用于人体HER2基因扩增状态检测的组合套装制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测人体HER2基因扩增状态的组合套装，所述套装包含DNA提取样本和检测单元。所述DNA提取样本包括用于分离和提取人体HER2基因和参照基因DNA及其片段的组合物。所述检测单元包括用于定量检测人体HER2基因和参照基因DNA及其片段的拷贝数量和比值的核酸。本发明专利技术所述组合套装实现了快速、准确的HER2基因扩增状态的检测。

A Combination Set for Detecting the Amplification Status of Human HER2 Gene

【技术实现步骤摘要】
用于人体HER2基因扩增状态检测的组合套装
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测人体HER2基因DNA及其片段扩增状态的组合套装。
技术介绍
人体表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2)基因又称HER2基因，定位于染色体17q12-21.32。HER2基因是一种原癌基因，具有抑制凋亡、促进增殖、增加肿瘤细胞侵袭力、促进肿瘤血管新生和淋巴管新生的功能。HER2蛋白通常只在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。研究表明30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过表达，如：乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等；其中20％～30％的原发性浸润性乳腺癌有HER2基因的扩增/过表达。HER2基因扩增/过表达不仅与肿瘤的发生发展相关，还是一个重要的临床治疗监测及预后指标，并且是肿瘤靶向治疗药物选择的一个重要靶点。
技术实现思路
目前常用的HER2基因扩增/过表达检测方法主要为免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)。由于受FFPE样本处理、HER2抗体选择、判读者经验和习惯等多种因素的影响，使用IHC检测HER2基因扩增/过表达的结果重复性和准确性不佳。而使用FISH检测HER2基因扩增/过表达，则面临操作过程复杂、检测流程时间长、检测试剂成本高、涉及的实验和检测仪器设备昂贵等实际问题。因此，现有HER2基因扩增/过表达的检测方法尚不能很好地满足检测需求。针对以上技术现状，本专利技术提供了一种用于检测人体HER2基因扩增/过表达的组合物套装，本专利技术通过组合套装可以利用数字PCR对人体HER2基因和参照基因DNA及其片段进行定量检测，从而实现HER2基因扩增/过表达的快速、便捷、灵敏、准确的检测。具体来说，本专利技术涉及如下内容：1.一组核酸，其为用于分别定量检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的拷贝数量的一组核酸，其中，所述参照基因为人体17号染色体着丝粒序列(CEP17)。2.根据项1所述的核酸，其中，所述一组核酸为用于DNA聚合酶链式反应(PCR)以分别扩增所述人体HER2基因及其片段和所述参照基因DNA及其片段的正向和反向引物，所述正向和反向引物对人体HER2基因DNA及其片段进行PCR扩增的区间位于HER2蛋白编码区(proteincodingregion)。3.根据项2所述的核酸，其中，所述正向和反向引物对人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段进行PCR扩增得到的产物的长度在60个碱基以下；优选地，其对HER2基因和参照基因进行PCR扩增的产物的长度为40-50个碱基。4.根据项2或3所述的核酸，其中，在所述正向或反向引物中至少一个引物的核酸序列的5’端包含一段非人源的DNA；优选地，所述非人源的DNA与现已发现的所有生物DNA序列既不相同，也不互补。5.根据项4所述的核酸，其中，所述非人源的DNA的长度为10-30个碱基；优选地，所述非人源的DNA的长度为15-20个碱基。6.根据项5所述的核酸，其中，所述非人源的DNA的序列互补于SEQIDNO：13或SEQIDNO：14所示的序列，其中，HER2探针：SEQIDNO：13CCTGAACCGCTCTTCGACEP17探针：SEQIDNO：14CGAAGACGTCGTGTAGG。7.