【技术实现步骤摘要】
一种关节修复蛋白组合物及其制备方法和其应用
[0001]本专利技术属于生物医药
,具体涉及一种具有关节修复蛋白组合物及其制备方法和其应用。
技术介绍
[0002]老年人关节损伤及退行性病变或软骨损伤等问题呈现逐年递增。关节损伤(如关节外伤性病变、退变性骨关节病变等)为临床常见病症,包括难愈性创面病变、膝关节骨性关节病变、膝关节软骨磨损、软骨损伤等。
[0003]关节损伤及关节软骨损伤的治疗或修复方式包括消炎、镇痛(止痛)、理疗、针灸、关节置换、干细胞治疗、射频消融、软骨细胞移植、骨软骨移植、工程软骨,如以中医理疗和氨糖为代表的的物理治疗和营养、以几丁糖和透明质酸为代表的润滑缓解、以PRP为代表的抗炎治疗、以及关节镜和人工关节为代表的关节置换等,除关节置换外,均以缓解症状和延缓病程为主,缺乏真正有效且安全的治疗方式。
[0004]关节软骨没有血管、神经、淋巴系统分布,含有的软骨细胞量少、迁移与增殖能力有限,关节软骨损伤难以自愈。当关节软骨的血液供应和神经支配出现故障时易导致关节损伤,进而影响关节修复能力。如不进行及时的有效治疗和修复损伤,则损伤将继续加重并引发骨关节性病变,导致关节疼痛、关节肿胀或运动障碍,甚至由此导致不可逆的病理变化及关节退行性改变,影响患者的行动和致残。关节损伤修复是一个长期、渐进的缓慢过程。及时修复损伤细胞可以显著改善、治疗相关病变。
[0005]细胞及微生物受到外界刺激及外源应激物(包括冷、热、酸、碱、电流、辐射、化学物质等)应激诱导时会因应激反应而诱导细胞及微生物
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种关节修复蛋白组合物,其制备包括下述步骤:(1)在细胞蛋白提取物中加入20U/mL
‑
35U/mL的核酸酶或全能核酸酶的任一种或其组合,将其置于37℃
±
1℃条件下酶解15min
‑
40min,制得酶解液,将其置于2℃
‑
4℃条件下备用;(2)在2℃
‑
8℃条件下,将步骤(1)制得的酶解液用洗脱溶剂配置成5
‑
15mg/ml后,过色谱柱,洗脱流速为0.1
‑
1ml/min,监测并收集紫外波长为280nm的洗脱部位,即得,其中,洗脱溶剂由50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)中含300mmol/L氯化钠组成。2.如权利要求1所述的蛋白组合物,所述关节修复蛋白组合物的分子量为25kDa
‑
245kDa,优选为50kDa
‑
200kDa。3.如权利要求1
‑
2任一项所述的蛋白组合物,所述细胞蛋白提取物的制备包括如下步骤:S
‑
1:将密度为5.0
×
106个/mL
‑
1.0
×
107个/mL的间充质传代细胞置于含有DMEM/F12 40
‑
50%、RPMI 1640 40
‑
50%、牛血清蛋白(BSA)0.1
‑
2%、表皮细胞生长因子(EGF)1
‑
15ug/mL、成纤维细胞生长因子(FGF)1
‑
15ug/mL、胰岛素转铁蛋白1
‑
15ug/mL、复方氨基酸(18AA)0.01
‑
0.1%和2
‑
10μmo l/L应激物的培养基中,再将其置于37.0℃
±
0.5℃、5%
±
1.0%CO2条件下培养10h
‑
14h后,分离,洗涤,收集细胞,其中,所述的应激物选自化合物1
‑
16的任一种或其组合,
S
‑
2:将收集细胞按照密度为5.0
×
106个/mL<...
【专利技术属性】
技术研发人员:王宇,高文勇,陈琳,李建军,
申请(专利权)人:北京达尔文细胞生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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