一种发酵制备纽莫康定B0的方法技术

本发明专利技术提供了一种在发酵过程中补料的稳定、高效的生产纽莫康定B0的方法，通过在发酵过程中添加乳酸、甘露醇或γ

【技术实现步骤摘要】
一种发酵制备纽莫康定B0的方法


[0001]本专利技术属于微生物发酵领域，具体涉及卡泊芬净中间体纽莫康定B0的微生物发酵制备方法。

技术介绍

[0002]醋酸卡泊芬净是由默沙东(Merck Sharp&Dohme，MSD)开发的一种脂肽类抗真菌药物，2001年卡泊芬净获FDA批准上市，商品名为Cancidas(科赛斯)，剂型为注射剂。卡泊芬净是一种抗真菌药，它通过抑制(1，3)
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β
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D
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葡聚糖合成酶，从而破坏真菌细胞壁的完整性，适用于治疗对其它治疗无效或不耐受的侵袭性曲霉菌病。作为新一类棘白菌素类抗菌药物的代表，卡泊芬净具有选择性高、抗菌活性好、安全性高、耐药性少等方面的明显优势，加之产品专利保护接连届满失效，使其成为了全身抗真菌用药的研究热点。
[0003]纽莫康定类棘白菌素化合物是默沙东公司科学家发现并命名的，生产菌株是从西班牙马德里的洛索亚流域附近的水塘中分离出来的一株丝状真菌，属于无性繁殖的一个新属。作为卡泊芬净的前体，纽莫康定B0是目前最主要的优化研究对象，关于工业化生产纽莫康定B0，提升其单位则是研究热点。
[0004]CN108265096A提供了一种高效、稳定生产纽莫康定B0的方法，通过对霉菌Glarea lozoyensis的液态深层发酵，种子培养基和发酵培养基含有合适的碳源、氮源、无机盐和微量元素源，其中发酵培养基使用山梨醇作为主要碳源，并加入葡萄糖形成复合碳源，该方法能够在工业级发酵罐上稳定地生产，纽莫康定B0的产量达到2.5g/L。
[0005]CN106755224B涉及卡泊芬净发酵中间体的发酵方法，该方法采用稀配方培养基，发酵过程中流加乳糖和氨水，能够有效降低菌体粘度，提高通气效果，同时在发酵过程中严格控制pH。与此同时，在发酵液中补加维生素b5，该方法可将发酵单位提高至2000～2500mg/L。
[0006]CN108048512A公开了一种制备纽莫康定B0的发酵方法，将菌种Glarea lozoyensis接种于装有第一培养基的摇瓶中，培养得到菌源液；将菌源液接种于装有第二培养基的发酵罐中；通过曝气管向第二培养基中泵送无菌空气；发酵至24h后，通过曝气管向所述第二培养基中泵送含有氨气的无菌空气；发酵至60h后，通过插入所述第二培养基中的微生物培养板向所述第二培养基中流加甘露醇；发酵至72h后，收集发酵罐中的纽莫康定B0。实施例显示13d后收集所述发酵液中的纽莫康定B0的量为2580mg/L。
[0007]尽管现有技术已经公开了多个关于提升纽莫康定B0的发酵方法，但是似乎纽莫康定B0的发酵水平止步于此，很难进行提高，因此进一步提升纽莫康定B0的发酵水平，降低工业成本仍有着广泛的需求。