根据项1～6中任一项所述的核酸，其中，所述一组核酸等同或互补于SEQIDNO：1-12序列中至少10个核苷酸长度的核酸，HER2正向引物-1：SEQIDNO：1GGTCACCTACAACACAGACAHER2反向引物-1：SEQIDNO：2TCGAAGAGCGGTTCAGGGATTGGGCATGGACTCAAACHER2正向引物-2：SEQIDNO：3CCCTCAACCTGCACTATTGAHER2反向引物-2：SEQIDNO：4TCGAAGAGCGGTTCAGGACTAACTCCTGCACAACACAHER2正向引物-3：SEQIDNO：5TGACTGTGTTAGGGAGAGGAHER2反向引物-3：SEQIDNO：6TCGAAGAGCGGTTCAGGCCAAATGGTCTGGCTCTACACEP17正向引物-1：SEQIDNO：7CACTTTGGAGGTTGGTTAGCCEP17反向引物-1：SEQIDNO：8CCTACACGACGTCTTCGCCCCAGTTGGCTTAGATCCTCEP17正向引物-2：SEQIDNO：9GAGGTTGGTTAGCAGGATCTCEP17反向引物-2：SEQIDNO：10CCTACACGACGTCTTCGAGATGCCACCATGTTTTGGCEP17正向引物-3：SEQIDNO：11AAACAAAGGCACAGCCACTTCEP17反向引物-3：SEQIDNO：12CCTACACGACGTCTTCGCAGTTGGCTTAGATCCTGCTA；进一步，优选所述一组核酸等同或互补于SEQIDNO：1-2和7-8序列中至少10个核苷酸长度的核酸。8.一种用于检测人体HER2基因扩增状态的组合套装，其包括：一组核酸，其为用于分别定量检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的拷贝数量的一组核酸，其中，所述参照基因为人体17号染色体着丝粒序列(CEP17)及其片段。9.根据项8所述的组合套装，其还包括：用于分离和提取人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的检测样本。10.根据项8或9所述的组合套装，其中，所述一组核酸为用于DNA聚合酶链式反应(PCR)以扩增人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的正向和反向引物，所述正向和反向引物对人体HER2基因DNA及其片段进行PCR扩增的区间位于HER2蛋白编码区(proteincodingregion)。11.根据项8或9所述的组合套装，其中，所述正向和反向引物对人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段进行PCR扩增得到的产物的长度在60个碱基以下；优选地，其对HER2基因和参照基因进行PCR扩增的产物的长度为40-50个碱基。12.根据项8或9所述的组合套装，其中，在所述正向或反向引物中至少一个引物的核酸序列的5’端包含一段非人源的DNA；优选地，所述非人源的DNA与现已发现的所有生物DNA序列既不相同，也不互补。13.根据项12所述的组合套装，其中，所述非人源的DNA的长度为10-30个碱基；优选地，所述非人源的DNA的长度为15-20个碱基。14.根据项13所述的组合套装，其中，所述非人源的DNA的序列互补于SEQIDNO：13或SEQIDNO：14所示的序列，其中，HER2探针：SEQIDNO：13CCTGAACCGCTCTTCGACEP17探针：SEQIDNO：14CGAAGACGTCGTGTAGG。15.根据项8或9所述的组合套装，其还包括：用于检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的PCR扩增产物的荧光探针；优选所述荧光探针为Taqman探针。16.根据项15所述的组合套装，其中，所述的Taqman探针与所述非人源的DNA部分互补；优选所述的Taqman探针与所述非人源的DNA全部互补。17.根据项16所述的组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组核酸，其为用于分别定量检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的拷贝数量的一组核酸，其中，所述参照基因为人体17号染色体着丝粒序列(CEP17)。

【技术特征摘要】
