一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白多肽包含以SEQ ID No.1所示的序列的n个重复，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；任选地，在所述重组I型人源化胶原蛋白多肽的N末端包含能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白多肽具有促进细胞黏附的活性，所述重组蛋白的氨基酸序列选自天然胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体不会产生免疫反应，并且其制备方法简单，在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体而言，涉及一种重组I型人源化胶原蛋白多肽及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)是一类蛋白质家族，一般为白色、透明、无分支的原纤维，是皮肤和骨骼的基础支撑物，可以占到蛋白质总量的25％～35％，主要分布于人体的皮肤、血管、骨骼、筋腱、牙齿和软骨等处，是这些组织的主要基质和支架，保护并连结各种组织，在体内发挥着重要的生理功能。因此，胶原蛋白可以广泛的应用在医药和化妆品等行业中。根据胶原蛋白在体内的分布和功能特点，可以将胶原蛋白分成间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。间质型胶原蛋白分子占整个机体胶原的绝大部分，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白分子，Ⅰ型胶原蛋白主要分布于皮肤、肌腱等组织，在医学上的应用最为广泛。
[0003]然而，天然胶原蛋白不溶于水，性质不均一，很难被人体直接利用，往往需要利用化学手段处理之后才能使用。而且，当前市场上销售的胶原蛋白产品都是取自猪、牛、鱼等动物组织，难以避免病毒感染的风险，同时由于无法与人体相容，会导致免疫排斥和过敏症状的出现。如果从人胎盘原料中提取胶原蛋白，不仅来源有限，更面临法律的严惩。所以，目前胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。
[0004]生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原有的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥其真正的功能。大多数经过制备后的胶原蛋白产品拉伸强度较弱，纯胶原蛋白在体内降解较快，可能存在潜在的抗原性，以及由于胶原蛋白的来源、加工工艺和原料配比的差异，产品的营养成分及饲用价值也不相同，并且皮料在加工过程中不仅要接触许多化学物质，且容易受到细菌的污染，这些问题均严重限制了胶原蛋白的应用。虽然国外研究机构通过培育含人胶原蛋白基因的小鼠，得到了含有人胶原蛋白的乳汁，但是这样生产的成本过高，生产周期过长，无法投入大规模生产。
[0005]TEV Protease是一种在大肠杆菌中重组表达的带His标签(6
×
His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu
‑
Asn
‑
Leu
‑
Tyr
‑
Phe
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Gln
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Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S
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transferase(GST)、His或者其它标签。
[0006]因此，找到一种既能够被人体迅速吸收、制备方法简单易得、成本低廉，同时能够起到人体胶原蛋白功能和特性的产品是当务之急。

技术实现思路

[0007]专利技术要解决的问题
[0008]针对上述本领域中异源胶原蛋白生物活性低、容易诱发免疫反应，以及人源胶原蛋白生产成本高、周期长、无法大规模生产等一系列问题所导致的胶原蛋白利用率低的情
况，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽，同时提供了其制备方法和用途。
[0009]用于解决问题的方案
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白多肽，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白多肽包含以SEQ ID No.1所示的序列的n个重复，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；任选地，在所述重组I型人源化胶原蛋白多肽的N末端包含能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列。
[0011]进一步地，在上述重组I型人源化胶原蛋白多肽中，所述能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列包含SEQ ID No.4所示的序列；优选地，SEQ ID No.4所示的序列与SEQ ID No.1所示的序列直接相连。
[0012]进一步地，在上述重组I型人源化胶原蛋白多肽中，所述重组I型人源化胶原蛋白多肽包含：a.以SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；b.与SEQ ID No.3的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.3的氨基酸序列的细胞黏附效果；c.SEQ ID No.3的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.3的氨基酸序列的细胞黏附效果；或d.由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.3的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留SEQ ID No.3的氨基酸序列的细胞黏附效果，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0013]第二方面，本专利技术提供了编码上述重组I型人源化胶原蛋白多肽的多核苷酸。
[0014]第三方面，本专利技术提供了包含上述多核苷酸的表达载体。
[0015]第四方面，本专利技术提供了包含上述表达载体的宿主细胞。
[0016]第五方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白多肽的生产方法，其包括以下步骤：
①
在培养基中培养根据本专利技术第四方面中所述的宿主细胞并生产多肽；
②
收获并纯化所述多肽，优选用Ni柱和/或阴离子交换层析纯化所述多肽；和
③
任选地对所述多肽进行酶切，优选用TEV蛋白酶酶切所述多肽。
[0017]第六方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白多肽在制备产品中的用途，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第七方面，本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白多肽的产品，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0019]第八方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白多肽在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0020]专利技术的效果
[0021]通过上述技术方案的实施，本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白相比I型胶原蛋白的其他片段具有更加良好的细胞黏附效果，由于其氨基酸序列选自天然胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体不会产生免疫反应，同时其制备方法简单，在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。
附图说明
[0022]图1为重组I型人源化胶原蛋白TC1R4诱导表达后的蛋白电泳图；第一泳道为分子量Marker，第二泳道为纯化后的TC1R4蛋白；TC1R4蛋白的电泳检测分子量约为38kDa，对应
No.4)序列与首个重复序列的N端直接连接，即
[0033]ENLYFQGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGER本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白多肽，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白多肽包含以SEQ ID No.1所示的序列的n个重复，n为大于等于1的整数，其中当n为大于等于2的整数时，各重复序列之间是直接连接的；任选地，在所述重组I型人源化胶原蛋白多肽的N末端包含能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白多肽，其特征在于，所述能够通过TEV蛋白酶切除的氨基酸序列包含SEQ ID No.4所示的序列；优选地，SEQ ID No.4所示的序列与SEQ ID No.1所示的序列直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白多肽，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白多肽包含：a)以SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；b)与SEQ ID No.3的氨基酸序列具有90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.3的氨基酸序列的细胞黏附效果；c)SEQ ID No.3的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留SEQ ID No.3的氨基酸序列的细胞黏附效果；或d)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.3的氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，陆晨阳，兰小宾，何振瑞，王建，王玲玲，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：