件，展开剂乙酸乙酯；显色剂10 %硫酸乙醇液；收集富含蜕皮激素洗脱部位，浓缩至小体积，通过HPD-100大孔树脂层析柱。大孔树脂与样品的重量比为10:1,柱径高比为I: 8；以含水乙醇梯度洗脱。用TLC检测指导洗脱。TLC的条件如上述；收集富含蜕皮激素部位的洗脱液； (3)将洗脱液减压浓缩，干燥，得到白色至类白色粉末；即为富含蜕皮激素的露水草标准提取物； (4)按上述方法的制备过程中，在TLC和HPLC指导下，收集得到不同规格的富含蜕皮激素的露水草标准提取物。经HPLC定量分析，分别为露水草标准提取物ECA65 (蜕皮激素的含量不低于65%)，ECA80 (蜕皮激素的含量不低于80%)和ECA95 (蜕皮激素的含量不低于95%)； (5)按上述方法制备得到的富含蜕皮激素的露水草标准提取物，其蜕皮激素的含量按以下方法进行测定 仪器与试剂=HPLC仪器为Agilentl200型高效液相色谱仪。色谱纯乙腈和甲醇，超纯水。色谱条件及检测波长的选择十八烷基键合硅胶填充的分析型层析柱(如Agilent ZORBAX SB C18 (4.6X250 mm);流动相乙腈-甲醇-水=1:2:4 ;柱温30 °C ;流速I ml/min ;波长242 nm。对本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：1）将富含蜕皮激素的植物原料加入10倍量的乙醇回流提取，共提取三次，每次1小时，过滤，合并滤液得乙醇提取液；2）将乙醇提取液放置，冷却至室温，过滤，将滤液以一定流速通过D941大孔树脂层析柱，树脂与提取液的重量比为1:10？20？,？柱径高比为1:8？10，以含水低级醇洗脱，洗脱量为2？3BV，同时，用薄层层析法TLC检测指导洗脱，TLC的条件，展开剂：乙酸乙酯；显色剂：10？%硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液，浓缩至小体积，通过大孔树脂HPD？100层析柱，大孔树脂与样品的重量比为10:1？0.5，柱径高比为1:8？10，以含水低级醇梯度洗脱，用TLC法检测指导洗脱，TLC的条件为，展开剂：乙酸乙酯；显色剂：10？%硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液；？3）将洗脱液减压浓缩，干燥，得到富含蜕皮激素的植物标准提取物。
【技术特征摘要】
1.一种富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤进行 1)将富含蜕皮激素的植物原料加入10倍量的乙醇回流提取，共提取三次，每次I小时，过滤，合并滤液得乙醇提取液； 2)将乙醇提取液放置，冷却至室温，过滤，将滤液以一定流速通过D941大孔树脂层析柱，树脂与提取液的重量比为1:10-20，柱径高比为1:8-10，以含水低级醇洗脱，洗脱量为2-3BV，同时，用薄层层析法TLC检测指导洗脱，TLC的条件，展开剂乙酸乙酯；显色剂10 %硫酸乙醇液,收集富含蜕皮激素部位的洗脱液,浓缩至小体积,通过大孔树脂HPD-100层析柱，大孔树脂与样品的重量比为10:1-0. 5，柱径高比为1:8-10，以含水低级醇梯度洗脱，用TLC法检测指导洗脱，TLC的条件为，展开剂乙酸乙酯；显色剂10 %硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液； 3)将洗脱液减压浓缩，干燥，得到富含蜕皮激素的植物标准提取物。2.根据权利要求I所述的富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法，其特征在于所述的富含蜕皮激素的植物为露水草、牛膝、漏芦、筋骨草。3.根据权利要求I所述的富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法，其特征在于柱层析用的填充剂为大孔树脂，包括但不限于DM-130，D-941, D-2026, D-101, DA-201,D-140...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾恕芬，丁艳芬，胡金波，杨崇仁，张颖君，
申请(专利权)人：玉溪市维和生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。