本发明专利技术公开了两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物，所述联合药物包含有附子总生物碱或乌头碱、抗氧化剂牛磺酸和TLR3配体PolyIC，并提供了其制备方法和用于治疗肝癌的应用。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术提供的两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物，有效的抑制了肿瘤的生长，促进淋巴细胞的增殖、尤其是T淋巴细胞，PolyIC与牛磺酸促进IFN‑α的释放，与附子生物碱联合有助于维持其释放，从而保证抑瘤效应。
Preparation of two aconite alkaloids and their application in the treatment of liver cancer
The invention discloses two aconite alkaloid combination drugs for treating liver cancer, the combination drugs include aconite total alkaloid or aconitine, antioxidant taurine and TLR3 ligand polyic, and provides the preparation method and application for treating liver cancer. The beneficial effects of the invention are: the two aconite alkaloid combination drugs for the treatment of liver cancer provided by the invention effectively inhibit the growth of tumor, promote the proliferation of lymphocyte, especially T lymphocyte, polyic and taurine promote the release of IFN \u2011 \u03b1, and the combination with Aconite alkaloid helps to maintain its release, thus ensuring the anti-tumor effect.
【技术实现步骤摘要】
两种附子生物碱联合药物的制备及其在肝癌治疗中的应用
本专利技术涉及抗肿瘤药物领域，具体涉及附子总生物碱或乌头碱、联合已应用于临床的牛磺酸和PolyIC，构建肝癌治疗药物的制备方法和应用。
技术介绍
近年肝细胞癌(HCC)新发病例超过780000，死亡病例超过740000，其中一半来自中国。目前用于进展期HCC的药物仅索拉菲尼被美国FDA批准，肝癌患者较其他癌症更难以耐受传统的化疗药物，因此局部靶向、整体调节的策略治疗肝癌更可行。癌毒属于阴邪，附子是温阳第一要品。中药附子(AconitiLateralisRadixPraeparata)是毛茛科植物乌头的子根的加工品，辛、甘，大热，有毒，乌头类生物碱是附子中最主要的有效成分。附子的药理作用主要有镇痛抗炎作用、免疫调节作用等。附子在中医临床已作为一味主药用于治疗肿瘤，如李可应用附子逐渐加量的方剂，取得一定疗效。任丽娅等通过动物实验研究证实，附子提取物具有调节肝癌H22细胞相关信号传导通路，从而促进其凋亡，并发挥抑制细胞增殖的作用。附子总生物碱能用温阳的方法减慢体寒血瘀的小鼠的肿瘤的生长。附子对胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用，表现出明显的浓度和时间依赖性。附子对B淋巴瘤Raji细胞起到凋亡诱导作用，表现出对时间和浓度依赖的规律。乌头碱可以抑制肝癌细胞Bel-7402的增殖和活力，凋亡细胞和S期细胞的百分比增加，细胞显示出超微结构的分化特征；甲胎蛋白分泌减少，而白蛋白分泌增加，对Bel-7402细胞具有较强的细胞毒性。附子生物碱抑制炎症。肝炎病毒感染导致的过度炎症是肝癌的重要危险因素。乌头碱通过抑制NF-κB和NFATc1的激活以及细胞融合分子DC-STAMP的表达来抑制RAW264.7细胞中RANKL诱导的破骨细胞分化，抗炎治疗类分湿性关节炎。附子能通过激活ERK和Nrf2途径，减少慢性阻塞性肺病大鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞的数量，抑制炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β的释放。而IL-1β、IL-6是肝代偿性增生的重要因子，代偿性增生与HCC成正相关。肝癌患者往往伴有肝硬化免疫力低下，肿瘤相关因子抑制了免疫系统对肿瘤的识别、杀伤、清除，T细胞耗竭、致免疫耐受Treg细胞增多、Th17细胞增多；NK细胞功能抑制；肝脏微环境有大量的免疫调节细胞及抗原提呈细胞，通过改善肝脏微环境促进抗癌免疫力是可选方案。但癌症病人往往是多重免疫缺陷，靶向单一的免疫缺陷不足以诱导强烈的抗癌免疫力。因此有必要诱导多重免疫应答、多重抑瘤效应。PolyIC是TLR3激动剂，肝癌瘤内TLR3的高表达与生存期延长相关。小鼠模型及HCC病人样本研究发现PolyIC通过TLR3信号直接诱导肿瘤细胞的凋亡，促进IFN-γ释放活化NK细胞抑制肝再生，并诱导Th1、CD8+T、NK细胞的浸润对肝癌细胞发挥细胞毒作用。PolyIC能抑制肝纤维化及HCC细胞株的生长，其类似物PolyICLC联合索拉菲尼可提高小鼠免疫活性而抑制肿瘤进展，HCC临床I期研究发现瘤内及肌肉注射PolyIC联合放疗可诱导肿瘤微环境的免疫反应，是安全且患者耐受的。