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种发酵制备纽莫康定B0的方法。
[0009]一种发酵制备纽莫康定B0的方法，包括在发酵过程中添加乳酸、甘露醇或γ
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氨基
丁酸中的一种或任意几种的组合。
[0010]具体地，一种发酵制备纽莫康定B0的方法，所述方法包括在发酵过程中添加乳酸，所述乳酸添加量为发酵液体积的0％
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0.3％(不含0％)，优选添加发酵液体积0.1％的乳酸；具体地，在发酵开始后的第4
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7天一次性添加0％
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0.3％(V/V)的乳酸，优选发酵培养的第6天一次性添加发酵液体积0％
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0.3％(不含0％)的乳酸，更优选地，发酵培养的第6天一次性添加发酵液体积0.1％的乳酸。
[0011]具体地，一种发酵制备纽莫康定B0的方法，所述方法包括在发酵培养开始后的第3
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6天开始，每天一次性添加1％
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2.5％(V/V)的甘露醇，直至发酵结束；优选第5天开始添加发酵液体积1％
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2.5％的甘露醇，直至发酵结束；进一步优选，从第5天开始每天一次性添加发酵液体积2％的甘露醇，直至发酵结束。
[0012]具体地，一种发酵制备纽莫康定B0的方法，包括在发酵培养开始后的第4
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7天，一次性添加发酵液体积0％
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0.05％(不含0％)的γ
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氨基丁酸；优选第6天一次性添加0％
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0.05％(不含0％)的γ
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氨基丁酸；更优选地，第6天一次性添加0.03％(V/V)的γ
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氨基丁酸。
[0013]进一步地，本专利技术提供了一种发酵制备纽莫康定B0的方法，所述方法包括在发酵开始后的第4
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7天一次性添加发酵液体积0％
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0.3％(不含0％)的乳酸、0％
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0.05％(不含0％)的γ
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氨基丁酸，更为优选地，在发酵培养的第6天一次性添加发酵液体积0％
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0.3％的乳酸、0％
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0.05％γ
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氨基丁酸，最优选地，在发酵培养的第6天一次性添加发酵液体积0.1％的乳酸、0.03％的γ
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氨基丁酸；所述方法还包括在发酵培养开始后的第3
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6天开始，每天一次性添加发酵液体积1％
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2.5％的甘露醇，直至发酵结束，优选在发酵培养开始后的第5天开始每天一次性添加1％
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2.5％的甘露醇，直至发酵结束，更为优选地，在发酵培养开始后的第5天开始每天一次性添加发酵液体积2％的甘露醇，直至发酵结束。
[0014]本专利技术所述的发酵制备纽莫康定B0的方法包括在发酵过程中添加乳酸、甘露醇或γ
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氨基丁酸中的一种或任意几种的组合，其中添加乳酸、甘露醇或γ
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氨基丁酸中的任意两种或三种时，所添加物质的添加量及添加方式与添加单一物质时相同。
[0015]本专利技术发酵使用的菌株为Glarea lozoyensis或其诱变的菌株，优选Glarea lozoyensis FIM2006071。
[0016]实施专利技术的发酵培养基包含碳源，所述碳源选自甘露醇、山梨糖醇、蔗糖、葡萄糖中的一种或多种；
[0017]所述发酵培养基还包含氮源，所述氮源选自棉籽精粉、玉米蛋白粉、酵母浸出粉、酵母粉、豆饼粉中的一种或多种；
[0018]所述发酵培养基还包含微量元素，所述微量元素选自磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸镁中的一种或多种；
[0019]所述发酵培养基还包含氨基酸，所述氨基酸为脯氨酸、苏氨酸中的一种或多种。
[0020]优选地，所述发酵培养基包括甘露醇、葡萄糖、豆饼粉、硫酸镁、脯氨酸、磷酸氢二钾、硫酸亚铁；
[0021]更为优选地，所述发酵培养基含甘露醇5％
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14％、葡萄糖1％
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4％、豆饼粉1％
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3.5％、硫酸镁0.01％<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于在发酵过程中添加乳酸、甘露醇或γ
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氨基丁酸中的一种或任意几种的组合。2.如权利要求1所述的发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于，在发酵过程中添加乳酸，优选乳酸添加量为发酵液体积的0％
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0.3％，进一步优选为0.1％。3.如权利要求2所述的发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于，在发酵开始后的第4
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7天一次性添加0％
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0.3％(V/V)的乳酸，优选发酵培养的第6天一次性添加0％
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0.3％(V/V)的乳酸，更优选地，发酵培养的第6天一次性添加发酵液体积0.1％的乳酸。4.如权利要求1所述的发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于，在发酵过程中添加甘露醇，优选在发酵培养开始后的第3
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6天开始，每天一次性添加发酵液体积1％
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2.5％的甘露醇，直至发酵结束；更优选地，在发酵培养第5天开始，每天一次性添加发酵液体积1％
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2.5％的甘露醇，直至发酵结束；最优选地，在发酵培养第5天开始，每天一次性添加发酵液体积2％的甘露醇，直至发酵结束。5.如权利要求1所述的发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于，在发酵过程中添加γ
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氨基丁酸；优选地，γ
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氨基丁酸添加量为发酵液体积的0％
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0.05％(V/V)，优选0.03％；更为优选地，在发酵开始后的第4
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7天一次性添加发酵液体积0％
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0.05％的γ
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氨基丁酸；优选第6天一次性添加发酵液体积0％
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0.05％的γ
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氨基丁酸；最优选地，发酵开始后的第6天一次性添加发酵液体积0.03％的γ
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氨基丁酸。6.如权利要求1所述的发酵制备纽莫康定B0的方法，其特征在于，在发酵开始后的第4
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7天一次性添加发酵液体积0％
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0.05％的γ
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氨基丁和0％
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0.3％的乳酸；优选第6天一次性添加发酵液体积0％
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0.05％的γ
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氨基丁酸和0％
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0.3％(V/V)的乳酸；更优选地，发酵开始后的第6天一次性添加...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯宏波，张宇，江乾森，葛倩倩，张茂华，
申请(专利权)人：杭州中美华东制药有限公司，
类型：发明
国别省市：