1.一组核酸，其为用于分别定量检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的拷贝数量的一组核酸，其中，所述参照基因为人体17号染色体着丝粒序列(CEP17)。2.根据权利要求1所述的核酸，其中，所述一组核酸为用于DNA聚合酶链式反应(PCR)以分别扩增所述人体HER2基因及其片段和所述参照基因DNA及其片段的正向和反向引物，所述正向和反向引物对人体HER2基因DNA及其片段进行PCR扩增的区间位于HER2蛋白编码区(proteincodingregion)。3.根据权利要求2所述的核酸，其中，所述正向和反向引物对人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段进行PCR扩增得到的产物的长度在60个碱基以下；优选地，其对HER2基因和参照基因进行PCR扩增的产物的长度为探针40-50个碱基。4.根据权利要求2或3所述的核酸，其中，在所述正向或反向引物中至少一个引物的核酸序列的5’端包含一段非人源的DNA；优选地，所述非人源的DNA与现已发现的所有生物DNA序列既不相同，也不互补。5.根据权利要求4所述的核酸，其中，所述非人源的DNA的长度为10-30个碱基；优选地，所述非人源的DNA的长度为15-20个碱基。6.根据权利要求5所述的核酸，其中，所述非人源的DNA的序列互补于SEQIDNO：13或SEQIDNO：14所示的序列，其中，HER2探针：SEQIDNO：13CCTGAACCGCTCTTCGACEP17探针：SEQIDNO：14CGAAGACGTCGTGTAGG。7.根据权利要求1～6中任一项所述的核酸，其中，所述一组核酸等同或互补于SEQIDNO：1-12序列中至少10个核苷酸长度的核酸，HER2正向引物-1：SEQIDNO：1GGTCACCTACAACACAGACAHER2反向引物-1：SEQIDNO：2TCGAAGAGCGGTTCAGGGATTGGGCATGGACTCAAACHER2正向引物-2：SEQIDNO：3CCCTCAACCTGCACTATTGAHER2反向引物-2：SEQIDNO：4TCGAAGAGCGGTTCAGGACTAACTCCTGCACAACACAHER2正向引物-3：SEQIDNO：5TGACTGTGTTAGGGAGAGGAHER2反向引物-3：SEQIDNO：6TCGAAGAGCGGTTCAGGCCAAATGGTCTGGCTCTACACEP17正向引物-1：SEQIDNO：7CACTTTGGAGGTTGGTTAGCCEP17反向引物-1：SEQIDNO：8CCTACACGACGTCTTCGCCCCAGTTGGCTTAGATCCTCEP17正向引物-2：SEQIDNO：9GAGGTTGGTTAGCAGGATCTCEP17反向引物-2：SEQIDNO：10CCTACACGACGTCTTCGAGATGCCACCATGTTTTGGCEP17正向引物-3：SEQIDNO：11AAACAAAGGCACAGCCACTTCEP17反向引物-3：SEQIDNO：12CCTACACGACGTCTTCGCAGTTGGCTTAGATCCTGCTA；进一步，优选所述一组核酸等同或互补于SEQIDNO：1-2和7-8序列中至少10个核苷酸长度的核酸。8.一种用于检测人体HER2基因扩增状态的组合套装，其包括：一组核酸，其为用于分别定量检测人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的拷贝数量的一组核酸，其中，所述参照基因为人体17号染色体着丝粒序列(CEP17)及其片段。9.根据权利要求8所述的组合套装，其还包括：用于分离和提取人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的检测样本。10.根据权利要求8或9所述的组合套装，其中，所述一组核酸为用于DNA聚合酶链式反应(PCR)以扩增人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段的正向和反向引物，所述正向和反向引物对人体HER2基因DNA及其片段进行PCR扩增的区间位于HER2蛋白编码区(proteincodingregion)。11.根据权利要求8或9所述的组合套装，其中，所述正向和反向引物对人体HER2基因及其片段和参照基因DNA及其片段进行PCR扩增得到的产物的长度在60个碱基以下；优选地，其对HER2基因和参照基因进行PCR扩增的产物的长度为40-50个碱基。12.根据权利要求8或9所述的组合套装，其中，在所述正向或反向引物中至少一个引物的核酸序列的5’端包含一段非人源的DNA；优选地，所述非人源的DNA与现已发现的所有生物DNA序列既不相同，也不互补。13.根据权利要求12所述的组合套装，其中，所述非人源的DNA的长度为10-30个碱基；优选地，所述非人源的DNA的长度为15-20个碱基。14.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：马竣，翁蓉蓉，
申请(专利权)人：北京达微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11