氧化应激在癌症中有重要作用已是共识。牛磺酸是有效的抗氧化剂，有抗炎作用。在肝脏中由甲硫氨酸和半胱氨酸合成，肝脏病人血清中牛磺酸、半胱氨酸及谷胱甘肽(GSH)浓度降低。体内一半的半胱氨酸转化为GSH，其余合成牛磺酸。预先给小鼠牛磺酸可预防过度炎症介质的释放，防止GSH及GSH合成酶RNA的减少，减轻急性肝损伤。牛磺酸抑制氧化损伤防止四氯化碳诱导的肝纤维化。说明牛磺酸有肝保护作用。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了以附子总生物碱或乌头碱为基础，联合抗氧化剂牛磺酸、TLR3配体PolyIC制备的能诱导机体免疫反应的肝癌治疗药物。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物，所述联合药物包含有附子总生物碱或乌头碱、抗氧化剂牛磺酸和TLR3配体PolyIC。进一步的，上述的两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物，所述联合药物中，附子总生物碱(或)乌头碱、牛磺酸每日给药1次，PolyIC隔两日给药1次。本专利技术的第二个目的是提供了上述两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物的制备方法，包括以下步骤：1)总生物碱的提取方法：称取附子100g，加入85％乙醇400ml，浸泡过夜；用可调式加热套热回流提取2h后过滤，2000rpm离心10min，抽滤；再重复提取4次；50～60℃减压浓缩；用12M盐酸调节pH值为4，离心；用10M氢氧化钠调节pH值为12，离心；上清用三氯甲烷(体积比为1∶1)萃取4次，减压浓缩。2)乌头碱水溶液的配制；称取3.6mg乌头碱，溶解于480ml蒸馏水中；3)牛磺酸水溶液的配制；称取10.75mg牛磺酸，溶解于336ml蒸馏水中；4)PolyIC水溶液的配制；称取32mgPolyIC，溶解于128ml蒸馏水中；5)将步骤1)提取的总生物碱或步骤2)得到的乌头碱分别与步骤3)得到的牛磺酸每日联合应用，步骤4)得到的PolyIC隔2日应用，制得治疗肝癌的联合药物。本专利技术的第三个目的是提供了上述两种肝癌治疗联合制剂在肝癌治疗中给药途径的应用。进一步的，上述的两种肝癌治疗联合制剂在肝癌治疗中给药途径的应用，所述应用是：1)附子总乌头碱及牛磺酸每日腹腔给药一次；2)附子总生物碱每日口服给药一次；3)PolyIC隔2日腹腔给药一次。本专利技术的第四个目的是提供了两种肝癌治疗联合制剂在肝癌治疗中给药浓度及量的应用。进一步的，上述的两种肝癌治疗联合制剂，所述两种肝癌治疗联合制剂在肝癌治疗中给药浓度及量的应用是将：1)附子总生物碱浓度稀释至0.2mg/ml，给药浓度为4mg/kg·天；2)乌头碱溶解至7.5ug/ml，给药浓度为0.15mg/kg·天；3)牛磺酸溶解至32mg/ml，给药浓度为640mg/kg·天；4)PolyIC溶解至0.25mg/ml，给药浓度为50ug/次·天。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的两种治疗肝癌的附子生物碱联合药物，有效的抑制了肿瘤的生长，促进淋巴细胞的增殖、尤其是T淋巴细胞，PolyIC与牛磺酸促进IFN-α的释放，与附子生物碱联合有助于维持其释放，从而保证抑瘤效应。其四个成分主要特性如下：1.附子总生物碱：是生附子按照上述方法提取的提取物，含有多种生物碱，可能靶向受体酪氨酸激酶如EGFR信号，抑制炎症因子IL-1β信号，IL-6的释放减少，抑制肝异常再生；抑制肝癌新生血管的形成及改变其物质代谢发挥抑瘤作用；靶向Treg表面EGFR下调其免疫抑制；2.乌头碱：其主要特性与附子总生物碱相同；3.PolyIC：PolyIC是一种合成的双链RNA，与TLR3特异结合，能够激活固有免疫应答，通过TLR3信号直接诱导肿瘤细胞的凋亡，促进IFN-γ释放活化NK细胞抑制肝再生，并诱导Th1、CD8+T、N本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.两种治疗肿瘤的联合制剂，其特征在于，所述联合制剂包括附子总生物碱(或)乌头碱、牛磺酸和PolyIC。/n
【技术特征摘要】
1.两种治疗肿瘤的联合制剂，其特征在于，所述联合制剂包括附子总生物碱(或)乌头碱、牛磺酸和PolyIC。
2.根据权利要求1所述的两种肝癌治疗联合制剂，其特征在于，附子总生物碱(或)乌头碱、牛磺酸每日给药一次，PolyIC隔两日给药一次。
3.根据权利要求1或2所述的两种肝癌治疗联合制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)总生物碱的提取方法：称取附子100g，加入85％乙醇400ml，浸泡过夜；用可调式加热套热回流提取2h后过滤，2000rpm离心10min，抽滤；再重复提取4次；50～60℃减压浓缩；用12M盐酸调节pH值为4，离心；用10M氢氧化钠调节pH值为12，离心；上清用三氯甲烷(体积比为1∶1)萃取4次，减压浓缩。
2)乌头碱水溶液的配制：称取3.6mg乌头碱，溶解于480ml蒸馏水中；
3)牛磺酸水溶液的配制：称取10.75mg牛磺酸，溶解于336ml蒸馏水中；
4)PolyIC水溶液的配制：称取32mgPolyIC，溶解于128ml蒸馏水中；
【专利技术属性】
技术研发人员：李青，杨凤鸽，李雯，张小芸，王颢，令亚琴，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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